Bacillus subtilis木聚糖酶的纯化及其对小麦麸皮的作用

采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合,从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)固体培养基发酵产物中分离得到了两种木聚糖酶. 薄层色谱和高压液相色谱分析结果进一步表明它们具有内切木聚糖酶的活力,分别定义为xyl Ⅰ和 xyl Ⅱ.两种酶具有相同的最适反应温度(50℃)和最适pH值(7.0).另外,还研究了内切木聚糖酶 xyl Ⅱ对小麦麸皮不溶性膳食纤维的作用.纸色谱分析结果表明,酶解产物中含有阿魏酰低聚糖.

Bacillus subtilis自然感受态缺陷株蛋白质表达谱的初步分析

利用蛋白质双向电泳对枯草芽孢杆菌自然感受态缺陷突变株BR151pm感受态形成期的全细胞蛋白质进行比较分析,发现有28个蛋白质斑点出现变化。利用基质辅助激光解析/电离串联飞行时间质谱对其巾2个明显缺失的蛋白斑点进行分析鉴定,确定这2个蛋白质分别为直接参与自然感受态形成的Nin蛋白和RecA蛋白,进一步确证了BR151pm为自然感受态缺陷突变株。

枯草芽孢杆菌内切木聚糖酶的纯化与性质研究

建立了一种快速、简便分离纯化木聚糖酶的方法。采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合 ,从枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)固态培养基发酵产物中分离得到了 2种内切木聚糖酶 ,分别定义为xylⅠ和xylⅡ ,它们水解桦木木聚糖的主要产物有木二糖、木三糖和聚合度更高的木聚寡糖 ,没有木糖。SDS PAGE显示内切木聚糖酶xylⅡ为单肽链结构 ,分子质量为 98 8ku。内切木聚糖酶xylⅡ的酶反应最适温度为 5 0℃ ,酶反应的最适 pH为 7 0。Mn2 + 对xylⅡ酶反应具有促进作用 ,将酶活提高了 2 7倍 ,而Fe3+ 对该酶反应起完全抑制作用。

低聚木糖的制备及其对益生菌体外增殖的作用

针对玉米芯微波消解-内切木聚糖酶水解制备低聚木糖的工艺,以低聚木糖的得率为主体评价指标,通过单因素实验对影响低聚木糖得率的微波消解过程和内切木聚糖酶水解过程的因素与水平进行研究,并考察获得的低聚木糖对益生菌的体外增殖作用.结果表明:玉米芯酶法制备低聚木糖的最佳工艺条件为微波处理压力1.6 MPa,微波处理时间5 min,内切木聚糖酶用量140 U·g-1,酶解时间6 h;在最适条件下,玉米芯酶解液中低聚木糖的得率为82.5%,质量浓度为11.02 g·L-1;低聚木糖对益生菌的体外增殖实验表明,低聚木糖添加量在0.2%和0.4%时,分别可以对乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌起到最好的增殖作用,分别达到311%和183%,添加量进一步提高反而会抑制这2种菌的生长.

利用蛋白酶产生菌固态发酵去除豆粕中抗原蛋白

从实验室保藏的菌种中,筛选出固态发酵所需的高产蛋白酶菌株,进行豆粕发酵。以抗源蛋白去除情况作为考察指标,通过条件优化发现,在豆粕水分质量分数为45%,颗粒直径在1.0-2.0 mm,发酵温度35℃,发酵时间为50 h时,抗原蛋白的去除率在90%以上。通过十二烷基磺酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现抗源蛋白得到有效降解,分解为相对分子质量小于10 000的肽类物质。

芽孢杆菌在肉鸡肠道内的分布及对肠道菌群、消化酶活性的影响

考察枯草芽孢杆菌的芽孢在AA肉鸡肠道内的分布和随粪便的排出规律,及对肠道内细菌群落结构变化和肠道内消化酶活性的影响.试验选取240羽1日龄AA肉鸡,随机分为2组,每组6个重复,采用相同的无抗生素基础日粮饲养3 d后,对照组和试验组分别一次性灌喂无菌水或枯草芽孢杆菌的芽孢(1.5×108CFU?mL-1)各0.5 mL;在不同时间采样进行计数和酶活性测定,同时通过聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术分析此过程肉鸡粪便中细菌群落的变化.结果表明:灌喂的芽孢在十二指肠内开始萌发,以空肠的营养体数量最高,盲肠内则以芽孢为主;粪便中的芽孢数量在24 h时最高,达到7.9×104CFU?g-1,而后逐渐降低,在72 h后基本无法检出.PCR-DGGE结合主成分分析(PCA)表明:对照组与试验组鸡粪中的细菌群落结构存在较大差异,其中试验组中肠道有益菌——乳杆菌属(Lactobacillussp.)含量较对照组有明显提高;同时,灌喂芽孢12 h后,十二指肠内淀粉酶、胰蛋白酶和总蛋白酶活性,空肠内的脂肪酶活性和盲肠内的总蛋白酶活性均高于对照,差异有统计学意义(P<0.05).试验证实芽孢能在AA肉鸡肠道内萌发并停留超过72 h,并对提高肠道内消化酶活性和改善菌落结构发挥作用.

花生粕的枯草芽孢杆菌BSH001发酵及产物性质

为改善花生粕中的氨基酸平衡,减少花生蛋白质中的过敏原,将枯草芽孢杆菌BS H001用于花生粕的发酵,对发酵条件进行了优化,并研究了发酵后花生粕的部分性质.正交试验结果表明:枯草芽孢杆菌BS H001发酵花生粕的最优条件为含水量52%、发酵时间44 h、搅拌间隔8 h、灭菌时间45 min、硫酸铵含量4.0%,在此条件下发酵花生粕中的蛋白质含量达56.20%,比花生粕的提高了23.49%;发酵花生粕中非必需氨基酸、必需氨基酸和总氨基酸的含量分别提高了4.92%、43.97%和16.49%.SDS-PAGE电泳分析表明,经优化后第9、13、15、16组发酵花生粕中分子质量为63、48、41 ku的蛋白质大分子被全部降解.上述结果表明,BS H001发酵花生粕可成为动物可利用高蛋白质的来源.

16S rDNA和PCR-DGGE技术分析水晶肘花胀袋的微生物原因

为了探索真空包装肘花胀袋的原因,应用16S rDNA序列分析和聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术对从正常和胀袋的肘花产品中分离纯化到的14和18株菌进行种类比较分析。结果表明,胀袋组中含有对照组没有的细菌种类,这些菌株主要是芽孢杆菌(包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis))以及嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)和该属的另一株菌Stenotrophomonas pavanii);这些菌株主要是包括产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)在内的梭状芽孢杆菌(Clostridium sp.)和假单胞菌(Pseudomonassp.),推断芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属细菌的存在可能是引起产品胀袋从而使产品变质的主要原因。

一种快速分离检测产脂肽类生物表面活性剂枯草芽孢杆菌的方法

脂肽(Lipopeptide)是由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等微生物产生的一类具有较强表面活性的生物表面活性剂。枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因(sfp)是枯草芽孢杆菌中参与脂肽代谢的功能性基因。采用sfp基因PCR对从环境中得到的一组产生表面活性剂的微生物进行筛选,结合Tricine-SDS-PAGE电泳对PCR结果呈阳性的菌株的代谢粗初提物进行检测,初步鉴定得到两株枯草芽孢杆菌。进一步利用16S rDNA序列的系统发育学分析确定这两种菌株为枯草芽孢杆菌,并利用TLC、HPLC鉴定其产物为脂肽类表面活性剂,从而建立了一套快速分离检测产生脂肽类生物表面活性剂的枯草芽孢杆菌方法。

枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达(英文)

利用PCR技术扩增得到来源于枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶基因片段,并构建重组质粒pUC-T-GDH,然后将基因片段克隆于大肠杆菌表达载体pBV220中,得到表达质粒pBV-GDH.葡萄糖脱氢酶在含有表达质粒的基因工程菌株中得以诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层扫描结果表明,经诱导表达的葡萄糖脱氢酶约占基因工程菌株总蛋白的45％.葡萄糖脱氢酶活力测试表明,基因工程菌株无细胞抽提液中葡萄糖脱氢酶的活力为7.8U／毫克,约为对照组的30倍.实验结果初步说明,广泛应用于工业化生产的葡萄糖脱氢酶可以在基因工程菌株中得以大量表达并维持较高活力.

茶园芽孢杆菌QM7促生特性及耐酸铝机制初步研究

目前含芽孢杆菌等微生物制剂的有机肥料在酸性茶园土壤中的生物活性不高,难以起到有效的促生作用,达到部分替代和减少化肥使用量的目的。本实验分离得到1株耐酸铝芽孢杆菌,命名为QM7。试验发现菌株促生能力受到铝离子浓度的影响,在无铝条件下菌株生长素(IAA)的分泌量为85.6 mg·L^(-1),当铝离子浓度为1 mmol·L^(-1)时IAA分泌量为36.8 mg·L^(-1);盆栽结果表明,在6周内菌株可以增加茶苗根系表面积56.8%,根尖数27.3%;蛋白电泳分析发现高浓度的铝胁迫会导致菌株胞内64种与转录、翻译和代谢相关蛋白的表达发生差异,使得菌株生长受到抑制。

UVC诱导的枯草芽孢杆菌DNA双链断裂及影响因素探讨

为探讨短波紫外线(Ultraviolet C,UVC)对枯草芽孢杆菌基因组DNA的损伤效应,探讨研究方法和材料对结果的影响,以枯草芽孢杆菌为研究材料,分别对其菌体样品及DNA样品进行不同剂量的UVC辐照,采用8h、16h、24h脉冲场凝胶电泳分离DNA片段。结果发现,16h脉冲场凝胶电泳最能反映DNA的双链断裂程度。对16h电泳图进行数据分析发现,随UVC辐照剂量的增大DNA释放百分比递增;菌体样品在辐照剂量17.8J/cm2处其DNA双链断裂产额最大,而DNA样品的最大双链断裂产额出现在辐照剂量为72.7J/cm2处;另外,同辐照剂量下菌体样品的释放百分比和菌体DNA双链断裂产额均高于DNA样品。结果表明,UVC诱导的枯草芽孢杆菌DNA双链断裂程度与辐照剂量及辐照样品密切相关。

双向电泳分析枯草芽孢菌株TL2的抗菌蛋白

双向电泳分析枯草芽孢菌株(Bacillus subtilis)TL2对茶轮斑病菌的分泌蛋白,结果得到一些差异蛋白点。MALDI-TOF质谱分析的结果表明:蛋白点Bs-p4可能是一种枯草杆菌肽的前体分子;蛋白点Bs-p5可能是一种裂解酶;蛋白点Bs-p12可能是一种青霉素结合蛋白;而蛋白点Bs-p13则可能是一种胞外中性蛋白酶。蛋白点Bs-p13可能是抑制茶轮斑病菌的一种主效蛋白,可以通过病菌的代谢物来加强诱导。

枯草芽胞杆菌胞外抗菌蛋白的初步分离及性质的研究

土壤中分离的枯草芽胞杆菌,其发酵液对苹果炭疽病菌具有很强的抑制作用。为了确定其抑菌物质的主要成分,本试验采用硫酸铵分级沉淀获得无菌滤液中的抗菌蛋白粗提物,超滤后经过聚丙烯酰胺凝胶电泳,胶带回收进行分离鉴定,得到1种具有抑菌活性的蛋白条带。该蛋白对供试的6种植物病原真菌具有抑制作用,该蛋白的活性表现在80℃,30 min 仍有抑菌作用,对 pH（4～7）具有一定的适应范围、另外对紫外照射（0～12 h）、抑制剂、有机溶剂均不敏感。质谱鉴定该条带含有两种蛋白,分别为假定蛋白 BSU35980 gi｜16080651,相对分子量11079 Da,等电点4.78,匹配率为68%；丝氨酸羟甲基转移酶 gi｜16080743,相对分子量为45575 Da,等电点为5.56,匹配率为67%。显微观察发现抑菌蛋白可以使菌丝发生断裂、扭曲、畸形、肿大。

与水稻互作的枯草芽孢杆菌OKB105菌株胞内全蛋白双向电泳条件的优化

用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)OKB105菌株菌悬液处理水稻种子及幼苗,发现OKB105菌株能够显著促进水稻生长。为了研究枯草芽孢杆菌的促生机制,建立了水稻与OKB105菌株的互作体系,并对互作后的OKB105菌株胞内全蛋白的双向电泳条件进行了优化。结果表明:分离胶浓度为10%,等电聚焦(IEF)程序中最高电压8 000 V,聚焦60 000 Vh且增加低电压慢速除盐步骤能够提高双向电泳图谱质量,为蛋白质组学水平上研究水稻与枯草芽孢杆菌的互作奠定了良好的基础。