不同配伍比例的半枝莲-白花蛇舌草药对对肝癌细胞增殖活性的影响

目的:研究不同配伍比例的半枝莲-白花蛇舌草药对(简称半白药对,SB-OD)对肝癌细胞株(MHCC97H细胞和Huh7细胞)增殖活性的抑制作用。方法:运用CCK-8法观察不同配伍比例的半白药对(半白1∶1,半白2∶1,半白1∶2)干预MHCC97H和Huh7细胞24 h,分别计算其IC_(50)值;并应用细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,分析不同配伍比例的半白药对对MHCC97H和Huh7细胞增殖活性的影响。结果:不同配伍比例的半白药对作用MHCC97H和Huh7细胞后的生存活力明显下降(P<0.01),并呈浓度依赖性,其中半白1∶1组作用于MHCC97H和Huh7细胞的IC_(50)值分别为6.69 mg/mL和7.95 mg/mL;半白2∶1组作用于MHCC97H和Huh7细胞的IC_(50)值分别为2.58 mg/mL和3.43 mg/mL;半白1∶2组作用于MHCC97H和Huh7细胞的IC_(50)值分别为15.04 mg/mL和16.60 mg/mL。不同配伍比例的半白药对干预MHCC97H和Huh7细胞后的克隆形成率明显降低(P<0.01)。结论:不同配伍比例的半白药对均能够抑制肝癌MHCC97H和Huh7细胞的增殖活性,2∶1配伍比例的抑制作用最佳,可作为半白药对抗肿瘤研究的实验基础。

多维度评价电子束辐照灭菌对白花蛇舌草质量的影响

为多维度评价电子束辐照灭菌技术在白花蛇舌草中的应用前景,研究考察了电子束辐照灭菌对白花蛇舌草微生物水平、化学成分含量、指纹图谱、体外抗氧化活性及细胞存活率的影响。结果表明,电子束辐照灭菌对白花蛇舌草中微生物具有明显杀灭作用。吸收剂量2~10 kGy时,白花蛇舌草中芦丁与车叶草苷含量、3种抗氧化活性、细胞存活率较灭菌前均无显著差异(P>0.05),吸收剂量大于10 kGy时,抗氧化活性及十六烷酸甲酯含量降低,建议安全吸收剂量为4~10 kGy。灭菌后白花蛇舌草指纹图谱较对照指纹图谱的相似度均大于0.90。液质联用(LC-MS)确认了指纹图谱中14个共有峰结构,灰色关联度分析(GRA)显示14个共有峰与3种抗氧化活性的关联度(r)均大于0.5,其中与1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)反应率超过50%的峰为8、10、11号峰。本研究可为电子束辐照灭菌技术在白花蛇舌草生产中的应用提供科学依据。

清热解毒法在恶性肿瘤治疗中的临床应用

现代中医肿瘤学的癌毒病机理论提出,清热解毒法为治疗恶性肿瘤的抗癌解毒八法之一,可在恶性肿瘤治疗中广泛应用。清热解毒法治疗恶性肿瘤的临床应用需基于辨证、辨病、分期、辨体相结合的综合辨治模式。若肿瘤患者热毒证候明显,辨证应用清热解毒法无疑;若热毒不明显或无证可辨,结合现代肿瘤的病理本质特征,在不违背整体遣方用药原则下,可辨病应用清热解毒法以发挥抗癌祛毒之效。清热解毒法本质属于攻法,其辨证或辨病应用均应以患者正气强弱为考量因素,同时还需结合患者的肿瘤分期、体质因素等。辨证应用强调了清热解毒法运用于肿瘤热毒证的普遍性,辨病应用突破了清热解毒法仅用于宏观热毒证的局限性,分期应用体现了清热解毒法阶段性使用的精准性,辨体应用则体现了清热解毒法应用过程中的个体性。辨证、辨病、分期、辨体4种辨治模式当相互参照、综合运用,方可取得显效。治疗肿瘤常用的清热解毒药物有白花蛇舌草、半枝莲、重楼、天葵子、漏芦、山豆根等。

白花蛇舌草三大类成分的分离纯化及抗肿瘤活性测定

目的从白花蛇舌草中分离纯化总三萜、总多糖、总黄酮,并检测其抗肿瘤活性。方法将白花蛇舌草置于乙醇溶液中冷浸,对其中的三萜类、多糖和黄酮类化合物进行粗提;再通过大孔吸附树脂对粗提物进行处理,获得纯化后的总三萜、总多糖、总黄酮。通过CCK-8法检测白花蛇舌草总三萜、总多糖、总黄酮对A549细胞增殖的影响。结果三萜类化合物浸膏得率为20.60%,精制后总三萜纯度为82.73%;粗多糖得率为41.17%,精制后总多糖纯度为71.11%;黄酮类化合物浸膏得率为0.49%,精制后总黄酮纯度为38.14%。纯化后的白花蛇舌草总三萜、总黄酮和总多糖对A549细胞增殖均有抑制作用,白花蛇舌草总三萜和总黄酮对肺癌细胞A549的抑制作用明显。结论白花蛇舌草总三萜、总黄酮、总多糖均抑制肺癌A549细胞的增殖,为白花蛇舌草总黄酮、总多糖、总三萜的抗肿瘤作用研究提供了一定的参考。

QAMS多组分定量联合PCA、OPLS-DA及GRA分析法评价白花蛇舌草的质量

目的:采用高效液相-一测多评(HPLC-QAMS)法联合化学计量学及灰色关联度分析法评价白花蛇舌草质量。方法:采用Alltima C_(18)色谱柱(5.0μm,250.0 mm×4.6 mm),0.2%磷酸-乙腈为流动相梯度洗脱;以芦丁为参照物,建立其与京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇和β-谷甾醇的相对校正因子并进行校正因子耐用性考察。同时采用ESM和QAMS法测定收集到的16批白花蛇舌草中该13种成分的含量,再运用统计软件进行化学计量学及灰色关联度分析。结果:13种成分方法学验证均符合2020年版《中华人民共和国药典》要求。京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇、β-谷甾醇与芦丁的平均相对校正因子分别为0.9489、0.7033、0.7824、1.1359、0.5845、0.8005、0.8933、1.0683、0.7406、0.8640、0.6745、0.5424。两种方法测定结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。化学计量学方法显示16批白花蛇舌草聚为3类,呈现一定的产区差异。芦丁、车叶草苷酸、京尼平苷和齐墩果酸是影响白花蛇舌草产品质量的主要潜在标志物。GRA法分析结果显示7个省中浙江和江西地区所得白花蛇舌草质量最优。结论:本试验所建立的方法操作便捷、结果准确,结合化学计量学及GRA方法可用于白花蛇舌草质量的综合评价。

白花蛇舌草治疗非小细胞肺癌的药理机制及研究进展

非小细胞肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其早期症状不明显,多数患者错过最佳治疗时机。目前非小细胞肺癌的主要治疗方法包括:手术、放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗等。治疗带来的不良反应明显且易产生耐药,肿瘤复发转移风险较高,多数患者预后不佳。随着中医药抗肿瘤研究的不断深入,在抗肿瘤、减少不良反应方面取得了显著成果,探索中药抗肿瘤机制,受到了人们广泛的关注。中医认为正虚与邪毒相互作用,痰、湿、瘀、毒等蕴结于肺脏,日久成积,白花蛇舌草作为临床常用中药,功可清热解毒、利尿消肿、活血止痛。现代药理学研究发现白花蛇舌草含有黄酮类、萜类、蒽醌类及甾醇类等抗癌活性成分。该研究对白花蛇舌草有效成分的药理作用及其治疗非小细胞肺癌的药理机制进行综述,并对白花蛇舌草的药对及复方进行归纳梳理,为非小细胞肺癌的相关研究及临床治疗提供参考价值。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

白花蛇舌草水提部位体内外抗肿瘤实验研究

目的探讨白花蛇舌草水提部位(HD-1)体内外抗肿瘤活性。方法体外实验采用MTT法检测HD-1对人肝癌细胞HepG2、人直结肠癌细胞株HCT-116的生长抑制作用;体内实验采用S180实体瘤小鼠动物模型评价HD-1不同剂量(100,50 mg.kg-1)对S180肉瘤的生长抑制作用及对荷瘤小鼠体重、抑瘤率、胸腺指数、脾指数等的影响。结果 HD-1在体外可显著抑制HepG2、HCT-116肿瘤细胞的增值,其效果与剂量和作用时间相关;体内试验表明,与模型组比较,HD-1高、中剂量组(100,50 mg.kg-1)显著抑制S180肉瘤生长,平均抑制率分别为12.5%和33.1%,脾指数显著升高(P<0.05);环磷酰胺(CTX)联合HD-1中剂量组与CTX(20mg.kg-1)组比较,联合组胸腺指数、脾脏指数、肝指数显著提高(P<0.05),肺指数显著降低(P<0.01)。结论 HD-1在体外能明显抑制HepG2、HCT-116细胞的增值,体内能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤生长。

白花蛇舌草乙醇提取物对人肾癌细胞786-0体外增殖及小鼠肾癌细胞786-0移植瘤生长的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDH)对人肾癌786-0细胞体外增殖及小鼠肾癌细胞786-0移植瘤生长的影响。方法 (1)将人肾癌细胞786-0分为观察1、2、3、4组和对照组,观察1、2、3、4组分别加入终浓度为10、20、40、80 mg/L的EEHDH,对照组加入等体积培养液。培养24、48、72 h后采用MTT法于490 nm处测量吸光度值(OD490值)。(2)取42只昆明小鼠,随机分为7组,分别为模型组、EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组、EEHDH高剂量组、环磷酰胺组、EEHDH中剂量联合环磷酰胺组、对照组,每组6只。除对照组小鼠正常饲养不处理外,余36只小鼠每只左后肢腋窝皮下接种0.2 mL肿瘤细胞悬液,24 h后称重。模型组灌胃等体积饮用水14 d;EEHDH低、中、高剂量组分别灌胃EEHDH 5.0、10.0、20.0 g/kg,1次/d,共14 d;环磷酰胺组每2 d灌胃1次20 mg/kg环磷酰胺,共灌胃7次;EEHDH中剂量联合环磷酰胺组在1、3、5天灌胃环磷酰胺20 mg/kg,第6天开始灌胃10.0 g/kg的EEHDH,1次/d,共9次。末次给药24 h后给各组小鼠称重,处死动物称瘤重,计算EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组、EEHDH高剂量组、环磷酰胺组、EEHDH中剂量联合环磷酰胺组抑瘤率。另分离各组小鼠胸腺、脾脏,精密称重,计算胸腺指数、脾脏指数。结果 (1)相同培养时间条件下观察1、2、3、4组人肾癌细胞786-0的OD490值与对照组相比均较低(P均<0.05)。人肾癌细胞786-0的OD490值随着培养时间的延长和EEHDH剂量的增加而降低(P均<0.05)。(2)实验结束时,模型组、EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组、EEHDH高剂量组、环磷酰胺组、EEHDH中剂量联合环磷酰胺组瘤重分别为(2.31±0.28)、(1.94±0.22)、(1.59±0.26)、(1.52±0.23)、(0.92±0.24)、(0.86±0.23)g,EEHDH低剂量组、EEHDH中剂量组、EEHDH高剂量组、环磷酰胺组、EEHDH中剂量联合环磷酰胺组抑瘤率分别为16.02%、31.22%、34.26%、60.20%、62.77%。EEHDH中剂量联合环磷酰胺Q值为0.87。模型组小鼠胸腺指数、脾脏指数与对照组相比均较高(P均<0.05)。环磷酰胺组小鼠胸腺指数、脾脏指数与模型组相比均较低(P均<0.05)。EEHDH低、中、高剂量组小鼠脾脏指数与模型组相比均较高(P均<0.05),胸腺指数与模型组相比P均>0.05。EEHDH中剂量联合环磷酰胺组胸腺指数、脾脏指数与环磷酰胺组相比均较高(P均<0.05)。结论 EEHDH在体外能明显抑制人肾癌细胞786-0的增殖,在体内能显著抑制小鼠肾癌细胞786-0移植瘤生长,其机制可能与EEHDH提高脾脏功能有关。

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤细胞凋亡的影响

目的观察白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤小鼠瘤组织细胞凋亡的影响。方法以经过白花蛇舌草和党参处理后的小鼠活体腹水H22肝癌细胞免疫小鼠,用HSP70单抗封闭后分为白花蛇舌草未封闭组与封闭组、党参未封闭组与封闭组以及空白对照组,共5组,每组10只,然后再以培养的H22肝癌细胞攻击小鼠形成移植瘤;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法原位检测移植瘤小鼠瘤组织细胞凋亡的情况。结果白花蛇舌草组移植瘤小鼠瘤组织细胞核中可见较多棕褐色阳性颗粒,与党参组相比,细胞凋亡数及染色强度明显增多、增强;白花蛇舌草及党参组细胞凋亡的情况与空白对照组比较,差异均具有显著性,尤以白花蛇舌草组更为明显。尽管白花蛇舌草和党参未封闭组与封闭组组间细胞凋亡的差异并无显著性,但白花蛇舌草未封闭组较封闭组具有凋亡数增多和染色强度增强的趋势。结论白花蛇舌草可能通过诱导H22肝癌细胞移植瘤小鼠瘤组织HSP70表达,在一定程度上促进肝癌细胞凋亡而达到抗肿瘤的作用。

白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位的抗肿瘤作用。方法将接种S180肉瘤细胞的小鼠分为阴性组、阳性(环磷酰胺,CTX)组、白:半配对组,白半水提醇溶组以及白半水提醇沉组。给药12 d后,称重,取材,记录瘤重,计算抑瘤率、生长抑制率,记录肝脏、脾脏质量并计算指数。HE染色方法观察肿瘤组织细胞的形态学特征,ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量,细胞免疫荧光标记法检测细胞凋亡。结果CTX组、不同给药组抑瘤率分别为83.46%、50.82%、32.79%、36.61%。与阴性对照组相比,CTX组肝指数、脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);给药各组肝指数和脾指数,明显升高(P<0.05,P<0.01)。HE染色显微镜观察,瘤组织出现大面积坏死区,但提取物组细胞坏死较少。用ELISA法测得,各中药给药组能提高机体IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平。体外细胞凋亡实验初步证明白花蛇舌草、半枝莲药对具有细胞毒作用,其提取物细胞毒作用减弱。结论白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位均具有抗肿瘤作用,提取分离后各部分作用均有所减弱,说明中药配伍作用的合理性以及综合性。

白花蛇舌草对H22肝癌细胞热休克蛋白70表达的影响

【目的】观察H22肝癌细胞热休克蛋白70(HSP70)表达及清热解毒中药白花蛇舌草对其表达的影响。【方法】以培养的H22肝癌细胞腹腔接种于小鼠使小鼠致瘤,然后将荷瘤小鼠分为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(剂量为25 g/kg)及热休克处理组共4组。采用免疫组化标记法检测各组活体腹水H22肝癌细胞HSP70的表达情况。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组H22肝癌细胞HSP70的表达显著性高于模型组(P<0.05或P<0.01);党参对照组H22肝癌细胞的HSP70表达与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】白花蛇舌草可能通过诱导H22肝癌细胞HSP70表达,增强其免疫原性而发挥抗肿瘤作用。

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(1、3、5、10 mg.mL-1)白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响,并用5 mg.mL-1浓度干预1、3、6、12、24、48 h观察对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA的表达。结果白花蛇舌草乙醇提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小,最终悬浮脱落而死亡;HT-29细胞增殖受到抑制,并呈现出量效和时效关系;白花蛇舌草乙醇提取物能明显下调HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA表达,并随药物浓度的增加而减少,呈一定的量效作用。结论白花蛇舌草乙醇提取物能显著抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖以及下调Pim-1和Pim-2的mRNA表达。

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤T淋巴细胞的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤鼠瘤体T淋巴细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞,采用HSP70单抗封闭技术分为白花蛇舌草和党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组;观察各组CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况。结果与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+、封闭组CD4+表达明显上调;党参封闭组CD4+表达也明显上调;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+T淋巴细胞表达明显上调。结论白花蛇舌草诱导恶性肿瘤瘤体HSP70的高表达,增强机体对肿瘤的免疫作用,其机理可能与提高瘤体CD4+、CD8+CTL表达有关。

白花蛇舌草对肝癌细胞移植瘤HSP70及P16表达的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤组织HSP70及P16抑癌基因蛋白表达的影响。方法将经中药处理后的H22肝癌细胞免疫小鼠,以HSP70单抗封闭后分为白花蛇舌草未封闭、封闭组,党参未封闭、封闭组及RPMI-1640空白对照组,共5组,然后再以培养的H22肝癌细胞攻击小鼠形成移植瘤。免疫组化标记法检测各组小鼠移植瘤组织HSP70及P16抑癌基因蛋白的表达。结果白花蛇舌草及党参未封闭组HSP70蛋白的表达上调,尤以白花蛇舌草组上调较为明显,与两药封闭组及空白对照组之间比较,具有显著性差异。白花蛇舌草及党参未封闭组、封闭组P16抑癌基因蛋白的表达均上调,与空白对照组比较,差异均具有显著性;白花蛇舌草上调P16抑癌基因蛋白的作用强于党参,但两药未封闭与封闭组之间比较,并无显著性差异。结论白花蛇舌草可能是通过诱导H22肝癌细胞移植瘤组织HSP70的表达,提高其免疫原性而达到抗肿瘤的作用。白花蛇舌草及党参上调P16抑癌基因蛋白表达的作用似乎与HSP70的诱导没有直接联系。

白花蛇舌草提取物通过下调Hippo-YAP信号通路促进结肠癌细胞凋亡

目的探讨白花蛇舌草提取物熊果酸、齐墩果酸对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的熊果酸、齐墩果酸作用结肠癌(HCT-8)细胞24、48、72 h后,CCK-8法、平板克隆形成实验检测HCT-8细胞的存活情况。筛选最佳实验条件,将细胞分为对照组和实验组,各组细胞做成细胞爬片,细胞免疫荧光检测YAP1蛋白水平。各组细胞消化离心做成细胞蜡块,免疫组织化学方法检测YES相关蛋白(YAP1)、p53基因(p53)、尾型同源盒转录因子2(CDX-2)、白介素6(IL-6)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白水平。结果白花蛇舌草提取物可不同程度抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖。细胞免疫荧光结果显示,对照组YAP1蛋白表达较实验组强。免疫组化结果显示YAP1的表达与TNF-α的表达有一定相关性。结论白花蛇舌草提取物通过抑制Hippo-YAP信号通路的活性,抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖,诱导其凋亡。白花蛇舌草提取物可能是一种潜在的肠癌治疗药物。

中药白花蛇舌草抗炎作用研究进展

白花蛇舌草是具有清热解毒作用的一味常用中药,其性寒味苦,临床上具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗氧化、增强机体免疫等作用。白花蛇舌草临床抗炎作用较佳,可用于治疗肝炎、阑尾炎、扁桃体炎、盆腔炎、甲状腺炎等炎症疾病,其有效成分、药理效应和机制作用成为研究热点,现已有研究表明,白花蛇舌草有效抗炎活性成分包括黄酮类、萜类、苯丙素类、蒽醌类、甾醇类等,但对其抗炎机制的研究并不完善,多与免疫系统的调节有关,主要包括刺激淋巴细胞和巨噬细胞的增殖作用。该文对白花蛇舌草具有抗炎功效的有效成分、临床使用、药理效应和抗炎机制进行总结归纳,为寻找白花蛇舌草抗炎作用的特效成分提供参考,以利于其在临床中更好地使用,也为其在科研中进一步开发提供新思路与新方法。

半枝莲和白花蛇舌草总多糖对S_(180)荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的:探讨半枝莲和白花蛇舌草总多糖对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤及其免疫调节作用。方法:采用MTT比色法检测肿瘤细胞的生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期的改变;建立S180荷瘤小鼠模型,观察小鼠肿瘤的生长情况,计算抑瘤率、胸腺与脾脏指数;观察对荷瘤小鼠体液免疫功能及网状内皮系统吞噬功能的影响。以上动物试验在造模同时灌胃给予不同剂量的半枝莲和白花蛇舌草总多糖和环磷酰胺,模型组和正常组动物给予等容量的生理盐水。结果:浓度为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的半枝莲和白花蛇舌草总多糖均可抑制S180肿瘤细胞株的体外增殖,且抑制作用呈浓度-效应依赖性,100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL使G0/G1期细胞百分数增加,G2/M期细胞百分数下降;200mg/kg对S180荷瘤小鼠瘤重生长具有明显抑制作用,并且增加其胸腺指数和脾脏指数;200mg/kg和100mg/kg明显提高S180荷瘤小鼠的血清半数溶血素值,200mg/kg显著提高荷瘤小鼠的吞噬指数K及吞噬系数α值。结论:半枝莲和白花蛇舌草总多糖对S180荷瘤小鼠具有较强抗肿瘤作用,并可以提高其免疫系统功能。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中齐墩果酸的含量及其药动学研究

目的建立大鼠血浆中齐墩果酸的LC-MS/MS测定法,并应用于灌胃白花蛇舌草提取物齐墩果酸在大鼠体内的药动学研究。方法取大鼠血浆100μL,加入10μL内标甘草次酸(5μg·mL-1),依次用乙酸乙酯800μL提取两次,上清液用氮气流吹干,100μL流动相复溶,高速离心10 min,取上清液5μL进行LC-MS/MS测定。色谱条件:Agilent 1200高效液相色谱系统,色谱柱Phenomenex Gemini 110A C18色谱柱(50 mm×2.0mm,5μm);流动相:乙腈-0.01%甲酸水梯度洗脱;柱温为40℃;流速为0.3 mL·min-1。质谱:API4000负离子MRM模式,齐墩果酸和甘草次酸的选择检测离子质荷比分别为m/z 455.3→455.3,m/z 469.4→425.3。结果齐墩果酸血浆浓度线性范围0.5～250 ng·mL-1,线性关系良好(r=0.9979),最低检测限(LOQ)为0.1 ng·mL-1,提取回收率为62.76%～65.38%,日内精密度RSD为3.55%～7.45%,日间精密度RSD为2.34%～7.60%,稳定性均符合方法学测定要求,血浆无内源性基质干扰。结论该法简便,灵敏,重复性好,可应用于测定血浆中齐墩果酸的含量并应用于灌胃白花蛇舌草提取物大鼠体内齐墩果酸的药物动力学研究。

白花蛇舌草不同提取液抗炎镇痛效应及化学成分比较研究

目的比较白花蛇舌草水提液和醇提液体内外抗炎效应及化学成分的差异。方法以二甲苯致耳肿胀和醋酸致扭体小鼠实验模型评价两种提取液的体内抗炎镇痛效应;以LPS诱导RAW264.7巨噬细胞模型评价其体外抗炎效应,ELISA法检测小鼠血清中IL-6、TNF-α和细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平。应用高效液相色谱方法建立两种提取液的HPLC指纹图谱。结果两种提取液均可减轻小鼠耳肿胀和减少扭体次数,降低血清中IL-6、TNF-α水平,抑制细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的浓度,且水提液总抗炎效应优于醇提液。白花蛇舌草水提液和醇提液分别标定了36个、40个共有峰;两者共有成分峰31个,且含量有差异;指认4个共有成分,分别为咖啡酸、对香豆酸、芦丁、槲皮素,水提液中咖啡酸、对香豆酸含量较高,芦丁和槲皮素含量在水醇液中明显。结论白花蛇舌草水提液和醇提液在抗炎效应和化学成分上有差异,水提液总抗炎药效优于醇提液,与醇提液的差异成分发挥着主要抗炎效应。