一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的分离与鉴定

利用醋酸盐对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的选择性抑制特性 ,采用选择性培养基从土壤中分离苏云金芽孢杆菌 .对分离菌株的个体形态、生理生化特点进行了分类研究 ,确定该菌株即为苏云金杆菌 .采用改进的培养基培养伴胞晶体 ,证明该培养基可在

杀鞘翅目苏云金芽孢杆菌新菌株及其杀虫剂的研究

从中国土壤中分离出２ 株杀鞘翅目昆虫的苏云金芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＹＭ０３ 及ＳＨＱ１１１０ 。ＹＭ０３ 的血清型为Ｈ８ａ８ｂ ，ＳＨＱ１１１０ 的Ｈ 血清型未知。二菌株皆产近菱形的薄扁伴孢晶体，分别含６８ ～７０ｋＤ 和６５ｋＤ 的晶体蛋白质。毒力生物测定证明对柳蓝叶甲（ Ｐｌａｇｉｏｄｅｒａ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒａ） 及马铃薯甲虫（ Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ） 有高毒效。发酵性能良好。ＹＭ０３ 粉剂田间防治马铃薯甲虫有高效。稀释４００ 倍喷雾，防治效果达９４６ ％ 。

枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的共培养及其对生物活性物质产生的影响

研究了枯草芽孢杆菌Bs5 5和Bs90菌株分别与苏云金芽孢杆菌Bt1和Bt2菌株在共培养条件下的菌体生长、抗菌活性物质脂肽类化合物和杀虫活性物质伴孢晶体蛋白的产生状况。结果表明 ,Bs5 5与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs5 5相似 ,未检测到伴孢晶体蛋白 ,但有Bt特异性蛋白存在 ;Bs90与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs90有相对较大的差别 ,检测到伴孢晶体蛋白。说明Bs与Bt可以共生 。

我国土壤中苏云金芽孢杆菌的分离与基因型的鉴定

从我国20个省市采集176份土壤中分离出苏云金芽孢杆菌51株.以cry1,cry2,cry3,cry4,cry-n,cry7,cry8,cry11,cry13和cyt的引物作PCR分析.结果表明:4株含有cry4,12株含有cry7,4株含有cry8,4株含有cry1,2株同时含有cry1和cry2,27株无PCR产物.未检测到其它基因型.经电镜扫描伴胞晶体形态多种多样,主要有菱形、球形、方形、多边形和不规则形.

中国苏云金芽孢杆菌的分布与cry基因的多样性

采集全中国 2 7个省、自治区及 4个直辖市昆虫孳生地粉尘、土壤等样品 1 0 80份 ,在其中的40 6份中分离到苏云金芽孢杆菌 965株。镜检可观察到大菱形、小菱形、方形、长方形、圆形、椭圆形、镶嵌形和不规则形等 8种主要形态的伴孢晶体 ;采用cryⅠ、cryⅡ、cryⅢ、cryⅣ和cryⅤ基因的通用引物对 2 2 1株Bt分离株进行的PCR检测结果表明 :各类基因的含量依次为cryⅠ >cryⅡ >cryⅤ>cryⅢ基因 ,分别占被检菌株的 75 6%、 67 9%、 58 4%和 1 4 5% ,没有检测到cryⅣ基因 ,共得到1 0种基因组合类型。对其中含有cryⅠ基因的菌株分别以cryIAc、cryIC和cryIE基因的特异性引物进行PCR检测 ,得到 2 0株同时含有cryIAc、cryIC、cryⅡ和cryⅤ优良基因组合的Bt分离株 ,其中菌株Bt 1 5A3对棉铃虫、甜菜夜蛾及小菜蛾均表现出高毒力 ,具有生产开发潜力。

拉曼镊子分析单个苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白

应用拉曼镊子研究了来自同一亚种的两个苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)菌株的单个伴孢晶体蛋白的拉曼光谱。一束30mW、785nm的近红外激光导入倒置显微镜,形成光镊,俘获水溶液中的单个伴孢晶体蛋白,同时收集被俘伴孢晶体蛋白的拉曼信号。结果表明,单个晶体的拉曼光谱反映了晶体蛋白的分子结构和蛋白组成,得到的拉曼光谱信号更清晰、更灵敏。平均光谱和主成分分析均显示,同一亚种的H7、D4菌株的晶体蛋白的拉曼光谱比较接近。但在同一菌株内有两类不同的伴孢晶体存在,得到了群体分析方法难以得到的信息。本方法不需要复杂的纯化伴孢晶体过程,直接俘获单个伴孢晶体并收集其拉曼光谱,既可以得到群体伴孢晶体的信息,更可以得到群体内每个晶体蛋白之间的信息。

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了 7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用 ,结果表明 ,常用浓度下 ,2 .5 %溴氰菊酯乳油、4 8%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响 ,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂 ;4 .5 %高效氯氰菊酯乳油、2 .5 %高效氯氟氰菊酯乳油、2 0 %灭多威和 4 0 %辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响 ,可与苏云金杆菌制剂现混现用 ;80 %敌敌畏乳油(5 0 0倍稀释 )对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用 。

苏云金芽孢杆菌对松材线虫的杀线活性

在室内条件下,测定了17株苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis伴孢晶体蛋白对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的杀线活性。通过初筛,发现菌株020、RBT-200701的伴孢晶体蛋白对松材线虫有明显毒杀作用。在测试的浓度范围内（菌株020为6.37-203.9μg/ml;RBT-200701为13.7-438.8μg/ml）,菌株对松材线虫的校正死亡率随其浓度增大而提高;随时间延长杀虫效果提高。020菌株晶体蛋白24h、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为183.20、408.20μg/ml和80.132、25.29μg/ml;RBT-200701菌株伴孢晶体蛋白24、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为368.00、868.00μg/ml和82.73、382.73μg/ml。SDS-PAGE分析发现这2个菌株晶体蛋白的蛋白图谱不同。

活性氧对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的损伤作用

用ＳＤＳＰＡＧＥ 电泳分析和生物测定方法研究了过氧化氢（Ｈ２Ｏ２） 和羟自由基（·ＯＨ）对苏云金芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ） 伴孢晶体的损伤作用。结果表明，这两种活性氧对伴孢晶体均有一定程度的损伤作用，这种损伤作用与活性氧的浓度成正相关，并且·ＯＨ 对伴孢晶体的损伤作用明显强于Ｈ２Ｏ２ 。

苏云金芽孢杆菌中华亚种CT-43菌株伴胞晶体蛋白的特性

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)为革兰氏阳性细菌,在其芽孢形成过程中可产生一种对鳞翅目、双翅目和鞘翅目幼虫有高毒力的蛋白质伴胞晶体,近来又发现它对动、植物寄生线虫以及扁形动物门的一些种类有毒,现已成为芽孢杆菌的第二大研究对象。

昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体毒力的影响

综述了昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis伴孢晶体毒力的影响。中肠液的酸碱度和蛋白酶是影响伴孢晶体溶解与原毒素活化的两大因素。中肠液的酸碱度不仅影响到伴孢晶体的溶解速度 ,还影响到各种蛋白酶的活性表现 ;而蛋白酶则直接参与了原毒素的活化 ,其组成与活性影响着原毒素的活化速度和杀虫专一性。因中肠液蛋白水解能力过高而导致原毒素的过度降解是某些昆虫对苏云金芽孢杆菌低度敏感的主要原因 ,而中肠液对原毒素活化能力的降低则与昆虫抗性的形成有关。此外 ,中肠液的沉淀作用及其它生理生化特性也影响着原毒素毒力的正常发挥。

对植物寄生线虫具有活性的苏云金芽胞杆菌研究进展

植物寄生线虫是重要的植物病原物之一,给农业生产带来了巨大的经济损失。长期以来,一直缺乏有效防治植物寄生线虫的手段。苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)是重要的昆虫病原细菌,广泛应用于鳞翅目、双翅目、鞘翅目害虫等农林及卫生害虫的防治;部分Bt菌株对植物寄生线虫具有很高的活性。本文总结了杀植物寄生线虫Bt菌株筛选的模型与方法的建立、Bt菌株杀植物寄生线虫的作用机理及其相关应用、以及杀植物寄生线虫的伴胞晶体蛋白与相关基因等,可望为杀植物寄生线虫Bt制剂的研究与开发提供借鉴。

苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体

苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis)CTC菌株产生卵圆形伴胞晶体 ,晶体蛋白分子量为 1 0 0kD ;透射电子显微镜观察结果表明该菌株有S 层结构 ,而且在母细胞内可以形成伴胞晶体和S 层的初体结构 ;其蛋白基因导入苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB1 71后 ,扫描电子显微镜观察结果表明转化子能形成晶体 ,而其形状与CTC菌株的相同 ;转化子晶体蛋白的分子量大小也与CTC菌株的相同 ,为 1 0 0kD。以上实验结果结合以前晶体蛋白N 末端测序和基因核苷酸序列 ,表明苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S

双亲灭活原生质体融合技术在苏云金杆菌菌种选育上的应用(Ⅱ)——融合产物的鉴定

在双亲灭活原生质体融合选育苏云金杆菌新菌株的过程中，最终筛选出一株毒力效价较双亲分别提高４１％和１１７％的新菌株３＃。该菌株的酯酶同工酶谱及晶体蛋白多肽均与双亲有显著不同。

苏芸金杆菌伴孢晶体和芽孢孢衣的蛋白质组分及其与毒力的关系

研究了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis) 3个变种6个菌株的提纯伴孢晶体和芽孢对大蜡螟(Galleria mellonella)和大菜粉蝶(Pieris brassicae)的毒力、晶体的蛋白质和多肽成分及芽孢衣中的类晶体蛋白质成分。生物测定表明,晶体毒力高于芽孢,在总数量相同的情况下,晶体和芽孢近1:1的混合物的毒力高于单独的晶体或芽孢。芽孢衣中存在一种类似晶体蛋白质的成分,无晶体突变株及无效野生株的芽孢则无此种蛋白质且对两种昆虫无毒。变种wuhanensis和变种galleriae的晶体含MW138000的主要蛋白质和63000的次要蛋白质,经碱性缓冲液溶解后,上清液含MW138000的蛋白质,沉淀中含MW63000的蛋白质;变种aizawai的晶体中仅含138000的蛋白质。对大蜡螟无毒的HD-11(var.aizawai)晶体的蛋白质成分有别于上述晶体,其胰蛋白酶消化物的SDS凝胶电泳图型显示少2条多肽带,但对大菜粉蝶仍有效。结果表明,苏芸金杆菌的芽孢在昆虫病理中有重要作用,伴孢晶体的蛋白质和多肽成分与它们对昆虫的毒力特性之间有密切关系。

经高浓度味精废水驯化的B.t菌株伴胞晶体特性及其活性成分研究

对 3株能在味精废水中生长的苏云金芽孢杆菌菌株T .4、G .1、S - 2 .5进行了废水茄子瓶培养基培养 ,应用液体双相法分离晶体 ,通过SDS -PAGE电泳确定了它们的分子量为 12 0KD、10 4KD、6 7- 6 8KD、43-45KD ;选取菌珠G .1经分离后的晶体通过DEAE -纤维素离子交换层析和SephadexG - 10 0凝胶排阻层析分离到两个峰 ,分子量分别为 12 0KD、6 8KD ,致死中浓度LC50 分别为 0 .6 0 9、>2 5。

农药助剂对苏云金杆菌毒力的影响及新液剂研制

研究了２０种化学物质对苏云金杆菌的毒力影响，分析了由乳化剂、湿润剂、防腐剂配制的几种不同农药助剂组合与该菌芽孢晶体混合物在不同贮存期的毒力变化及芽孢存活率。从供试的助剂组合中获得了一种最佳组合，其各项指标均优于中华人民共和国农业行业标准中所规定的各项要求，可发展成一种新的苏云金芽孢杆菌液剂。

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的研究进展

伴胞晶体是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)在芽孢形成过程中产生的一种蛋白晶体。作为生物杀虫农药之一,伴胞晶体/Bt由于具有高效、广谱、环保及生物安全等优势,在农林业中得到广泛应用。介绍了伴胞晶体的最新分类、命名情况,综述了其结构、杀虫机理及应用方面的研究进展,并对Bt生物农药的发展前景进行了展望。

响应面法优化苏云金芽胞杆菌YC-10发酵培养基

为获得杀线虫Bt菌株YC-10最佳培养基配方,以发酵液中伴胞晶体蛋白浓度为评价指标,利用Plackett-Burman实验设计和响应面分析法对YC-10的培养基配方进行室内摇瓶优化筛选.实验结果表明:大豆饼、玉米粉、氯化钙和磷酸氢二钾为4个显著影响因子,YC-10最优培养基配方为:黄豆饼25.73 g/L,玉米粉12.57g/L,CaCl_20.25 g/L,K_2HPO_40.43 g/L,ZnSO_40.20 g/L,MgSO_40.20 g/L,MnSO_40.25 g/L,FeSO_40.25 g/L.

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的制备

采用液体培养和固体培养两种不同的方法培养苏云金芽孢杆菌,并比较了高速离心法、透析法以及等电点沉淀法三种纯化方式对伴孢晶体的纯化效果。镜检观察结果表明,固体培养更有利于菌体产生伴孢晶体。利用棉铃虫进行的生物测定结果表明,透析法纯化所得伴孢晶体生物效价较高,达到150000IU.mg-1。扫描电镜观察结果显示,透析法纯化所得伴孢晶体纯度较高且形态完整。