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利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体
1
作者
辛艳丽
贾玉艳
+1 位作者
王恒梁
邓继先
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第8期45-50,共6页
采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-...
采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。
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关键词
细菌人工染色体
λ
red
重组系统
Β-酪蛋白基因
flp
Southern
同源重组
BAC克隆
鼠
同源序列
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职称材料
题名
利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体
1
作者
辛艳丽
贾玉艳
王恒梁
邓继先
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第8期45-50,共6页
基金
国家"863"计划资助项目(2002AA206621)
文摘
采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。
关键词
细菌人工染色体
λ
red
重组系统
Β-酪蛋白基因
flp
Southern
同源重组
BAC克隆
鼠
同源序列
Keywords
bacterial artificial chromosome λ red recombination system β-casein gene flp
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体
辛艳丽
贾玉艳
王恒梁
邓继先
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
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