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CYP3A22稳定表达HepG_2细胞株的建立及其探针药物代谢活性鉴定
被引量:
1
1
作者
薛正楷
魏泓
+2 位作者
商海涛
杨根庆
叶彬
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第16期1552-1555,共4页
目的建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株。方法通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为...
目的建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株。方法通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为模板,采用PCR扩增CYP3A22基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A22基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,测序表明,CYP3A22基因真核表达载体正确构建;将测序正确的CYP3A22基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,RT-PCR及Western blot分析,并用探针药物硝苯地平对重组细胞进行进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A22细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A22的HepG2细胞株,可用于相关的药物代谢研究。
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关键词
bama小型猪
SUS
scrofa
CYP3A22
HEPG2
RT—PCR
Western
BLOT
探针药物
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职称材料
题名
CYP3A22稳定表达HepG_2细胞株的建立及其探针药物代谢活性鉴定
被引量:
1
1
作者
薛正楷
魏泓
商海涛
杨根庆
叶彬
机构
重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心
第三军医大学基础医学部实验动物学教研室
河南省新乡医学院第三附属医学院检验科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第16期1552-1555,共4页
基金
国家"十五"科技攻关计划重点项目(2004BA717B23)~~
文摘
目的建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株。方法通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为模板,采用PCR扩增CYP3A22基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A22基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,测序表明,CYP3A22基因真核表达载体正确构建;将测序正确的CYP3A22基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,RT-PCR及Western blot分析,并用探针药物硝苯地平对重组细胞进行进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A22细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A22的HepG2细胞株,可用于相关的药物代谢研究。
关键词
bama小型猪
SUS
scrofa
CYP3A22
HEPG2
RT—PCR
Western
BLOT
探针药物
Keywords
bama
minipig
Sus scrofa CYP3A22
HepG2
RT-PCR
Western blot
probe drug
分类号
R322.47 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R394.33 [医药卫生—医学遗传学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CYP3A22稳定表达HepG_2细胞株的建立及其探针药物代谢活性鉴定
薛正楷
魏泓
商海涛
杨根庆
叶彬
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
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