测定绿脓杆菌冷休克率方法的研究

本研究基于某些革兰氏阴性杆菌当处于不同生长阶段时对冷敏感性表现不同的现象,建立了绿脓杆菌冷休克率的测定技术,可用于测定群体绿脓杆菌的生长情况。应用该技术,实验群体绿脓杆菌生长各期的肉汤培养物,观察冷休克率变化规律,对照群体细菌生长曲线可见两者有一定程度吻合,同时也有差别,后者主要在于细菌冷休克率峰值出现早于细菌活菌数峰值,而当细菌达到稳定期时,其数量居高不下而后才逐渐降低,此时,冷休克率的降低则迅速而明显,可清楚地表明细菌生长状态,较早地预示群体细菌生长势头。对实验动物及少量烧伤病人创面标本检测的结果表明冷休克率测定有助于检出生长的优势菌群,此点将在机会致病菌的微生物病原性确定方面有一定的应用前景。

冷应激及包埋对乳酸菌冻干发酵剂的影响

将嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌按3∶2∶1比例制备乳酸菌冻干发酵剂。比较不同温度冷应激处理对乳酸菌冻干存活率的影响,结果表明,20℃,处理4h时,冻干存活率为96.3%。选择发酵的固定化细胞制作条件:海藻酸钠2.25g/L、CaCl2 4.0g/L。包埋后乳酸菌冻干存活率为95.6%。

高效表达冷休克蛋白的乳酸菌发酵体系质构特性分析

以高效表达冷休克蛋白C和D的乳酸菌菌株和对照菌株、发酵脱脂乳,通过检测发酵过程体系的胞外多糖产生量,以及发酵体系酸度和质构的变化趋势,从而确定乳酸菌中冷休克蛋白对发酵乳质构特性的影响。结果表明,超量表达菌株在42℃条件下,4 h内的发酵前期,活菌数略低于对照菌株,进入稳定期之后,3个样品的活菌数趋于一致。超长发酵实验的条件下,表达菌株具有一定的自我修复能力,通过抑制产酸,控制环境pH值的改变量,从而更好的适应环境的变化,保持较高的活菌数和菌体活力。高效表达冷休克蛋白C和D的发酵体系,在发酵初期弹性模量和黏性模量均明显高于对照组。发酵后的样品,在全部的频率范围,表达菌株的弹性模量和粘性模量明显高于对照样品。表达菌株的胞外多糖产量一直明显高于对照组,这一结果可以解释质构分析结果中的差异性。

乳酸菌抗冷胁迫作用研究进展

极端低温会导致细胞内及周围形成冰晶,降低细胞膜的流动性和透过性,导致部分蛋白质及核酸的异常折叠,从而影响细胞的存活性能。本文综述了冷胁迫对乳酸菌细胞膜流动性、蛋白质和核酸功能造成的影响,总结了乳酸菌抗冷胁迫所采用的策略,并归纳了研究乳酸菌抗冷胁迫作用的常用方法。同时,对乳酸菌抗冷胁迫作用未来的研究方向进行展望,即可从基因组学的角度出发,对合成脂肪酸相关基因进行研究,探索乳酸菌调控膜脂组成的具体机制。此外,在未来的研究中应当更加关注冷休克蛋白的结构与功能之间的关联性。

植物乳杆菌CGMCC8198 β-羟脂酰-ACP脱水酶启动子的克隆及其冷激调节作用分析

温度对乳酸菌储存和应用有重要影响,为挖掘乳酸菌温控启动子以及探索冷激反应的分子机制,对植物乳杆菌CGMCC8198经4和37℃处理后的转录组测序数据进行了分析,并对其中的差异基因β-羟脂酰-ACP脱水酶编码的fabZ基因表达情况进行验证,进一步应用MEGA 7.0软件分析其进化亲缘关系。再通过BPROM、BDGP、IPSW以及WebLogo 3.0对基因上游区域进行预测,最后克隆启动子,构建绿色荧光蛋白启动子报告分析质粒,并转化大肠杆菌进行低温诱导分析。结果发现fabZ基因低温刺激后上调,生物信息学结果也显示此基因与低温应答有关系;在基因上游500 bp区域有强启动子,且启动子中的-10区(TGTAAC)和-35区(TTACCG)6个核苷酸的位置与经典的-10区、-35区相似;大肠杆菌低温诱导实验表明在14℃刺激20、40、60 min后,含fabZ启动子菌株的荧光相对强度分别是37℃时的1.30、2.38和1.42倍。该研究发现植物乳杆菌的fabZ基因具有低温上调特性,为探究乳酸菌冷激应答与fabZ基因功能机理,以及构建乳酸菌低温诱导表达载体奠定一定的基础。