鸡痘病毒282E_4株基因组BamHⅠ片段的克隆及酶切图谱分析

本研究用ｐＵＣ１８质粒作载体，采用鸟枪法克隆ＦＰＶ基因组ＢａｍＨⅠ部分片段，用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＦＰＶ２８２Ｅ４ＢａｍＨⅠ片段探针打点杂交，证实２２个克隆插入了ＦＰＶ２８２Ｅ４ＤＮＡ的ＢａｍＨⅠ片段，２２个阳性克隆提取的质粒经琼脂糖凝胶电泳，选取具有代表性的大小不同的６个质粒ｐＵＡ、ｐＵＢ、ｐＵＣ、ｐＵＤ、ｐＵＥ、ｐＵＦ。６个质粒插入的片段Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ分别为７．３ｋｂ、４．９ｋｂ、４．２ｋｂ、３．６ｋｂ、３．２ｋｂ、３．０ｋｂ。分别以ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ进行单酶切，又经适当组合的双酶切。实验结果表明．在各片段存在的单酶切位点为Ａ：ＥＣＯＲⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｈｏⅠ位点；Ｂ：ＥｃｏＲⅠ、ＸｈｏⅠ、ＨｉｎｄⅢ位点；Ｃ：ＣｌａⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ位点；Ｄ：ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ位点；Ｅ：ＥｃｏＲＶ位点；Ｆ：ＥｃｏＲⅤ位点。以上结果为随机筛选ＦＰＶ基因组非必需区奠定了基础。

用马立克氏病病毒强毒的BamH-L片段核酸鉴定血清1型毒株

马立克氏病病毒 (MDV) GA强毒株的 Bam H - L 片段 DNA全长为 2 892 bp,G+C比率为 5 5 .91%。用内切酶将其亚克隆为 6个片段 :Bam H - Pst 、Pst - Pst 、Pst - Cla 、Cla - Sm a 、Sm a - Sma 和 Sm a - Bam H 。用地高辛标记 L 片段 DNA或者分别标记其 6个亚片段核酸 ,通过斑点杂交试验都可将 MDV血清 1型毒株与 2型和 3型的毒株区分开来 ,应用 PCR方法可获得相同结果。但 PCR方法更敏感、更快捷。结果表明 ,MDV GA强毒株的Bam H - L片段 DNA对 MDV血清