白花蛇舌草三大类成分的分离纯化及抗肿瘤活性测定

目的从白花蛇舌草中分离纯化总三萜、总多糖、总黄酮,并检测其抗肿瘤活性。方法将白花蛇舌草置于乙醇溶液中冷浸,对其中的三萜类、多糖和黄酮类化合物进行粗提;再通过大孔吸附树脂对粗提物进行处理,获得纯化后的总三萜、总多糖、总黄酮。通过CCK-8法检测白花蛇舌草总三萜、总多糖、总黄酮对A549细胞增殖的影响。结果三萜类化合物浸膏得率为20.60%,精制后总三萜纯度为82.73%;粗多糖得率为41.17%,精制后总多糖纯度为71.11%;黄酮类化合物浸膏得率为0.49%,精制后总黄酮纯度为38.14%。纯化后的白花蛇舌草总三萜、总黄酮和总多糖对A549细胞增殖均有抑制作用,白花蛇舌草总三萜和总黄酮对肺癌细胞A549的抑制作用明显。结论白花蛇舌草总三萜、总黄酮、总多糖均抑制肺癌A549细胞的增殖,为白花蛇舌草总黄酮、总多糖、总三萜的抗肿瘤作用研究提供了一定的参考。

QAMS多组分定量联合PCA、OPLS-DA及GRA分析法评价白花蛇舌草的质量

目的:采用高效液相-一测多评(HPLC-QAMS)法联合化学计量学及灰色关联度分析法评价白花蛇舌草质量。方法:采用Alltima C_(18)色谱柱(5.0μm,250.0 mm×4.6 mm),0.2%磷酸-乙腈为流动相梯度洗脱;以芦丁为参照物,建立其与京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇和β-谷甾醇的相对校正因子并进行校正因子耐用性考察。同时采用ESM和QAMS法测定收集到的16批白花蛇舌草中该13种成分的含量,再运用统计软件进行化学计量学及灰色关联度分析。结果:13种成分方法学验证均符合2020年版《中华人民共和国药典》要求。京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇、β-谷甾醇与芦丁的平均相对校正因子分别为0.9489、0.7033、0.7824、1.1359、0.5845、0.8005、0.8933、1.0683、0.7406、0.8640、0.6745、0.5424。两种方法测定结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。化学计量学方法显示16批白花蛇舌草聚为3类,呈现一定的产区差异。芦丁、车叶草苷酸、京尼平苷和齐墩果酸是影响白花蛇舌草产品质量的主要潜在标志物。GRA法分析结果显示7个省中浙江和江西地区所得白花蛇舌草质量最优。结论:本试验所建立的方法操作便捷、结果准确,结合化学计量学及GRA方法可用于白花蛇舌草质量的综合评价。

白花蛇舌草治疗非小细胞肺癌的药理机制及研究进展

非小细胞肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其早期症状不明显,多数患者错过最佳治疗时机。目前非小细胞肺癌的主要治疗方法包括:手术、放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗等。治疗带来的不良反应明显且易产生耐药,肿瘤复发转移风险较高,多数患者预后不佳。随着中医药抗肿瘤研究的不断深入,在抗肿瘤、减少不良反应方面取得了显著成果,探索中药抗肿瘤机制,受到了人们广泛的关注。中医认为正虚与邪毒相互作用,痰、湿、瘀、毒等蕴结于肺脏,日久成积,白花蛇舌草作为临床常用中药,功可清热解毒、利尿消肿、活血止痛。现代药理学研究发现白花蛇舌草含有黄酮类、萜类、蒽醌类及甾醇类等抗癌活性成分。该研究对白花蛇舌草有效成分的药理作用及其治疗非小细胞肺癌的药理机制进行综述,并对白花蛇舌草的药对及复方进行归纳梳理,为非小细胞肺癌的相关研究及临床治疗提供参考价值。

白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位的抗肿瘤作用。方法将接种S180肉瘤细胞的小鼠分为阴性组、阳性(环磷酰胺,CTX)组、白:半配对组,白半水提醇溶组以及白半水提醇沉组。给药12 d后,称重,取材,记录瘤重,计算抑瘤率、生长抑制率,记录肝脏、脾脏质量并计算指数。HE染色方法观察肿瘤组织细胞的形态学特征,ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量,细胞免疫荧光标记法检测细胞凋亡。结果CTX组、不同给药组抑瘤率分别为83.46%、50.82%、32.79%、36.61%。与阴性对照组相比,CTX组肝指数、脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);给药各组肝指数和脾指数,明显升高(P<0.05,P<0.01)。HE染色显微镜观察,瘤组织出现大面积坏死区,但提取物组细胞坏死较少。用ELISA法测得,各中药给药组能提高机体IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平。体外细胞凋亡实验初步证明白花蛇舌草、半枝莲药对具有细胞毒作用,其提取物细胞毒作用减弱。结论白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位均具有抗肿瘤作用,提取分离后各部分作用均有所减弱,说明中药配伍作用的合理性以及综合性。

HPLC法测定白花蛇舌草注射液中3，4-二羟基苯甲酸甲酯的含量

目的用HPLC法测定白花蛇舌草注射液中3，4-二羟苯甲酸甲酯的含量。方法采用ODS柱（200mm×4．6mm，5μm），以甲醇-体积分数为0．05％的磷酸水溶液（体积比为15：85）为流动相，在254nm波长处检测。结果3，4-二羟基苯甲酸甲酯质量浓度在5．0-50．0mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9994）；样品的加样回收率为99．3％（n=9），方法精密度及重现性良好,RSD小于1．3％。结论方法适用于白花蛇舌草注射液中3，4-二羟基苯甲酸甲酯的含量测定。

白花蛇舌草提取物通过下调Hippo-YAP信号通路促进结肠癌细胞凋亡

目的探讨白花蛇舌草提取物熊果酸、齐墩果酸对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的熊果酸、齐墩果酸作用结肠癌(HCT-8)细胞24、48、72 h后,CCK-8法、平板克隆形成实验检测HCT-8细胞的存活情况。筛选最佳实验条件,将细胞分为对照组和实验组,各组细胞做成细胞爬片,细胞免疫荧光检测YAP1蛋白水平。各组细胞消化离心做成细胞蜡块,免疫组织化学方法检测YES相关蛋白(YAP1)、p53基因(p53)、尾型同源盒转录因子2(CDX-2)、白介素6(IL-6)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白水平。结果白花蛇舌草提取物可不同程度抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖。细胞免疫荧光结果显示,对照组YAP1蛋白表达较实验组强。免疫组化结果显示YAP1的表达与TNF-α的表达有一定相关性。结论白花蛇舌草提取物通过抑制Hippo-YAP信号通路的活性,抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖,诱导其凋亡。白花蛇舌草提取物可能是一种潜在的肠癌治疗药物。

白花蛇舌草注射液中对香豆酸的药代动力学研究

目的:建立反相高效液相色谱法对白花蛇舌草中对香豆酸进行药代动力学研究。方法:血浆样品用甲醇沉淀蛋白,采用Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1%醋酸(21:79,v/v),流速1.0 mL·min-1,检测波长为 322 nm,进样量为20 μL,内标为橙皮苷。结果:对香豆酸浓度在0.085-10.6μg·mL-1(r=0.9990)时与对香豆酸和橙皮苷峰面积比呈良好的线性关系,提取回收率和方法回收率分别为97.6%-110.0%和96.1%-100.5%,日内和日间的RSD均小于10%,大鼠腹腔注射白花蛇舌草注射液后,对香豆酸的药动学行为符合二室模型,Ka为(0.260±0.050)min-1,T1/2(Ka)为 (6.77±3.34)min,T1/2α为(33.83±8.52)min,T1/2β为(2.78±0.58)min,k21为(0.0676±0.0538)min-1,k10为(0.0489± 0.0154)min-1,k12为(0.0463±0.0354)min-1,AUC为(124.3±62.8)μg·min·mL-1,Tmax和Cmax实测值分别为(6.19± 0.99)min和(3.27±1.46)μg·mL-1。结论:该方法灵敏、准确,适合于对香豆酸的药代动力学研究。

中药白花蛇舌草抗炎作用研究进展

白花蛇舌草是具有清热解毒作用的一味常用中药,其性寒味苦,临床上具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗氧化、增强机体免疫等作用。白花蛇舌草临床抗炎作用较佳,可用于治疗肝炎、阑尾炎、扁桃体炎、盆腔炎、甲状腺炎等炎症疾病,其有效成分、药理效应和机制作用成为研究热点,现已有研究表明,白花蛇舌草有效抗炎活性成分包括黄酮类、萜类、苯丙素类、蒽醌类、甾醇类等,但对其抗炎机制的研究并不完善,多与免疫系统的调节有关,主要包括刺激淋巴细胞和巨噬细胞的增殖作用。该文对白花蛇舌草具有抗炎功效的有效成分、临床使用、药理效应和抗炎机制进行总结归纳,为寻找白花蛇舌草抗炎作用的特效成分提供参考,以利于其在临床中更好地使用,也为其在科研中进一步开发提供新思路与新方法。

基于分子和形态学证据确定传统中药白花蛇舌草及其替代品的学名(英文)

白花蛇舌草是我国重要的传统中药,主要是指茜草科(Rubiaceae)钮扣草族(Spermacoceae)的Oldenlandia diffusa,但伞房花耳草(O.corymbosa)在民间或中药市场也常被作为替代品使用。由于长期以来Hedyotis-Oldenlandia复合群的分类存在许多争论,因此白花蛇舌草有时被归入非洲耳草属(Oldenlandia L.),有时又作为广义耳草属(Hedyotis L.s.l.)的成员。为了澄清白花蛇舌草命名上的问题,基于7个叶绿体片段和2个核基因片段对钮扣草族85个分类群进行了系统发育分析。结果表明,白花蛇舌草不属于以上两属中的任何一属,而应为蛇舌草属[Scleromitrion(Wight&Arn.)Meisn.]的成员。依此结果,对5种植物进行了新组合,并提供了白花蛇舌草和伞房花耳草的形态学比较,以有助于在实践中更好地进行区分。

白花蛇舌草不同提取液抗炎镇痛效应及化学成分比较研究

目的比较白花蛇舌草水提液和醇提液体内外抗炎效应及化学成分的差异。方法以二甲苯致耳肿胀和醋酸致扭体小鼠实验模型评价两种提取液的体内抗炎镇痛效应;以LPS诱导RAW264.7巨噬细胞模型评价其体外抗炎效应,ELISA法检测小鼠血清中IL-6、TNF-α和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平。应用高效液相色谱方法建立两种提取液的HPLC指纹图谱。结果两种提取液均可减轻小鼠耳肿胀和减少扭体次数,降低血清中IL-6、TNF-α水平,抑制细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的浓度,且水提液总抗炎效应优于醇提液。白花蛇舌草水提液和醇提液分别标定了36个、40个共有峰;两者共有成分峰31个,且含量有差异;指认4个共有成分,分别为咖啡酸、对香豆酸、芦丁、槲皮素,水提液中咖啡酸、对香豆酸含量较高,芦丁和槲皮素含量在水醇液中明显。结论白花蛇舌草水提液和醇提液在抗炎效应和化学成分上有差异,水提液总抗炎药效优于醇提液,与醇提液的差异成分发挥着主要抗炎效应。

超声波辅助提取白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸工艺研究

目的：优化并确定白花蛇舌草的最佳超声提取工艺。方法：采用L_9（3~4）正交试验设计,考察超声提取工艺中乙醇浓度、溶剂用量及提取时间三个主要因素对齐墩果酸和熊果酸提取效率的影响。结果：超声提取的最佳提取条件为：用40 m L的100%乙醇超声提取30 min。结论：超声波辅助提取工艺稳定可行,可用于白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的提取。

基于干预信号通路探索白花蛇舌草抗癌作用机制

白花蛇舌草具有清热解毒、活血止痛、利尿消肿的作用,主要用于临床上肿瘤的辅助治疗。肿瘤的发生通常伴随着信号通路的改变,白花蛇舌草可诱导信号通路改变以发挥抗癌作用。该文对近几年基于干预细胞通路对白花蛇舌草抗癌作用机制的研究情况加以综述,为该药材的进一步深入研究和临床应用提供参考。

“半枝莲-白花蛇舌草”药对治疗胃癌的网络药理学作用机制分析

目的基于网络药理学,探讨"半枝莲-白花蛇舌草"药对治疗胃癌(GC)的有效活性成分及作用机制。方法通过TCMSP数据库选取"半枝莲-白花蛇舌草"药对中含有的131个化合物,筛选其活性成分及潜在靶点;通过人类孟德尔遗传数据库、GeneCards数据库挖掘GC疾病靶点;结合化合物及疾病靶点,构建化合物-靶点网络图,并进行GO功能富集及KEGG通路富集分析。结果 "半枝莲-白花蛇舌草"药对中含有34个活性成分,对应GC161个靶点;主要通过调控RNA聚合酶II启动子、胞质、胞外间隙、血管生成、细胞凋亡信号通路等治疗胃癌,主要涉及肿瘤信号通路、蛋白聚糖信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、p53信号通路等。结论 "半枝莲-白花蛇舌草"药对治疗胃癌的作用机制确切,这为临床中医治疗胃癌提供了客观依据,亦可指导"半枝莲-白花蛇舌草"药对治疗胃癌作用机制的实验研究。

国医大师潘敏求治疗结直肠癌的用药规律分析

目的探讨国医大师潘敏求治疗结直肠癌的用药规律,为临床用药提供参考。方法收集整理潘教授治疗结直肠癌的医案,将处方录入Excel 2010建立数据库,采用古今医案云平台(V2.3.5)进行单味中药的频次分析、中药属性频次分析、药物归经频次统计、关联规则和聚类分析,使用Excel进行药物功效频次统计。结果纳入的300首方剂中,共使用中药138味,累计使用频次5620次,共获得甘草、白术、黄芪、茯苓、白花蛇舌草、女贞子、菟丝子、人参、枸杞子、莪术等15味核心药物,药味多甘、苦、辛,主要归脾、肝、肺经。关联规则分析获得黄芪-白术、黄芪-茯苓、白术-茯苓等50组核心药对。聚类分析获得C1(莪术、重楼)、C2(茯苓、甘草、白术、黄芪、白花蛇舌草)等3个聚类方。结论国医大师潘敏求治疗结直肠癌多从瘀、毒、虚入手,采用健脾益气、清热解毒化瘀治法,擅长攻补兼施,取得较好临床疗效。

黄芪与白花蛇舌草配伍应用举隅

黄芪功能补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌,白花蛇舌草功能清热解毒、利湿通淋。两药成对,扶正祛邪,协同增效,临床随证加味治疗多种病证如上呼吸道感染、慢性胃炎、结肠癌术后化疗反应等,每获佳效。

UPLC法测定白花蛇舌草注射液中对香豆酸的含量

目的建立白花蛇舌草注射液中对香豆酸的含量测定方法。方法采用ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm,1.7μm）为色谱柱,以甲醇—0.3%醋酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.4 m L·min^-1,检测波长为308 nm。结果对香豆酸进样量在1.68-67.12 ng范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 99,平均加样回收率为99.8%,RSD为0.7%。测得16批样品中对香豆酸的平均含量为0.204 g·L^-1。结论该方法简便准确,快速可靠,能够用于白花蛇舌草注射液的含量测定和质量控制。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

白花蛇舌草不同极性部位抗血管生成及抗氧化活性研究

目的:研究白花蛇舌草不同极性部位的体外抗血管生成和抗氧化活性,以期为白花蛇舌草深入研究与开发提供理论依据。方法:使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对95%乙醇提取物水溶液依次萃取,得到4种不同极性部位。人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成实验初步观察各极性部位抗血管生成活性;以总还原力、DPPH·和·OH清除率为评价指标,考察各萃取物抗氧化能力。结果:石油醚、乙酸乙酯萃取物对HUVEC管腔形成有较好抑制作用;乙酸乙酯部位总还原力高于其他部位;DPPH·清除率顺序为:乙酸乙酯>正丁醇>石油醚>水部位,其IC50值分别为0.110 mg/m L、0.122 mg/m L、0.473 mg/m L和0.754 mg/m L,·OH清除率顺序为:石油醚>正丁醇>乙酸乙酯>水部位,其中石油醚部位清除·OH线性关系较好,线性方程为y=38.565x-40.991,IC50值为2.374 mg/m L。不同极性部位对HUVEC管腔形成的抑制和抗氧化活性呈浓度依赖关系,DPPH·清除率呈时间依赖关系。结论:白花蛇舌草不同极性部位具有一定抗氧化活性,同时能抑制HUVEC管腔形成。

白花蛇舌草-半枝莲药对治疗非小细胞肺癌的网络药理学研究

目的:利用网络药理学方法,研究白花蛇舌草-半枝莲药对治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的分子机制。方法:检索中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP),筛选并预测白花蛇舌草-半枝莲药对的有效活性成分与作用靶点。检索人类基因数据库(GeneCards)获取与NSCLC相关的基因。结合网络构建与分析等相关方法,筛选白花蛇舌草-半枝莲药对治疗NSCLC的关键靶点。使用富集分析数据库(DAVID)对关键靶点进行基因本体论(GO)生物学过程分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:从TCMSP获取药对成分131种,按照药物代谢动力学(ADME)筛选出有效活性成分33种,预测作用靶点196个。挖掘GeneCards获取基因3015个。利用图形化显示网络分析和编辑软件(Cytoscape)分别构建活性成分与疾病的蛋白质-蛋白质相互作用网络,抽取合并网络后进行拓扑属性分析,筛选出关键靶点142个。对关键靶点进行GO生物学过程与KEGG通路富集分析显示,主要涉及265种生物学过程与114条信号通路,与NSCLC发生发展密切相关。结论:白花蛇舌草-半枝莲药对治疗NSCLC,具有多成分、多途径、多靶点的特点,其主要涉及RNA转录启动、细胞凋亡、细胞表皮生长、细胞增殖、T细胞调节等癌症相关生物学过程,并在多种癌症相关通路均有富集。

白花蛇舌草核苷提取物制备工艺研究

目的:考察白花蛇舌草核苷提取工艺及提取物制备工艺。方法:以总核苷的含量为指标,通过正交实验法优选白花蛇舌草核苷的最佳提取工艺。通过单因素考察优选白花蛇舌草核苷提取物浓缩工艺、醇沉工艺以及大孔树脂的纯化工艺。采用高效液相色谱法(HPLC)以尿苷、腺嘌呤、腺苷总含量为指标测定总核苷的含量。结果:白花蛇舌草核苷的最优提取方法为加水煎煮3次,每次加10倍量水煎煮1 h得水提液;将水提液减压浓缩,浓缩液采用70%乙醇进行醇沉,减压浓缩回收乙醇,得到浓缩液以1 M盐酸对732型阳离子交换树脂柱进行洗脱精制。经HPLC检测,总核苷含量为25%以上。结论:优选的制备工艺简单、可行,制备的白花蛇舌草总核苷提取物含量较高。