淫羊藿苷对BALB/c-nu裸小鼠雄激素依赖性前列腺癌雄激素受体信号转导通路的影响

目的研究淫羊藿苷对BALB/c-nu裸小鼠雄激素依赖性前列腺癌雄激素受体信号转导通路(P13K/Akt)的影响。方法将40只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机均分为对照组、模型组、抑制剂组和实验组(n=10),除对照组外均采用前列腺内注射人前列腺癌细胞株(LNCaP)悬液(2×107个/mL)的方法建立LNCa P模型,2周后,4组均采用尾静脉注射相应药物的方法治疗28 d。采用Western blotting法检测前列腺癌变组织雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)和磷酸化雄激素受体(p-AR)蛋白表达;FITC-CY3法检测钙黏蛋白E(E-cadherin)和降钙素(Calcitonin)阳性率。结果与模型组比较,实验组p-Akt及p-AR蛋白均低表达(P<0.05),而Calctionin及AR-V7的阳性率均明显降低(P<0.05),E-cadherin的阳性率明显升高(P<0.05)。结论淫羊藿苷通过调控P13K/Akt信号转导通路相关因子表达而抑制LNCa P侵袭和转移。

A549肺腺癌细胞株BALB/C-nu/nu裸鼠骨转移模型的建立

目的探讨A549肺腺癌细胞株裸鼠骨转移模型建立的可行性.方法选择健康6~8周龄Balb/c-nu/nu裸鼠20只,将20只Balb/c-nu/nu裸鼠采用经皮左心室内注射法,将A549肺腺癌细胞株接种于裸鼠体内,接种后饲养观察Balb/c-nu/nu裸鼠的成瘤情况.结果全部裸鼠均完成经皮心脏肺腺癌细胞的种植,共造模成功12只,占到全部裸鼠的60%.造模成功的裸鼠成瘤天数经SPSS分析,结果符合正态分布,得出裸鼠成瘤天数的均值、标准差、及可信区间.结论通过经皮左心室内注射A549肺腺癌细胞株,建立Balb/c-nu/nu裸鼠肺腺癌骨转移模型,方法可行性强,科学可靠,成膜率高,可用于肺腺癌骨转移发病机制的研究.

人浆细胞瘤Balb/c-nu-hu模型的建立

背景:建立相关动物模型是研究多发性骨髓瘤病理生理机制及药物治疗的重要方法。目的:为研究多发性骨髓瘤细胞在人胎骨微环境内的生长特性,建立新的Balb/c-nu-hu人鼠嵌合的浆细胞瘤动物模型。方法:取孕16周人女性胎儿1cm左右胎骨植入Balb/c-nu裸鼠皮下,建立新的Balb/c-nu-hu鼠-人嵌合体;胎骨植入3周后将白细胞介素6依赖的人多发性骨髓瘤细胞株XG-7悬液注入胎骨内建立人浆细胞瘤Balb/c-nu-hu模型;观察裸鼠及肿瘤的生长情况。40d后,取胎骨、肿瘤及裸鼠重要组织行苏木精-伊红染色及抗人CD34、CD59、CD138和VEGF免疫组织化学染色;X射线片前后对比检查模型裸鼠体内胎骨骨密度的变化。结果与结论:胎骨表面及胎骨内见新生血管生成,且具有高度活性;XG-7细胞株能在植入人胎骨的裸鼠体内生长、浸润,形成髓外肿瘤,具有多种与浆细胞瘤相似的病理学特征,其中免疫组织化学结果显示CD138、CD59阳性说明其具有浆细胞表面标记,血管CD34阳性表明其为人源性;模型裸鼠出现恶病质,终末人骨髓瘤细胞浸润播散至鼠外周血及淋巴结,X射线片显示胎骨出现骨破坏。说明Balb/c-nu-hu鼠-人嵌合体模型可作为一种建立肿瘤模型可靠的基础动物载体,利用Balb/c-nu-hu鼠-人嵌合体可以成功建立人浆细胞瘤模型。

淫羊藿素对BALB/c-nu裸鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响

目的观察淫羊藿素对雄激素依赖型前列腺癌模型小鼠前列腺癌组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及E-钙黏蛋白的影响并探讨其机制。方法雄性BALB/c-nu裸鼠40只,随机分为空白对照组、荷瘤组、LY294002组和淫羊藿素组,每组10只,除空白对照组外均采用含有2×107个/mL的人LNCaP前列腺癌细胞悬液前列腺内注射以建立前列腺癌LNCaP荷瘤鼠模型。2周后淫羊藿素组按80 mg/kg剂量尾静脉注射淫羊藿素治疗4周,PI3K/Akt抑制剂组尾静脉注射PI3K/Akt抑制剂LY294002,空白对照组、荷瘤组尾静脉注射等体积生理盐水。治疗结束后取前列腺组织,采用Western blotting检测磷酸化雄激素受体AR(p-AR)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7);免疫荧光双重染色(FITCCY3)法检测降钙素(Calcitonin)和钙黏蛋白E(E-cadherin)表达。结果荷瘤组前列腺组织p-AR和p-Akt均高表达,前列腺瘤组织芯片标本中AR-V7和Calctionin阳性率分别为(32.45±2.15)%和(46.31±5.01)%,E-cadherin阳性率(22.93±1.96)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿素组前列腺组织p-AR和p-Akt低表达,AR-V7和Calctionin阳性率分别为(17.02±1.23)%和(29.76±2.74)%,E-cadherin阳性率为(86.27±6.75)%,与荷瘤组比较差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002组和淫羊藿素组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论淫羊藿素具有调控P13K/Akt信号通路的作用,主要通过调控p-AR、pAkt、AR-V7和Calctionin水平而影响前列腺癌LNCa P细胞侵袭和转移。

淫羊藿素对BALB/c-nu裸小鼠人源性前列腺癌模型的影响

目的探讨淫羊藿素抑制人源性前列腺癌LNCaP细胞珠BALB/c-nu裸小鼠荷瘤组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)信号通路及其相关蛋白磷酸化的可能机制。方法将40只雄性BALB/c-nu裸小鼠按随机对照原则均分为4组[对照组、前列腺癌(PCa)组、阳性药组和实验组]并采用前列腺内注射LNCaP细胞株构建PCa动物模型。实验组每日按0.1 mL/10 g尾静脉注射0.8%淫羊藿素,阳性药组按0.1 mL/10 g尾静脉注射P13K/Akt抑制剂LY294002,对照组和PCa组注射等体积生理盐水。注射4周后比较裸小鼠体质量、前列腺瘤体湿重、体积及P13K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果与PCa组比较,实验组前列腺瘤体湿重、体积、P13K、 p-Akt、磷酸化雄激素受体(p-AR)、雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)和降钙素(Calcitonin)均较模型组降低(P<0.05),而钙黏蛋白E(E-cadherin)升高(P<0.05)。结论淫羊藿素通过调节PI3K/Akt信号通路抑制PCa的进展,且这一作用与Akt及AR磷酸化有关。

益气解毒方通过TGF-β1/SMAD3信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究益气解毒方对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并从转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD3信号通路探讨其对增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法(1)将鼻咽癌细胞分为4组:溶剂对照组、益气解毒方0.5 mg·mL^(-1)组、益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)2μg·mL^(-1)组,采用实时无标记细胞功能分析仪(real time cellular analysis technology,RTCA)监测细胞增殖;创伤愈合实验检测细胞迁移;药物干预24 h后,侵袭小室法检测细胞侵袭;Western Blot法检测细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白的表达水平。(2)将鼻咽癌细胞分为5组:溶剂对照组、TGF-β110 ng·mL^(-1)组、TGF-β110 ng·mL^(-1)+益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组、LY320088210μmol·L-1组,采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖;创伤愈合实验检测细胞迁移;药物干预24 h后,侵袭小室法检测细胞侵袭;Western Blot法检测细胞β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白的表达水平。(3)随机将裸鼠分为模型组、益气解毒方组和5-Fu组。皮下部位注射细胞悬液制备鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,基本成瘤后,5-Fu组每2 d腹腔注射1次,其余组每天灌胃给药1次,连续3周。每隔3 d测量瘤体体积1次;Western Blot法检测各组组织中β-catenin、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平。结果与溶剂对照组比较,益气解毒方(0.5、1.0 mg·mL^(-1))组的细胞增殖曲线均下降,细胞迁移和侵袭能力均降低(P<0.05,P<0.01),且E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.01),β-catenin、N-cadherin、TGF-β1、SMAD3蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,益气解毒方组的鼻咽癌移植瘤体积明显减小(P<0.05),且益气解毒方组移植瘤组织中的β-catenin和N-cadherin蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin蛋白表达明显上调(P<0.01)。加入TGF-β1信号通路激活剂和抑制剂后,与益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组比较,TGF-β110 ng·mL^(-1)+益气解毒方1.0 mg·mL^(-1)组的TGF-β1、SMAD3、β-catenin和N-cadherin蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),且细胞增殖、迁移和侵袭的能力明显增强(P<0.01)。结论益气解毒方能够通过调控TGF-β1/SMAD3信号通路抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值

目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于该模型诊断。

DHEA联合γ射线对食管癌EC109细胞移植裸鼠的抑瘤与抗辐射作用

观察DHEA(17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯)联合137Csγ射线辐照对EC109移植小鼠肿瘤的抑制作用及放疗后对荷瘤小鼠造血系统的防护作用。将接种食管癌细胞系EC109的裸鼠按照处理方式的不同分为对照组、单照组、DHEA组和DHEA联合辐照组,给药组连续给药9 d,12 d后分别检测肿瘤抑制率、外周血细胞数、骨髓有核细胞数等指标。结果表明,DHEA组抑瘤率明显高于对照组,DHEA联合辐照组的瘤重分别低于单照组和对照组,具有统计学差异(p<0.01)。DHEA联合辐照组的红细胞、血红蛋白均高于对照组及单照组,差异有统计学意义(p<0.05)。提示DHEA联合γ射线辐照对食管癌移植小鼠肿瘤具有显著的协同抗瘤效果,DHEA对辐照后荷瘤小鼠造血系统具有一定的防护作用。

人宫颈癌SiHa细胞荷瘤裸鼠模型的建立及鉴定

目的:建立人宫颈癌SiHa细胞裸小鼠体表荷瘤模型,并对其成瘤特性进行分析和鉴定。方法:将5×10~6/mL、1×10~7/mL及5×10~7/mL 3个浓度的SiHa细胞悬液分别在3组裸小鼠背部右腋近上肢皮下接种,建立人宫颈癌裸小鼠体表荷瘤模型,观察荷瘤裸鼠的成瘤率并测量肿瘤的大小,5周后取肿瘤组织经病理学方法观察其组织学特性,并采用PCR及免疫组织化学方法对肿瘤组织的HPV16E7 DNA表达进行检测。结果:3组裸小鼠接种SiHa细胞的成瘤率均为100%,5周后肿瘤大小分别达到(77.29±28.34)mm^3、(178.91±61.55)mm^3和(305.11±12.62)mm^3。3个浓度组间肿瘤体积大小差异有统计学意义(P<0.001)。病理学大体观察可见SiHa肿瘤的生长均以局部浸润为主;组织切片观察新生肿瘤细胞特点呈现体积大、核大深染及易见核分裂相的病理性特征;SiHa新生肿瘤组织经PCR检测证实了HPV16E7 DNA阳性,并经免疫组织化学检测证实了HPV16E7蛋白表达阳性。结论:成功建立了SiHa细胞荷瘤裸鼠模型,为人宫颈癌肿瘤靶向治疗及生物学特性研究提供了理想的动物模型。

17a α-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合放、化疗抗肿瘤作用的研究

目的观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯(DHEA)联合放、化疗对EC109食管癌移植小鼠的抑制作用及放化疗对荷瘤小鼠造血系统的防护作用。方法每只小鼠右侧腋窝下接种0.1 mL EC109细胞悬液,接种当天计为第1天。在接种后3 d,将30只接种EC109的裸鼠随机分为对照组、照射组、5-Fu组(25 mg/kg)、DHEA组、DHEA联合照射组、DHEA联合5-Fu组,每组5只。DHEA按照7.5 mg/kg剂量腹腔注射给药,0.2 mL/只,1次/d,连续9 d共给药9次。分别于第4天和第8天对照射组及DHEA联合照射组小鼠的肿瘤进行2 Gy局部照射。5-Fu按照25 mg/kg的剂量进行腹腔注射,0.2 mL/只,隔日1次,共给药4次。12 d后分别检测肿瘤抑制率、外周血细胞数、骨髓有核细胞数等指标。结果DHEA、DHEA联合照射组及DHEA联合化疗组瘤重均显著低于对照组[(0.34±0.02)g、(0.30±0.02)g、(0.23±0.02)g比(0.90±0.02)g,P<0.01],DHEA联合照射组瘤重低于单照组[(0.30±0.02)g比(0.70±0.03)g,P<0.05)]。DHEA、DHEA联合照射及DHEA联合化疗组单个核细胞数均高于照射组[(18.3±1.7)×106、(19.3±0.5)×106、(19.2±2.0)×106比(9.4±2.4)×106,P<0.05]。结论 DHEA联合照射或化疗对食管癌移植小鼠具有较好的协同抗瘤效果,DHEA对照射和化疗后荷瘤小鼠造血系统具有一定的防护作用。

艾康片减轻环磷酰胺心脏毒性研究

目的:评价艾康片对环磷酰胺引起的心脏毒性的保护作用。方法:将40只BALB/c-nu小鼠随机分为正常组、模型组及艾康片高、中、低剂量组,每组8只。除正常组外,其余各组腹腔注射环磷酰胺0.3 g/kg制备环磷酰胺心脏毒性模型,每周1次,连续2周。模型制备当天,艾康片高、中、低剂量组按20 mL/(kg·d)的剂量分别灌胃浓度为0.046 g/mL、0.023 g/mL、0.012 g/mL的艾康片溶液,每天1次,连续给药2周;正常组、模型组在相同条件下灌胃等体积蒸馏水。检测各组小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)含量;计算心脏指数;HE染色观察心脏病理学改变。结果:与正常组比较,模型组小鼠心脏指数及血清LDH、HBDH均升高(P<0.05),心肌细胞肥大、心肌细胞变性、炎症细胞浸润Rank值及个体评分均增加(P<0.01)。与模型组比较,艾康片高、中、低剂量组心脏指数、血清LDH、HBDH均降低(P<0.01);艾康片高剂量组心肌细胞肥大Rank值及个体评分降低(P<0.05);艾康片中剂量组心肌细胞肥大、心肌细胞变性、炎症细胞浸润Rank值及个体评分均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:艾康片对环磷酰胺引起的心脏毒性有保护作用。

转移性人小细胞肺癌裸鼠模型的建立

目的建立转移性人小细胞肺癌(SCLC)的裸鼠模型,探讨其用于人SCLC的治疗研究的可行性。方法 RPMI 1640培养基培养的人SCLC细胞株NCI-H446用无血清培养液重悬成1×107个/mL,取0.1 mL细胞悬液接种于BALB/c-nu裸鼠胫骨结节骨髓腔内,构建裸鼠模型并观察腿部肿瘤生长情况及肺等器官的转移情况。免疫组化染色检测小细胞肺癌标志物CD56及神经上皮干细胞标志物netsin的表达情况。结果经胫骨结节骨髓腔注射的方法注射细胞后裸鼠腿部均形成原位瘤,肺部转移6/6只,肝、脾等脏器未见转移灶。肿瘤组织细胞CD56阳性率>75%,nestin阳性率为4%～12%。结论经胫骨结节骨髓腔注射的方法可以形成弥散性肺部肿瘤,其他各器官则未见肿瘤块,可以为人SCLC实验性治疗的研究提供一种高效的实验模型。

弥漫性大B细胞淋巴瘤BALB/C-nu/nu裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的探索弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)BALB/C-nu/nu裸鼠皮下移植瘤模型建立的方法。方法将DLBCL细胞株SUDHL-10、OCI-Ly8、OCI-Ly10接种于BALB/C-nu/nu裸鼠腋部皮下,每2~3天观察皮下肿瘤体积变化,并绘制肿瘤生长曲线。在裸鼠濒临死亡或皮下肿瘤长径≥20mm时将裸鼠处死,分离肿瘤组织进行HE染色以及免疫组化染色。结果裸鼠皮下见有肿瘤长出的时间为接种后第10~12天;SUDHL-10、OCI-Ly8、OCI-Ly10细胞接种的成瘤率分别为66.7%(4/6)、100%(6/6)、83.3%(5/6);接种后第42天皮下肿瘤长径最大可达20mm,此时裸鼠逐渐出现濒死状态,SUDHL-10、OCI-Ly8、OCI-Ly10细胞接种的肿瘤体积分别为(2617.66±332.98)mm^3、(2679.66±367.02)mm^3、(2409.60±640.84)mm^3。移植瘤HE染色形态与人DLBCL相符合。免疫组化染色显示,SUDHL-10、OCI-Ly8细胞接种后的肿瘤细胞CD20弥漫阳性、CD10弥漫阳性、Bcl-6阳性;OCI-Ly10细胞接种后的肿瘤细胞CD20部分阳性、CD10弥漫阳性、Bcl-6阴性、多发性骨髓瘤癌基因1阴性。结论成功构建DLBCL细胞BALB/C-nu/nu裸鼠皮下移植瘤模型;其移植瘤细胞与人DLBCL细胞相似,是较理想的研究DLBCL的实验动物模型。

阿霉素对肾上腺皮质癌细胞系SW-13克隆特性的影响

目的:研究阿霉素在体干预对肾上腺皮质癌系SW-13克隆特性的影响。方法:通过建立阿霉素干预裸鼠连续传代SW-13细胞系皮下移植瘤模型,将空白组及实验组细胞进行单细胞克隆行成试验,观察单个细胞生长曲线,并计算克隆形成率及3种克隆(全克隆、部分克隆和旁克隆)的百分比,并进行Hoechst33342试验检测细胞的耐药性。结果:SW-13细胞系经过阿霉素干预裸鼠连续传代移植瘤模型后,克隆形成率较空白对照组增加(P<0.05);全克隆的百分比高于空白对照组(P<0.05);经Hoechst33342试验发现经阿霉素干预肾上腺皮质癌细胞荧光减弱。结论:阿霉素在体干预提高肾上腺皮质癌细胞系SW-13的克隆形成能力及全克隆形成能力,并提高其耐药性。

CEA阳性细胞系的鉴定及其荷瘤小鼠模型建立

目的鉴定HT-29、MKN-45及Hela细胞系中CEA的阳性表达率,并分别建立3个细胞系对应的荷瘤小鼠肿瘤模型,分析其成瘤特性。方法采用RT-PCR、western blot检测HT-29、MKN-45及Hela细胞中的CEA表达情况,采用免疫荧光实验检测3株细胞系的CEA蛋白表达情况。以2×10^(7)/ml细胞浓度接种小鼠建立动物模型,观察荷瘤小鼠生长情况并记录肿瘤大小,对其成瘤特性进行分析。结果CEA蛋白在HT-29、MKN-45细胞中表达,而在Hela细胞中不表达,CEA蛋白主要存在于细胞的胞质中。MKN-45荷瘤小鼠的成瘤潜伏期为(6.3±1.5)d,HT-29成瘤潜伏期为(6.0±2.2)d,而Hela细胞的成瘤潜伏期为(10.0±1.6)d。MKN-45、HT-29细胞的成瘤时间明显短于Hela细胞。结论CEA在HT-29、MKN-45细胞中表达,而在Hela细胞中不表达。成功建立了3株细胞对应的荷瘤小鼠模型,为CEA阳性肿瘤的发病基础以及治疗提供了动物模型基础。

基于冷冻肿瘤组织切片的磷酸化HER2免疫组织化学染色方法探讨

目的探索针对磷酸化人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)免疫组织化学染色实验中冷冻组织切片的最佳固定与保存条件。方法在BALB/c-nu/nu小鼠中建立人源性乳腺癌细胞BT474的皮下移植瘤模型,对比不同的抗原固定条件和存储时间下,免疫组织化学染色观察肿瘤模型中磷酸化HER2的信号变化。结果冰冻切片用体积分数为10%的甲醛溶液固定5 min,可以维持良好的细胞形态。在-20℃的存储条件下,肿瘤组织中磷酸化HER2蛋白在12周内表达稳定。结论冰冻组织切片进行免疫组织化学染色用时短,可以作为常规石蜡切片染色方法的补充或者替代。

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。

基于非靶向尿液代谢组学方法的气虚模型评价

目的:通过代谢组学方法,从生物标志物及代谢通路角度,探讨Balb/C-nu小鼠游泳力竭法建立气虚模型的复制情况。方法:将Balb/C-nu小鼠随机分为正常组和气虚组,其中气虚组采用连续15 d尾部固定5%体质量金属游泳至力竭(鼻尖浸水时间>5 s)的方法建立气虚模型。利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF/MS)进行尿液代谢组学分析,流动相选择乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~1 min,5%~8%A;1~4 min,8%~8.5%A;4~5 min,8.5%~12%A;5~10 min,12%~40%A;10~12 min,40%~100%A;12~15 min,100%A),流速0.3 mL·min^(-1),进样量10μL,电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式检测,扫描范围为m/z 50~1000。运用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)、人类代谢组数据库(HMDB)和MSE采集的高碰撞能量离子碎片信息,以及串联质谱法(MS/MS)碎片离子信息等鉴定潜在的生物标志物。采用京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库与MetaboAnalyst 5.0分析生物标志物的相应代谢通路及通路富集。结果:正常组和气虚组小鼠尿液内源性物质明显分离,并有24个具有显著差异的生物标志物。这些生物标志物涉及的代谢通路有三羧酸循环、糖酵解代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、嘧啶代谢、类固醇激素生物合成和色氨酸代谢等。其中,与能量相关的代谢通路有三羧酸循环、糖酵解代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、嘧啶代谢、类固醇激素生物合成。结论:通过尿液代谢组学考察,结合体征外观,成功评价了Balb/C-nu小鼠游泳力竭法建立的气虚模型,同时验证了气虚与能量代谢途径密切相关。