基于没食子酸分析的百药煎发酵炮制工艺研究

为了优化百药煎发酵炮制工艺,缩短发酵炮制时间,确定最适工艺参数。本文采用单因素和正交实验法,以百药煎性状和主要有效成分没食子酸含量为考察指标,考察各个因素对百药煎发酵炮制的影响。结果表明,百药煎的最适发酵炮制工艺为温度30℃,湿度75%,加水量45%,发酵炮制时间7 d。该发酵炮制工艺稳定可靠,操作性强,可为百药煎的工艺研究提供参考。

百药煎发酵过程中没食子酸含量动态变化的研究

目的:HPLC法测定百药煎发酵过程中没食子酸含量的动态变化,为百药煎发酵时间终点提供依据。方法:HPLC法检测百药煎在不同的发酵时间段性状及没食子酸含量,比较五倍子和百药煎色谱图的变化。结果:百药煎在18 h之内外观性状特征及没食子酸的含量在12 h以内变化不明显;发酵24 h外观表面开始少量薄白霜,48 h长满白霜,发酵60 h长少量棕色孢子,没食子酸的含量为215.6 mg/g;60 h后没食子酸的含量开始降低,66 h以后百药煎表面开始变黄变黑,144 h表面长满棕黑色孢子,没食子酸含量降至0.04%。结论发酵时间对没食子酸的含量影响较大,发酵60 h百药煎没食子酸含量达到最高,提示60 h可能是百药煎的最佳发酵时间。

百药煎质量标准研究

目的:建立百药煎的质量标准。方法:以没食子酸为对照品进行百药煎的薄层鉴别;采用HPLC法测定百药煎中没食子酸的含量。对百药煎水分、总灰分、酸不溶性灰分、黄曲霉毒素及显微特征进行检测。结果:百药煎的显微特征性强;薄层色谱分离度好,斑点清晰。根据7批百药煎样品测定结果,建议百药煎水分不得超过11.0%,总灰分不得超过4.0%,酸不溶性灰分不得超过1.0%;没食子酸的进样量在0.24~0.64μg(r=0.9999)其峰面积积分值与进样量有良好的线性关系,平均回收率为99.43%,RSD为0.79%,没食子酸含量不得低于33.0%。结论:所建方法操作简单,准确可靠,可用于评价百药煎的质量。

探究百药煎炮制标准统一必要性

百药煎是五倍子与酵曲茶叶发酵而成的复合中药,与五倍子在性味、归经、功效上大不同,经过发酵炮制,能大幅提高五倍子中鞣质转化为有效没食子酸的效率。笔者通过查阅大量文献资料,从百药煎炮制的原料、时间、温度以及现代与传统炮制的方法结合,进一步探究百药煎的发酵工艺,发现百药煎在不同地区有不同的炮制标准,总体发酵过程相似,但炮制工艺和质量标准均不一致,出现在不同的省份之间同药不同标的情况,因此有必要建立统一炮制工艺和质量标准,将百药煎炮制工艺按标准化推广,使其药效总体水平有所提高。

百药煎质量标准研究

目的建立百药煎的质量标准。方法以没食子酸对照品、五倍子对照药材为对照进行百药煎的薄层鉴别;参照2015年版《中国药典》附录的相关方法测定水分、总灰分、黄曲霉毒素、微生物限度;采用高效液相色谱法(HPLC)测定没食子酸的含量。结果百药煎薄层色谱分离度好,斑点清晰;根据18批百药煎样品测定结果,暂定其水分不得超过10.0%,总灰分不得超过3.0%,黄曲霉毒素、微生物限度应符合规定;没食子酸进样量在4.45~178.04μg/mL(r=1)时峰面积与进样量呈良好的线性关系,精密度,重复性,稳定性试验RSD均小于3%,加样回收率为99.0%,RSD为0.8%,根据含量测定结果暂定没食子酸含量不得低于30.0%。结论所建方法操作简单,合理可行,可用于百药煎的质量评价。

百药煎在治疗口腔疾病中的研究进展

近年关于五倍子治疗口腔疾病的应用已被广大医学者所接受,作为其发酵产物,百药煎在治疗口腔疾病中的研究越来越多。两者在主要成分上相似,但含量有所差别,百药煎中没食子酸含量较五倍子多,鞣质较五倍子少,其药理作用非常广泛,主要是抗菌、收敛作用、抗肿瘤等。在牙周病和口腔黏膜病已有较好的临床应用,在其它口腔疾病也具有较好的应用前景。本文通过查阅并分析近年来五倍子和百药煎的相关文献,综述百药煎与五倍子的差异及百药煎治疗口腔疾病的研究进展。

基于寒热证模型大鼠研究五倍子发酵百药煎的药性变化和归属

研究五倍子与百药煎对寒、热证模型大鼠的影响,揭示五倍子发酵为百药煎的药性变化和归属。建立左甲状腺素钠片灌胃给药诱导大鼠热证模型和冰水刺激诱导大鼠寒证模型,分别灌胃给予五倍子和百药煎不同剂量水煎液15 d,观察记录体征指标的变化,测定大鼠肝脏中丙酮酸(PA)含量和ATP酶活力,血清中大鼠多巴胺(DA)、甲状腺激素(T4)、磷酸腺苷(c AMP)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、17-羟皮质类固醇(17-OHCS)、促甲状腺激素释放激素(TRH)和促甲状腺激素(TSH)含量。结果热证模型组大鼠肛温、饮食饮水量及体质量升高,模型组c AMP,NE,17-OHCS,TRH,PA含量显著升高(P<0. 05),TSH,Na-K ATPase,Ca-Mg ATPase含量较空白组极显著升高(P<0. 01),5-HT含量较空白组显著降低(P<0. 05);五倍子高剂量(WG)及百药煎高剂量组(BG) T4,DA,NE,TSH,TRH,c AMP,17-OHCS含量极显著降低(P<0. 01),PA,Ca-Mg ATPase较模型组含量显著降低(P<0. 05),且五倍子高剂量组(WG)含量低于百药煎高剂量组,但无显著性差异;五倍子高剂量组及百药煎高剂量组大鼠血清5-HT含量较模型组均升高,且五倍子高剂量组含量高于百药煎高剂量组,但无显著性差异;热证模型组大鼠各脏器指数与空白组比较未出现明显改变,给药组大鼠脏器指数与模型组比较,未见显著性差异。寒证模型组、五倍子组和百药煎组大鼠均出现肛温、饮食饮水量及体质量降低,DA,T4,c AMP,NE,17-OHCS,TRH,TSH,PA,Na-K ATPase,CaMg ATPase含量较空白组均显著降低(P<0. 05),5-HT含量较空白组均显著升高(P<0. 05),心、肺、肾脏指数较空白组显著升高(P<0. 05)。五倍子和百药煎均能明显改善左甲状腺素钠所致的热症模型大鼠症状,且五倍子的效果优于百药煎,但均不能改善冰水刺激引起的寒证模型大鼠症状,提示五倍子与百药煎药性同为寒凉,但百药煎寒性弱于五倍子,发酵炮制的百药煎寒性缓和,结合临床应用药性归属“微寒”比“平”更为准确。

基于肠道菌群及肠黏膜屏障功能探索百药煎治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的:比较百药煎发酵炮制前后对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道菌群及肠黏膜中闭合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达的影响,探讨五倍子和百药煎治疗UC的作用机制,指导中医临床区别用药。方法:将50只小鼠随机分为5组,每组10只,随机选取1组为空白组,其余4组采用右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC模型;造模完成后,空白组和模型组给予生理盐水,给药组分别给予美沙拉嗪(0.8 g·kg^(-1)),五倍子水煎液(1.8 g·kg^(-1))和百药煎水煎液(2.7 g·kg^(-1))灌胃7 d;运用16S rRNA测序技术检测小鼠粪便肠道菌群的变化,苏木精-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学变化,免疫组化对比小鼠结肠组织Occludin和ZO-1的表达。结果:UC小鼠肠道菌群丰度、多样性较空白组均明显降低,结肠组织充血增厚,出现明显溃疡,Occludin和ZO-1的表达量显著降低(P<0.01)。经五倍子和百药煎治疗后,菌群丰度及多样性均有提升,门水平主要表现为五倍子组厚壁菌门、变形菌门和放线菌门相对丰度显著增加(P<0.01),拟杆菌门丰度显著减少(P<0.01);百药煎组变形菌门和放线菌门相对丰度显著增加(P<0.01),厚壁菌门相对丰度增加和拟杆菌门相对丰度减少,但差异均无统计学意义。属水平主要表现为五倍子组拟杆菌属、瘤胃球菌属和Allobaculum相对丰度显著降低(P<0.01),罗斯氏菌属、普雷沃菌属、颤螺旋菌属和帕拉普氏菌属相对丰度明显升高(P<0.05,P<0.01);百药煎组拟杆菌属和Allobaculum相对丰度明显降低(P<0.05,P<0.01),普雷沃菌属、颤螺旋菌属、罗斯氏菌属和瘤胃球菌属相对丰度显著升高(P<0.01)。与模型组比较,五倍子组和百药煎组结肠组织均明显恢复,充血减轻,仅见散在溃疡;Occludin和ZO-1的表达量升高,且百药煎组的表达量高于五倍子组。结论:百药煎治疗UC效果优于五倍子,其机制可能为通过调节肠道菌群的相对丰度和多样性,改善肠道菌群紊乱状况,提高ZO-1和Occludin的表达,保护肠道黏膜屏障功能,起到减轻肠道炎症的作用。

百药煎不同菌种发酵品特征性成分差异比较及潜在分子作用机制探讨

目的分析探讨黑曲霉Aspergillus niger(BYJ.H-1)、米根霉Rhizopus oryzae(BYJ.G-1)及蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus(HMB2)、巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium(HMB5)、伯顿丝孢毕赤酵母菌Burton Pichia pastoris(HMY1)、克鲁维酵母菌Kluyveromyces(HMY2)4菌混合菌种3种优势菌种/群发酵的百药煎特征性成分差异及百药煎发挥“润肺化痰、止血止泻、解热生津”功效的潜在分子生物机制,为百药煎饮片的生产和临床应用提供参考。方法以百药煎中没食子酸(gallic acid,GA)、表没食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)、2,4,6-三-O-没食子酰-β-D-葡萄糖(2,4,6-tri-O-galloyl-β-D-glucose,TGβG)、2,4,6-三-O-没食子酰-α-D-葡萄糖(2,4,6-tri-O-galloyl-α-D-glucose,TGαG)4种特征性成分的HPLC峰面积为指标,通过主成分降维(principal component analysis,PCA)结合聚类分析法(cluster analysis,CA)对比不同菌种发酵品的差异;在中医药理论基础上采用网络药理学预测百药煎治疗呼吸道疾病(respiratory disease,RD)、水液代谢失调(water metabolism imbalance,WI)和消化道出血(alimentary tract hemorrhage,AH)的分子生物学机制。结果3种优势菌种/群发酵品在聚类结果中存在交叉现象,群集的聚类趋势无规律且与菌种类别无关联;百药煎中的没食子酸、EGC、没食子酸甲酯(methyl gallate,MG)、没食子酸乙酯(ethyl gallate,EG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)5种活性成分与RD/WI/AH间存在99个共有靶点,经过蛋白互作和网络拓扑分析后得到98个核心靶点,主要包括蛋白激酶B1(protein kinase B 1,AKT1)、信号传导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、丝裂原活化蛋白激酶1/3(mitogen-activated protein kinase 1/3,MAPK1/3)等,基因本体(gene ontology,GO)分析结果显示这些靶点主要涉及激酶活性、连接酶结合和受体蛋白结合等分子生物功能,京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析结果显示有154条信号通路与百药煎治疗RD/WI/AH有关,主要涉及到病毒感染、癌变、细胞因子调节等信号通路。结论3种优势菌种/群发酵百药煎外在性状及内在成分无显著差异,百药煎的功效应用是多成分、多靶点、多途径协同作用的结果,研究为百药煎饮片的生产、质量控制和临床应用提供了参考。