二种大实蝇的PCR-RFLP快速鉴定方法

应用PCR-RFLP技术,对我国部分地区发生分布的蜜柑大实蝇和橘大实蝇开展了分子生物学鉴定方法研究。结果表明,利用4组引物对目标实蝇的COⅡ和ITS1基因进行PCR扩增,并借助MnlⅠ,MseⅠ,AseⅠ,DraⅠ和SspⅠ等5种限制性内切酶对扩增产物进行酶切,能从多个途径把2种大实蝇区分开。所建立的方法不受目标实蝇食物源、地理来源和标本保存条件的影响,对不同虫态和不同性别的个体均适用,可在生产和检疫实践中对蜜柑大实蝇和橘大实蝇进行快速鉴定。

柑橘大实蝇的产卵特性

通过田间调查,明确柑橘大实蝇Bactrocera (Tetradacus) minax (Enderlein)的产卵特性和在3种寄主植物上产卵的时间动态。柑橘大实蝇对杂柑为害率最高,3个寄主品种均以中层北面果实受害严重。柑橘大实蝇最喜在直径为(3.3±0.2)cm的果实上产卵。

柑橘大实蝇雌成虫卵巢发育的分级

在显微镜下观察柑橘大实蝇Bactrocera minax（Enderlein）雌成虫自羽化后不同日龄的卵巢形态特征,测量并统计卵巢长度、卵巢宽度、卵巢指数、卵泡长度和卵巢成熟卵量等指标,根据卵巢形态特征和卵巢发育程度进行等级划分。结果表明,柑橘大实蝇雌虫卵巢发育进度可分为5个等级：雌虫羽化后1~10d卵巢发育为Ⅰ级（卵巢发育初期）;10~18d为Ⅱ级（卵黄沉积期）;18~23d为Ⅲ级（成熟待产期）;23~33d为Ⅳ级（产卵盛期）;羽化33d后为Ⅴ级（产卵末期）。

柑橘大实蝇成虫的翅载和额外负载能力

对柑橘大实蝇Bactrocera(Tetradacus)minax(Enderlein)的有效管理受阻于对其成虫运动行为的较少的认识。通过测定其成虫翅载能力和忍受额外负载重量的能力,从而确定其成虫所携带不同的额外负载的电子标签重量对其正常起飞的影响程度,为制作合适的昆虫谐波雷达的电子标签提供技术参数。其雌雄成虫的翅载能力并没有随着成虫个体重量增加而降低,也没有因为性别不同而存在差异。成虫经过正常取食和饥饿(只喂清水)变化处理,其成虫平均净载重量约为11mg。来自网室成虫忍受额外负载试验结果表明,成虫额外负载7.3mg重量或为占其自身体重大约23%重量对于其向上起飞行为有较少或没有直接的影响。结果进一步表明,在确定昆虫谐波雷达技术跟踪其成虫携带的电子标签适合性时,选择的电子标签的重量不能超过7.3mg。

诱杀点分布对柑橘大实蝇诱杀效果的影响

根据柑橘大实蝇成虫在橘园及其周边环境的时空分布规律,研究了不同诱杀方法对柑橘大实蝇的防治效果。结果表明:在羽化觅食期诱杀柑橘大实蝇成虫效果较好,每个诱捕罐的诱捕虫量为(7.6±1.8)头/d,显著高于产卵期的诱捕虫量(1.8±0.3)头/d;羽化觅食期将诱捕罐集中挂在橘园与杂树林的交界带诱杀柑橘大实蝇成虫效果较好,每个诱捕罐的诱捕虫量为(7.6±1.8)头/d,显著高于橘园内的诱捕虫量(4.5±1.2)头/d;在产卵期诱杀柑橘大实蝇成虫则是橘园内的效果较好。

多种物质对柑桔大实蝇的电生理活性及田间引诱效果评价

柑桔大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)是柑桔类果树的重要害虫,诱杀成虫是防治该虫的一项重要措施。本文应用触角电位仪测定了10种物质不同浓度、7种常见配方及5种改进配方对柑桔大实蝇的电生理原理,2010和2011年在四川和重庆的5个柑桔园对9种配方的田间诱集效果进行评价。结果表明,柑桔大实蝇雌雄成虫对水解蛋白和乙酸的EAG值显著高于红糖、乙醇、甜橙汁、甜橙精油、乙酸乙酯、桔皮粉、柠檬酸和蜂蜜。雌、雄成虫的EAG值随着水解蛋白、乙酸浓度的增高而增大;雌虫的EAG值随乙醇浓度的增高而增大;而其余7种物质的浓度变化对雌雄成虫的EAG值影响较小。配方中,20%水解蛋白的EAG值和田间引诱效果均显著高于其它引诱物质和配方。改进型糖醋酒液分别添加5%水解蛋白和0.2%乙酸乙酯其诱集效果明显提高。本试验结果可为柑桔大实蝇引诱剂配方筛选和田间诱杀提供科学依据。

人工饲料对柑橘大实蝇成虫寿命和繁殖特性的影响

为了明确柑橘大实蝇[Bactrocera minax(Enderlein)]成虫人工饲养的最适配方,室内条件下测定了蜂蜜水、糖醋液、啤酒酵母蔗糖水以及蛋白胨蔗糖水等4种人工饲料对柑橘大实蝇成虫寿命、交配次数及产卵量的影响。结果表明,4种人工饲料均能满足柑橘大实蝇成虫存活和繁殖的营养需求。以4种人工饲料饲喂的成虫可存活23～45 d,期间交配3～5次,且4种配方间没有显著差异;研究还显示,以蛋白胨蔗糖水喂食的成虫单雌产卵量最高,约为20粒,与其他3种配方间具有明显差异。研究结果可为柑橘大实蝇基础生物学特性和可持续治理技术提供参考。

柑桔大实蝇老熟幼虫和蛹过冷却点和结冰点的测定

为明确柑桔大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)老熟幼虫和蛹的抗寒能力,对柑桔大实蝇老熟幼虫、滞育蛹和滞育解除蛹的过冷却点和结冰点进行了测定。结果显示,同一虫态不同个体间其过冷却点和结冰点具有不同程度的变异,但其变异范围均符合正态分布。柑桔大实蝇不同发育状态间的过冷却点和结冰点均具有显著差异,其中,已解除滞育进入发育状态的蛹的过冷却点和结冰点最低,分别为-11.15℃和-9.76℃;其次为滞育蛹,分别为-8.93℃和-7.63℃;而老熟幼虫最高,分别为-7.09℃和-3.43℃。此外,老熟幼虫的结冰点和过冷却点之间的差值最大为3.24℃,显著高于滞育蛹(1.30℃)和滞育解除蛹(1.39℃)。表明,倒春寒对已进入发育状态的柑桔大实蝇蛹不会造成不利影响。

柑橘大实蝇成虫的时空分布与产卵规律

通过实地调查,观察并分析了柑橘大实蝇Bactrocera(Tetradacus)minax(Enderlein)成虫在柑橘园及其附近杂树林的觅食产卵活动规律。结果表明:在柑橘大实蝇羽化开始到羽化盛期,以柑橘园与杂树林交界区域的成虫密度最大,并于6月11日达到高峰,在Z3监测带(杂树林与基准带相距5m)每个诱捕罐的诱捕虫数为(24.0±5.6)头,J1监测带(柑橘园与基准带相距5m)为(74.7±21.9)头,显著高于其他监测带;羽化盛期60%以上的柑橘大实蝇成虫在Z3监测带和J1监测带的交界带内活动;羽化盛期过后的产卵期,诱捕虫数明显下降,且柑橘大实蝇在柑橘园中的分布比较均匀,Z1监测带(杂树林与基准带相距100m)没有诱到成虫,其他不同监测带的诱捕虫数也没有显著差异;柑橘大实蝇产卵时对果实的不同部位具有明显的选择偏好性,其中果腰处的产卵痕数量分别是果蒂和果脐处的7倍和4倍,而且果实阴面的产卵痕数量显著高于阳面,是阳面的7倍;柑橘大实蝇对柑橘果实所处的空间位置没有明显偏好。

柑桔大实蝇辐照成虫对两种引诱剂的敏感性

为了明确柑桔大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)辐照成虫和田间自然发生的成虫对引诱剂的敏感性差异,指导柑桔大实蝇辐照不育技术的有效利用,在田间释放柑桔大实蝇辐照成虫,以常用引诱剂桔丰和果瑞特同期进行诱集监测。监测结果显示,辐照显著降低了柑桔大实蝇成虫对桔丰和果瑞特的敏感性。在柑桔大实蝇成虫发生高峰期桔丰诱集到辐照成虫的数量仅为诱集总虫量的2.6%-11.6%,果瑞特为5.0%-50.0%;桔丰诱集到的辐照雌性成虫的数量仅为诱集的所有雌性成虫数量的4.4%-11.8%,果瑞特为33.7%-50.0%;桔丰诱集到的辐照雄性成虫的数量仅为诱集的所有雄性成虫的5.3%-11.4%,而果瑞特始终未能诱集到辐照雄性成虫。此外,辐照缩短了柑桔大实蝇成虫对常用引诱剂趋向性的持续时间。研究结果对柑桔大实蝇辐照不育技术与诱集诱杀技术的协调应用具有重要指导意义。

柑橘大实蝇成虫的取食、交配和产卵行为

为掌握柑橘大实蝇Bactrocera minax Enderlein成虫的行为习性,在实验室条件下观察并研究了其取食行为及交配和产卵行为.结果表明,柑橘大实蝇成虫取食前有用口器对饲料进行试探选择并最终停留在喜嗜饲料上吸食的习性;交配行为可分为交配前行为(求偶行为)、雌雄交配及交配后清理等行为过程;产卵行为可分为定位、产卵、产卵完成后续行为等步骤;柑橘大实蝇成虫有多次交配习性,交配行为和产卵行为交替发生.

不育剂量γ射线辐照对柑橘大实蝇交配前期存活的影响

不育剂量的60Co-γ射线辐照会对某些昆虫的存活产生影响,为明确不育剂量的γ射线辐照对昆虫的影响,以柑橘大实蝇蛹为靶标,以辐照剂量为100 Gy和110 Gy、剂量率为2 Gy/min的60Co-γ射线进行辐照。研究结果表明,不育剂量60Co-γ射线辐照后,柑橘大实蝇雌虫和雄虫交配前期的死亡率较对照无显著提高;处理雌雄虫的第一死亡高峰与对照一致,均在成虫羽化后的1-3 d,雌虫的第二死亡高峰也与对照一致,但100Gy雄虫的第二死亡高峰比对照前移3 d,110 Gy雄虫的第二死亡高峰延迟时间较长(6 d)。100 Gy和110 Gy辐照雄虫的校正死亡率(24.53%和39.62%)显著高于辐照雌虫(7.63%和21.61%),两个不育剂量下雌虫存活能力较强。本文结果可为选择合适的柑橘大实蝇辐射不育剂量、确定辐射虫田间释放量和释放时期提供依据。

橘大实蝇对三种寄主植物的偏好比较

比较取食3种不同寄主植物脐橙、杂柑、蜜橘对橘大实蝇Bactrocera(Tetradacus)minax(Enderlein)的蛹特征、卵量及为害率的影响,研究橘大实蝇对寄主植物的选择性。结果表明,取食蜜橘的橘大实蝇其蛹长及蛹宽显著大于取食脐橙的;取食杂柑的与取食脐橙的无显著差异。三者之间蛹重差异显著。取食蜜橘的雌成虫卵量显著大于取食脐橙的,取食杂柑的雌成虫卵量与取食脐橙的其无显著差异。对寄主植物的为害率顺序为:脐橙>杂柑>蜜橘。

初羽化的柑橘大实蝇成虫起飞日节律和降落位置

柑橘大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)是主要分布于我国的柑橘类重要害虫,本文通过对在室外养虫笼、室外无橘树网室和有橘树网室中初羽化柑橘大实蝇成虫的起飞活动日节律和降落位置观察试验研究,为应用谐波雷达技术跟踪该成虫运动行为试验提供合适释放时间点和选择跟踪的方位。本研究结果表明,初羽化的柑橘大实蝇雌雄成虫起飞活动高峰上午在9∶00-10∶00,下午在16∶00-17∶00时。在室外养虫笼、室外无橘树网室和有橘树网室中,初羽化成虫降落的在东南、东北、西南、西北4个方位网上和在东、西2个方位网上的数量均没有偏向性。在空间相对较小的室外养虫笼中,初羽化成虫喜欢向上飞行停留在上部网上,而在空间相对较大的室外无橘树网室和有橘树网室中,大多数时间段,初羽化成虫没有这种明显偏向性。在有橘树网室中,初羽化成虫降落在橘树上的东南、东北、西南、西北4个方位面上成虫数量均没有明显偏向性,但85.5%成虫喜欢停留在橘树上部位置;有52.2%成虫喜欢停留在橘树上。结果还表明,在室外养虫笼中,太阳光照射强度与初羽化成虫起飞频率之间直线线性相关性不明显。在有橘树网室中,太阳光照射强度与初羽化成虫起飞虫数之间存在明显直线线性相关性,而在室外养虫笼和无橘树网室中,它们之间的这种相关性不明显。这可能与成虫在橘树上避光行为有关。

基于RAPD和SRAP分子标记的柑桔大实蝇种群多态性及其亲缘关系研究

目的：利用RAPD（Random Amplified polymorphic DNA）和SRAP（Sequence-Related Amplified Polymorphism）分子标记技术,研究来自重庆、湖北、四川和陕西4省市10个地理种群柑桔大实蝇的亲缘关系.方法：利用10条RAPD引物和5对SRAP引物对10个不同地理种群柑桔大实蝇的基因组DNA进行扩增,统计多态性谱带,然后运用DPS统计分析软件进行遗传多态性及聚类分析.结果：10条RAPD引物扩增产生152条清晰稳定的谱带,其中多态性谱带132条,多态性谱带的比例为86.84%;不同地理种群间的遗传距离在0.250 0~0.625 0之间,10个地理种群的柑桔大实蝇被划分为4个大类群.5对SRAP引物扩增共获得66条重复性好的清晰谱带,其中多态性谱带60条,多态性谱带比例为90.91%,不同地理种群间的遗传距离在0.200 0~0.789 5之间,10个地理种群的柑桔大实蝇被分为5个大的类群.将RAPD和SRAP两种标记的数据整合,聚类结果显示,10个地理种群的柑桔大实蝇被划分为6个大类群.结论：柑桔大实蝇不同地理种群间具有丰富的遗传多样性,两种方法结合分析更能准确地反映不同地理种群间的亲缘关系.

诱杀球对橘大实蝇诱捕效果的研究

为开发一种新型的橘大实蝇诱捕器,研究了不同颜色、直径的诱杀球和不同颜色的粘虫板对橘大实蝇的诱集效果。结果表明,绿色诱杀球的诱杀数量显著大于黄色和黄绿色诱杀球(P<0.05);诱杀球上橘大实蝇的诱集数量,随诱杀球直径的增大而显著增加,但在直径7cm以上时,诱杀球的诱集数量增速变缓,其中以直径7cm的绿色诱杀球生产成本和诱集效果最佳;诱杀球能显著提高黄板对橘大实蝇的诱集效果(P<0.05)。

柑桔大实蝇产卵器的结构及形态观察

柑桔大实蝇Bactrocera minax(Enderlein)是柑桔果树上的重要害虫,近年来危害日趋严重,对我国柑桔生产造成了严重影响。本文在室内及野外观察了柑桔大实蝇雌虫产卵器的结构及外部形态特征。结果表明:产卵器分为产卵器基节、翻转膜、产卵管三部分,其长度依次为:4.63±0.38 mm、5.24±0.28 mm、4.39±0.32 mm,产卵器拉伸全长为14.24±0.27 mm。产卵器有3种状态:正常状态、产卵前准备状态、产卵状态。产卵前准备状态表现为产卵器完全伸长,可弯曲、反复旋转并回折成γ形。在雌虫产卵状态时,产卵器基节留在果实外,产卵管刺穿透果皮后在果皮下产卵。

^60Co-γ射线辐照柑橘大实蝇低级别蛹对成虫羽化和交配的影响

为了降低柑橘大实蝇4级蛹在辐照时因成虫羽化造成的虫量损失,保证辐照虫的质量,方便辐照操作和缓解运输压力,以柑橘大实蝇低级蛹(1级、2级和3级)为试验材料,研究经90Gy的60Co-γ射线辐照后的成虫羽化率和交配能力。结果表明,辐照2级和3级蛹未对成虫羽化和交配产生显著影响,2级和3级蛹辐照后成虫羽化率分别为58.4%和60.4%;单雌(雄)交配次数分别为0.15次和0.08次;成虫羽化历期均为12 d,羽化高峰分别为5月19~20日和5月16~17日,与未辐照蛹和辐照的4级蛹的差异不显著;雌雄性比分别为0.91和1.04,与未辐照蛹无显著差异。1级蛹辐照后成虫雌雄性比为0.62,显著低于未辐照蛹和辐照的4级蛹,且羽化历期与未辐照蛹和辐照的4级蛹相比缩短了6 d。综合衡量辐照效应和经济效益,可以将柑橘大实蝇的适宜辐照虫期扩展至2、3级蛹。本研究为高效应用柑橘大实蝇辐照不育技术奠定了理论基础。

毒土封杀对柑橘大实蝇羽化的影响

根据柑橘大实蝇羽化进度,明确了毒土封杀初次施药时期为5月上旬,关键施药时期为5月中旬;克百威对柑橘大实蝇羽化率和羽化进度无明显影响;辛硫磷、敌敌畏和毒死蜱对柑橘大实蝇羽化率和死亡进度无明显影响。建议从柑橘大实蝇防治技术体系中排除毒土封杀环节。

橘大实蝇的产卵行为观察

2005年6月，在湖北省清江河谷地区早熟蜜柑园内观察了橘大实蝇Bactrocera（Tetradacus）minax（Enderlein）的产卵行为。整个产卵过程可分为定位、准备、穿刺、排卵和结束5个阶段。产卵1次所需的时间和排卵的数量与天气状况有关，一般需时14—46min。产卵深度因柑橘的品种和处在产卵期的果实直径大小而不同，在脐橙、柚、早熟蜜柑上的平均产卵深度分别为7．2，13．3和8．1mm。每雌的怀卵量平均71粒。雌成虫在产卵过程中有多头雄成虫在其周围活动或者是等待与其交尾，产卵和交尾在同一时段内多次交替进行。