基于网络药理学和分子对接技术研究白附子抗胰腺癌的机制

目的采用网络药理学方法研究白附子抗胰腺癌的潜在作用机制,并通过分子对接技术进行验证。方法2022年9―12月利用中药系统药理学数据库(TCMSP)和本草组鉴数据库(HERB)收集白附子的有效成分和靶点,在人类基因信息数据库(GeneCards)中获取胰腺癌相关靶点信息后将药物靶点和疾病靶点进行比对分析获得交集靶点。将交集靶点导入STRING数据库进行靶点之间的蛋白相互作用(PPI)分析,随后采用Metascape数据库对靶点蛋白进行聚类后再进行基因本体(GO)与京都基因和基因组百科全书(KEEG)富集分析,并利用Cytoscape 3.7.2软件构建白附子治疗胰腺癌有效活性成分-靶点-通路网络的相互作用关系。最后用Autodock Vina结合PyMOL对白附子抗胰腺的关键靶点和主要活性成分进行对接验证。结果通过筛选获得白附子中17个有效活性成分及12个抗胰腺癌的潜在靶点。白附子中可能发挥抗胰腺癌的主要成分乌索酸,β-谷甾醇,谷甾醇和齐墩果酸作用于核心靶点JUN、TNF、INS、CASP3和PTGS2,并可能通过调节癌症通路和癌症中的蛋白聚糖等代谢通路发挥抗胰腺癌的作用。分子对接数据表明所筛选的核心靶点与对应的有效活性成分均有较好的结合能力。结论白附子通过多成分和多靶点发挥抗胰腺癌的作用。这为进一步开发白附子作为治疗胰腺癌的药物提供了理论依据。

独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化的影响

目的探讨独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞PANC-1,取传3代、对数生长期、生长状态良好的PANC-1细胞,随机分为Control组及独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组,独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组分别予相应浓度的独角莲醇提物干预,Control组不予独角莲醇提物干预。干预24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;干预48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果与Control组比较,独角莲醇提物500μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著升高,而独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著降低(P均<0.05)。随着浓度增加和培养时间延长,独角莲醇提物各浓度组细胞活力显著下降,呈现浓度和时间依赖性(P均<0.05)。独角莲醇提物500μg/mL组无论是培养24 h还是培养48 h细胞活力均显著升高,在后续研究中剔除。此外,由于培养48 h独角莲醇提物各浓度组细胞活力降低更显著,故选择培养48 h进行后续研究。与Control组比较,独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组划痕愈合率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调、Bax表达上调,EMT相关蛋白E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调(P均<0.05)。结论一定浓度的独角莲醇提物不仅能抑制人胰腺癌细胞增殖和迁移并促进其凋亡,还能抑制其EMT。

白附子对大鼠脑缺血再灌注的保护作用研究

目的 探究白附子对大鼠脑缺血再灌注的保护作用。方法 将32只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、白附子组(10 g/kg)和尼莫地平组(10 mg/kg),每组8只。除假手术组外,其余各组均采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,并且在造模前各组不间断地灌胃给药8 d。缺血再灌注24 h后,通过Longa 5分法评估神经功能缺损,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测脑梗死发生率,苏木素-伊红(HE)染色观察神经元病理变化,试剂盒测定血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果 与模型组相比,白附子组和尼莫地平组Longa评分均大幅下降[(1.67±0.52)分、(1.33±0.52)分比(2.83±0.41)分,P<0.05],梗死体积显著减小[(14.96±7.54)%、(8.20±7.17)%比(24.97±7.16)%,P<0.05],大脑皮层神经元损失明显改善,血清MDA活性降低[(1.26±1.02)μmol/L、(1.67±0.54)μmol/L比(3.91±1.09)μmol/L,P<0.05]、SOD活性水平提高[(12.53±2.56)U/mL、(13.81±1.75)U/mL比(8.08±3.93)U/mL,P<0.05]。结论 白附子可以减轻氧化应激反应,对缺血后血流恢复引起的脑损伤具有保护作用。

中药白附子的化学成分研究(Ⅰ)

中药白附子为天南星科梨头尖属植物独角莲 Typhonium giganteum Engl.的干燥地下块茎 ,我们自其低极性部位分离并鉴定了 6个化合物 ,分别为天师酸 (tianshic acid, )、尿嘧啶 (uridine, )、桂皮酸 (cinnamic acid, )、棕榈酸 (palm itic acid, )、β-谷甾醇 (β- sitosterol, )和β-谷甾醇 - 3- O-葡萄糖苷 (β- sitosterol- 3- O- gluceroside, ) ,其中天师酸、桂皮酸为本属植物中首次分得。

独角莲内生细菌TG116的分离鉴定及抑菌特性研究

以从独角莲块茎内分离到的细菌TG116为研究对象,通过16SrRNA序列分析结合形态特征和生理生化特性对TG116进行鉴定,采用皿内涂布、平板对峙和异步培养等方法研究其抑菌特性,并对其生长曲线、最适温度、最适pH值及耐盐性等进行了系统研究.结果表明:TG116对辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)等7种供试植物病原菌均有良好的掏抑制作用,表现出对植物病原真菌的广谱抗性且能使病原菌菌丝扭曲、变形等.结合形态学、生理生化指标和16SrRNA序列分析等结果,初步鉴定TG116菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis).研究结果为生物防治作物病害提供新的菌种资源,为开发和利用独角莲内生拮抗菌提供了理论依据.

独角莲超临界萃取物的GC-MS分析及体外抑瘤活性

为了寻找独角莲抗肿瘤的活性物质基础和合理开发利用独角莲,本研究采用超临界CO2萃取方法提取独角莲块茎粉,通过气相色谱—质谱技术对提取物进行成分鉴定。并采用噻氮唑蓝比色法(MTT)测试萃取物的体外抑瘤活性。结果:从独角莲的超临界CO2萃取物中检出37种物质,含量最丰富的4种化合物为:β-谷甾醇(-βS itos-terol),占40.22%;菜油甾醇(Campesterol),占18.45%;棕榈酸(n-Hexadecanoic acid),占9.52%;亚油酸(9,12-Oc-tadecadienoic acid(Z,Z)-),占8.15%。MTT实验证明萃取物对结肠癌HCT-8、卵巢癌HO-8910、胃癌SGC-7901、肝癌SMMC-7721均有显著的抑制作用,其中肝癌SMMC-7721细胞对萃取物最为敏感。独角莲块茎超临界CO2萃取物有显著抑瘤活性,针对该萃取物的进一步分离分析对其活性物质基础的寻找具有重要意义。

独角莲块茎挥发油化学成分的研究

采用气相色谱——质谱——计算机联用方法测定独角莲块茎挥发油化学成分。

独角莲不同提取液对大豆蚜虫的生物活性及活性浓度的筛选

基于均匀设计法研究了独角莲球根茎的不同提取液对大豆蚜虫的触杀和拒食作用。结果表明:乙醇浸提液对大豆蚜虫具有较高的触杀活性。水蒸汽蒸馏液对大豆蚜虫具有较强的拒食活性。乙醇浸提液对大豆蚜虫48h的致死中浓度(LC50)为8.71 mg.mL-1,水蒸汽蒸馏液对大豆蚜虫24、48 h的拒食中浓度(AFC50)分别为8.66、7.93 mg.mL-1。乙醚浸提液对大豆蚜虫的触杀和拒食作用不显著。60 h的同时触杀和拒食活性浓度筛选的结果表明,乙醇浸提液24.1545 mg.mL-1和水蒸汽蒸馏液23.014 mg.mL-1联合使用对大豆蚜虫同时触杀和拒食活性最好,死亡率达100%。

独角莲对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖抑制作用机理的研究

临床上独角莲对包括肝癌在内的多种肿瘤有一定的治疗作用。为揭示其抑癌机理,我们用独角莲根茎水提物(the aqueous extract from dried powdered rhizomes of Typhonium gigante-um Engl.,AEoTGE)作用肝癌细胞株SMMC-7721,研究独角莲对SMMC-7721细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。噻唑氮蓝(MTT)比色实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定表明:AEoTGE能较强抑制SMMC-7721细胞的生长,SMMC-7721细胞被阻滞在S期,并诱导细胞凋亡。提示独角莲是一种在肝癌治疗上有前景的中草药。

1-甲基乙内酰脲对SW480细胞作用的研究

目的探讨1-甲基乙内酰脲对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用。方法以体外培养的人结肠癌SW480细胞株为实验研究对象。实验分为对照组（等量PBS）和1-甲基乙内酰脲组（M）。MTT比色法检测细胞增殖抑制率,1-甲基乙内酰脲对SW480细胞增殖的抑制作用：根据文献数据和预实验,将1-甲基乙内酰脲组设8个浓度组（M：0.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、500 mg/L）;1-甲基乙内酰脲八个浓度组分别干预人结肠癌SW480细胞24、48及72 h后,MTT法检测1-甲基乙内酰脲对SW480细胞增殖的抑制作用。结果 MTT法检测结果显示：①1-甲基乙内酰脲在5～500 mg/L浓度范围能抑制SW480细胞增殖,增殖抑制率呈浓度递增趋势。各组间两两比较差异有显著性（P〈0.05）。②1-甲基乙内酰脲作用于结肠癌SW480细胞48 h后,对SW480细胞增殖抑制作用最强。结论 1-甲基乙内酰脲在体外对人结肠癌SW480细胞有抑制增殖的作用。

独角莲种子中脂肪酸和氨基酸含量分析

目的 :对独角莲种子进行脂肪酸和氨基酸含量测定的研究。方法 :采用气相色谱 -质谱联用仪 ( GC- MS)和日立 835 - 5 0型氨基酸分析仪。结果 :从独角莲种子中分离出 4种脂肪酸和 1 6种氨基酸。结论 :独角莲种子中含 2种不饱和脂肪酸和 7种必需氨基酸 。

独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响

目的探讨独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响。方法建立体内H22肝癌荷瘤小鼠的模型,采用灌胃法给予其100 mg·kg-1·d-1独角莲醇提液,以生理盐水灌胃和5-FU腹腔注射作为对照,连续10 d,停药后第2天摘取小鼠眼球取血后断髓处死,取出胸腺、脾脏称重,计算小鼠的胸腺重量指数、脾脏重量指数,采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与生理盐水灌胃的H22肝癌荷瘤小鼠比较,5-FU腹腔注射和独角莲醇提液灌胃处理的H22荷瘤鼠血清中细胞因子IL-2、TNF-α水平明显升高;但胸腺重量指数、脾脏重量指数显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论独角莲醇提液可提高H22荷瘤鼠的血清IL-2和TNF-α水平。

禹白附凝集素的凝集活性及加热对刺激性作用的影响

目的研究禹白附凝集素(Typhonium giganteumagglutinin,TGA)的凝集活性以及加热对家兔眼刺激性作用的影响。方法考察不同来源红细胞、温度、pH及糖对TGA凝集活性的影响;通过Western Blotting方法分析禹白附毒针晶与TGA;采用家兔眼刺激性试验,考察加热禹白附毒针晶及TGA对家兔眼刺激性作用的影响。结果 TGA能凝集兔、鼠、狗的红细胞,不能凝集人及鸡的红细胞,在50℃内凝集活性稳定,pH 6.0～9.0范围内凝集活性最高,TGA凝集活性不被D-木糖、D-核糖、D-阿拉伯糖、无水葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、甲基?α?D-甘露糖苷所抑制,仅被去唾液酸胎球蛋白所抑制;禹白附毒针晶与TGA均能与兔抗禹白附血清结合,在相同的位置显示相同的条带;家兔眼刺激试验结果显示单用TGA无刺激性,禹白附毒针晶中加入TGA刺激性显著增强,而禹白附毒针晶加上加热处理的TGA,其刺激性毒性与单独使用禹白附毒针晶的作用无差异,禹白附毒针晶加热处理后与禹白附毒针晶比较刺激性明显降低。结论 TGA具有较好的凝集活性,禹白附毒针晶中含有TGA,加热可破坏禹白附凝集素的刺激性作用。

mRNA差异显示法比较独角莲作用肝癌细胞SMMC-7721前后的基因表达

目的 :研究独角莲根茎水提取物 (AEoTGE)作用肝癌细胞SMMC 772 1后引起的细胞基因表达变化。方法 :利用mRNA差异显示技术 ,以人肝癌细胞系SMMC 772 1细胞为研究对象 ,筛选AEoTGE作用后表达改变的基因片段。结果 :经测序和鉴定 ,发现 1个基因在加入AEoTGE后表达上升 ,1个基因表达下降。结论 :mRNA差异显示可以用于中草药对细胞的作用机制研究。

高速逆流色谱法对独角莲中有效成分皂苷的分离纯化

本文采用高速逆流色谱法对独角莲中的有效成分皂苷进行分离纯化。分别以乙酸乙酯∶正丁醇∶乙腈∶水=5∶1∶1∶5(V/V)及乙酸乙酯∶正丁醇∶乙醇∶水=5∶10∶2∶20(V/V)为溶剂系统,用下相作流动相,上相作固定相,分别采用2 mL/min及1.5 mL/min的流动相流速、800 r/min的转速对独角莲中的有效成分皂苷进行分离,得到纯度98%的胡萝卜苷6 mg。

独角莲药用研究

介绍了独角莲的化学成分和药理作用.分析并整理大量文献资料,系统的介绍目前关于独角莲的研究,发现其主要化学成分为苷类化合物、有机酸、氨基酸、微量元素、甾体类化合物和挥发油,主要药理作用为免疫调节、抗炎、抗肿瘤等,但其有效成分及相应的作用机制尚不明确.为更好的开发和利用独角莲提供科学依据.

独角莲水溶性成分研究

利用硅胶、sephadex LH-20、反相柱层析和制备液相等方法对独角莲水溶性成分进行研究,分离得到4个化合物,其结构经波谱方法和标准品对照鉴定为5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethyl-2-furaldehyde)(1),腺苷(adenosine)(2),甘露醇(mannitol)(3)和核糖醇(ribitol)(4)。这些化合物均首次在独角莲化学成分研究中报道。

独角莲多糖的提取及体外抗肿瘤活性研究

利用水提醇沉法从独角莲中提取多糖,Sevag法除蛋白纯化多糖,苯酚-硫酸分光光度法测定多糖的含量.采用噻唑蓝(MTT)法检测独角莲多糖对人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株Bel-7402抑制生长作用.结果表明:独角莲多糖具有一定的体外抗肿瘤活性,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,抑制活性明显加强.

独角莲中酪氨酸酶活性抑制成分的提取工艺研究

利用独角莲水提物对酪氨酸酶抑制活性的测试,研究独角莲水提物的提取工艺.通过L9(34)正交试验法研究了料液质量比、提取时间、提取温度和提取次数对独角莲水提物抑制酪氨酸酶活性的影响.结果表明:独角莲水提物的最佳提取工艺为料液质量比1∶15,提取时间3 h,提取温度80℃,提取次数1次,在此条件下测定独角莲水提物对酪氨酸酶的抑制率,最高为46.93%.

独角莲软胶囊抗人肝癌Hep-2荷瘤裸鼠移植瘤作用及对p53表达的影响

目的观察独角莲软胶囊对Hep-2荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用及对抑癌基因p53表达的影响,探讨其作用机制。方法背部皮下接种人肝癌Hep-2细胞悬液制备肿瘤模型。BALB/c裸鼠随机分为模型组、阳性药组和中药高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物灌胃,1次/d,连续21 d。监测瘤体积变化,HE染色观察各组瘤组织病理变化,RT-PCR检测各组Hep-2荷瘤裸鼠肿瘤组织p53基因的表达。结果与模型组比较,各给药组均能抑制肿瘤生长,抑瘤率分别为55.1%、42.8%、30.1%、79.5%,p53基因表达上调;病理观察结果显示,模型组肿瘤细胞数目增多、体积增大、胞质疏松、核深染,各给药组均有不同程度的核固缩、淡染、毛细血管数目减少和局灶性坏死。结论独角莲软胶囊具有抑制人肝癌生长作用,其机制可能与上调p53基因的表达导致细胞凋亡有关。