辣椒内生枯草芽孢杆菌BS-2和BS-1防治香蕉炭疽病

来自辣椒体内的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BS-2和BS-1菌株对香蕉炭疽菌菌丝生长、分生孢子形成及萌发等有较强的抑制作用.接种病菌16d后,两菌株对香蕉炭疽病防治效果达34.0%(BS-1)-90.0%(BS-2),其中BS-2的防效比BS-1高.

吡唑醚菌酯·二氰蒽醌对香蕉采后炭疽病的防治效果评价

为筛选防治香蕉采后炭疽病的新型防腐保鲜药剂,2015年和2016年连续两年进行了复配药剂32%吡唑醚菌酯·二氰蒽醌水分散粒剂防治香蕉炭疽病的采后保鲜试验,对该药剂防治香蕉炭疽病的效果及安全性进行了评价。试验结果表明:32%吡唑醚菌酯·二氰蒽醌水分散粒剂有效成分用量640 mg/kg对香蕉炭疽病具有较好的防治效果,2015年药剂处理后12 d的防治效果为81.80%,2016年药剂处理后6 d的防治效果为83.36%,显著优于对照药剂22.7%二氰蒽醌悬浮剂500 mg/kg处理,与对照药剂250 g/L吡唑醚菌酯乳油500 mg/kg的处理防效相当。32%吡唑醚菌酯·二氰蒽醌水分散粒剂对香蕉果实安全,蕉果催熟后,果实颜色金黄,风味正常,值得推广应用于香蕉果实的采后保鲜贮运。

45%咪鲜胺水乳剂对香蕉采后炭疽病的控制效果

[目的]探讨45%咪鲜胺水乳剂对香蕉采后炭疽病的控制效果。[方法]采用生长速率法进行45%咪鲜胺水乳剂对香蕉炭疽病的室内毒力测定;设45%咪鲜胺水乳剂有效成分分别为250、375、500 mg/kg的3个处理,采用常温浸果1 min的方式进行药剂处理,之后晾干,用聚乙烯袋密封包装,分别在温度为26.2～29.3℃(2006)和25.9～32.4℃(2007)条件下贮藏,贮藏后第14天和第18天分别调查各处理的总果数量、炭疽病果数量及病级。[结果]该药剂对香蕉炭疽病菌的生长具有较强的抑制作用,EC90=757.0μg/L,EC50=0.593 3μg/L。2年采后防治试验表明:蕉果采后用有效浓度为250 mg/kg的45%咪鲜胺水乳剂浸渍处理,贮藏后18 d对香蕉炭疽病的防效分别为72.3%和76.9%。[结论]45%咪鲜胺水乳剂具有较高的毒力,能够有效控制香蕉炭疽病菌的生长。

短短芽胞杆菌Bb5911的复合诱变及其对香蕉炭疽病的防治作用

为了提高拮抗菌对香蕉炭疽病的抑菌活性并探讨其与化学药剂混用的可行性,本研究采用紫外线-亚硝酸钠复合诱变的方法对短短芽胞杆菌Bb5911进行诱变,并测试了其与咪鲜胺混配对香蕉炭疽病的防治效果。结果表明,最佳诱变条件为在距离20 W紫外灯50 cm下照射15 s,然后经300 mmol/L Na NO2诱变处理60 min。经过2次复合诱变后得到突变株5B37-3的抑菌活性最强,比出发菌株提高了112.41%。咪鲜胺对突变株5B37-3的最低抑菌浓度（MIC）为20.83μg/m L。连续转接7次,突变株5B37-3的抑菌活性无明显降低。抑菌谱测试结果表明,突变株5B37-3对13种植物病原真菌的抑菌活性比出发菌株均有提高,提高率18.20%~239.27%。对香蕉炭疽病防治的试验结果表明,突变株5B37-3的防效明显高于出发菌株,最高为66.55%。突变株5B37-3与10.42μg/m L咪鲜胺溶液复配后,香蕉贮藏15 d,其防治效果为72.76%,与333.33μg/m L咪鲜胺溶液防效相当;至香蕉贮藏17 d,其防治效果显著低于333.33μg/m L咪鲜胺溶液。

香蕉炭疽病拮抗菌Bs6602的诱变选育及防病作用研究

为了提高拮抗菌对香蕉炭疽病的抑菌活性,本研究采用紫外线-亚硝酸钠复合诱变的方法对枯草芽胞杆菌Bs6602菌株进行诱变。结果表明,该菌株的最佳诱变条件为在距离20 W紫外灯50cm下照射15s,然后经300mmol/L NaNO2诱变处理60min。经过2次复合诱变,最终得到1株抑菌活性最强的6B8-5菌株,其抑菌活性比出发菌株提高83.80%。咪鲜胺对突变株6B8-5的最低抑菌浓度(MIC)为20.83μg/mL。连续转接7代,突变株6B8-5的抑菌活性无明显降低。6B8-5菌株的抑菌谱测试结果表明,其对13种植物病原真菌具有较强的抑菌活性,其中对多主棒孢霉的抑菌活性最强,抑菌圈直径达66.39mm。对香蕉炭疽病防治的试验结果表明,香蕉贮藏15d后,6B8-5菌株的防效明显高于出发菌株,为63.94%;6B8-5菌株与43 200倍咪鲜胺稀释液混用后,其防效最高达70.27%,与咪鲜胺1 350倍稀释液防效相当。

香蕉炭疽病优势拮抗酵母菌的分离及筛选

采用稀释平板法和平板划线法从8个不同品种的香蕉果实上分离纯化酵母菌,并将其与香蕉炭疽病原菌进行平板对峙培养及离体防效试验,以筛选优势拮抗酵母菌。结果表明:从香蕉果实上共分离纯化酵母菌329株;平板对峙培养后获得3株拮抗香蕉炭疽病原菌作用明显的酵母菌;离体防效试验筛选出1株拮抗效果较好且稳定的优势拮抗酵母菌Z-BR-16,以无菌水为对照,接种7 d后,其1.0×108CFU/mL菌液对香蕉炭疽病的抑制率为75.94%。

香蕉炭疽病生防拮抗菌筛选及其作用机制

用含炭疽病菌的ＰＤＡＹ平板上分离香蕉组织表面的拮抗菌株，经离体和活体测定对香蕉炭疽病的防效，筛选到９６００３、９６１２０、９６２０６、９５０４０、９６２０１、９５０１９、９５０４２及９６００４等８个有显著拮抗作用的菌株，其中９５０１９是酵母菌，其它为细菌．９６００３防效最佳，达６７％．供试菌株的拮抗作用机制可分为抑菌和竞争两类．

香蕉炭疽病生物防治研究进展

香蕉炭疽病是香蕉采后一种重要病害,生物防治香蕉炭疽病成为研究的热点。此文介绍了香蕉炭疽病的主要症状及概述了两种不同方式对香蕉炭疽病进行生物防治。其一,利用生防菌(如枯草芽孢杆菌,假单胞杆菌,链霉菌等)对香蕉炭疽病进行生物防治,生防菌主要是对香蕉炭疽菌菌丝的生长,孢子萌发,附着孢的形成有影响。其二,从植物中提取活性物质对香蕉炭疽病进行生物防治,其中艾蒿、大茴香、丁香、花椒、桂圆等植物的活性物质对香蕉炭疽病有明显的抑制作用。最后,提出生物防治香蕉炭疽病存在的问题及展望。

炭疽病胁迫下采后香蕉的膜脂代谢

【目的】从细胞膜降解角度研究芭蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)采后侵染香蕉果实的机制,为进一步研究香蕉炭疽病及其防控措施提供理论依据。【方法】以桂蕉6号香蕉为试验材料,采用喷雾接种芭蕉炭疽菌侵染香蕉果实,以果实喷雾蒸馏水作对照,每3 d取样1次,通过测定采后贮藏过程中香蕉果实的病情指数、果实硬度及果皮电导率、细胞膜降解关键酶活性、细胞膜磷脂和脂肪酸组分与含量的变化规律,明确炭疽菌侵染对香蕉果皮膜脂代谢的影响。【结果】接种芭蕉炭疽菌可促进香蕉果实炭疽病的发生,病情指数随贮藏时间的延长而增加,同时果实硬度下降、果皮电导率升高,贮藏至第15 d,炭疽菌侵染组与对照组相比,果实的病情指数显著增加61.31%(P<0.05,下同)、果实硬度显著下降35.79%、果皮电导率显著升高27.94%。炭疽菌侵染促进香蕉果皮膜脂代谢相关酶[磷脂酶C(PLC)、磷脂酶D(PLD)和脂氧合酶(LOX)]活性增强,贮藏至第15 d,炭疽菌侵染组的果皮PLC、PLD和LOX活性较对照组分别显著提高31.21%、63.72%和26.24%;同时炭疽菌侵染加速果皮细胞膜磷脂[磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰乙醇胺(PE)]降解为磷脂酸(PA)、不饱和脂肪酸(油酸、亚油酸和亚麻酸等)氧化为饱和脂肪酸(棕榈酸和硬脂酸等),贮藏至第15 d,与对照组相比,炭疽菌侵染组的果皮不饱和脂肪酸总量降低12.97%,饱和脂肪酸总量则提高17.77%。炭疽菌侵染促进香蕉果皮氧化,贮藏至第15 d,炭疽菌侵染组的丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量较对照组分别提高17.23%和13.58%。【结论】炭疽病菌侵染与贮藏期间香蕉果皮细胞膜脂代谢有关,炭疽菌侵染加剧细胞膜水解,导致细胞膜结构破坏和功能丧失,从而促使炭疽病发生。

CⅢ-1菌株胞外抗菌蛋白防治香蕉炭疽病研究

为明确红树内生细菌CⅢ-1菌株的抗菌蛋白对香蕉炭疽病的控制作用,采用平板对峙法结合显微观察测定其对致病菌的抑制活性,进行抗菌蛋白对香蕉炭疽病的防病试验,并测定了香蕉果实内丙二醛的含量及防御酶活性的变化。结果表明,CⅢ-1抗菌蛋白粗提液喷雾后立即接种香蕉炭疽病菌,处理8d后其防治效果达71.44%,10d后防效仍有56.67%;防病机制测定表明,(1)CⅢ-1抗菌蛋白对香蕉炭疽病菌的菌丝生长及分生孢子萌发等具有极强的抑制作用,处理后的病菌菌丝出现肿胀、膨大、成泡囊状畸形,分生孢子基本不萌发。(2)抗菌蛋白处理香蕉后,与对照比,抗菌蛋白处理的香蕉丙二醛(MDA)的含量较低,同时过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)等活性也均有不同程度的变化。

红树内生细菌AmS2防治香蕉采后炭疽病的研究

采用平板对峙结合生长速率法测定分析了红树内生细菌AmS2菌株及其甲醇粗提液对香蕉炭疽病菌的抑制活性,并对其甲醇粗提液的防病效果进行了研究。结果表明,红树内生细菌AmS2菌株及其甲醇粗提液对香蕉炭疽病菌的抑菌带宽分别为12.0 mm和11.5 mm;毒力测定结果表明,AmS2甲醇粗提液对香蕉炭疽病菌的菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作用,EC50分别为1.007 6 mg/mL和1.902 8 mg/mL;AmS2菌株的甲醇粗提液对香蕉炭疽病具有较好的防治效果,且随着提取液浓度的加大,防治效果不断提高,当AmS2甲醇粗提液使用浓度为4.0 mg/mL时,对接种香蕉炭疽病菌10 d后的防治效果为79.83%。

香蕉炭疽病拮抗细菌的分离和初步鉴定

对36株从药用植物蛇足石杉中获得内生细菌进行香蕉炭疽病拮抗细菌筛选。采用对峙培养筛选法、碱基序列比对及同源性分析进行研究。结果获得2株对香蕉炭疽病有拮抗作用的菌株,其中JXS1-6和AHL1-1菌株的抑菌带宽达9 mm及4 mm。通过16S rDNA碱基序列比对及同源性分析,JXS1-6和AHL1-1均鉴定为伯克霍尔德属(Burkholderia),属于伯克霍尔德科(Burkholderiaceae),伯克霍尔德目(Burkholderiales),β-变形菌纲(Betaproteobacteria)。

香蕉采后果实炭疽病菌的鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从表现炭疽病症状的采后香蕉果实中分离到4个炭疽病菌菌株。通过观察这4个菌株的菌丝生长速率、孢子萌发、附着胞形成和致病性,发现4个菌株的菌丝生长速率无显著差异,但菌株X4的孢子萌发率、附着胞形成率和致病力明显高于其他3个菌株。采用传统的形态学鉴定方法,并结合ITS序列分析技术,鉴定菌株X4为芭蕉炭疽菌（Colletotrichum musae）。生物学特性的观察结果表明：菌株X4菌丝生长温度范围是10-35℃,最适生长温度是28℃,其分生孢子萌发和附着胞形成的适宜温度范围是25-30℃,分生孢子在28℃萌发率最高;光照对菌丝生长速率、分生孢子和附着胞形成无显著影响;适宜菌丝生长和孢子萌发的pH值为5.0-8.0,最适pH值为6.0;菌株的菌丝和分生孢子的致死温度均为50℃/10 min。

多巴胺和糖类物质对香蕉采后炭疽病发生的抑制和诱导作用

香蕉果皮组织可溶性糖随着香蕉采后后熟过程中，含量逐渐增加；但当果实出现明显病症时含量略有下降。多巴胺在香蕉采收时含量较高，但随着炭疽病发生明显下降。外源多巴胺在抑制芭蕉炭疽菌的同时也抑制了果实采后炭疽病的发生。对“黑油身”和“６３－１”两个抗性不同的品种分析表明，前者多巴胺含量较高、可溶性糖较低，与其较强的抗病性相一致。

香蕉采后炭疽病发生与几丁酶、β-1,3-葡聚糖酶和多巴胺的关系

几丁酶、β－1，3-葡聚糖酶随着香蕉术后炭疽病的发展过程，活性逐渐增加；但当果实出现明显病害症状时活性略有下降。施保功处理在抑制香蕉采后炭疽病发生的同时也抑制了芭蕉炭疽菌可能诱导的几丁酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的增加。多巴胺在香蕉采收时含量较高，但随着炭疽病的发生明显下降。对“黑油身”和“63－1”两个不同抗病品种分析表明，前者几丁酶和β－1，3-葡聚糖酶活性和多巴胺含量较高与其较强的抗病性相一致。

青香蕉提取物对三种热带水果炭疽病菌抑制效果的研究

对青香蕉进行冷激(6℃,4 h)和热激(53℃,5 min)处理后,采用不同提取物料状态(干粉、鲜品)、不同提取方法(80%乙醇和冷、热水提取法),研究青香蕉果皮和果肉提取物对香蕉、芒果和番木瓜三种热带水果炭疽病菌的抑制效果,并筛选其最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:青香蕉果皮和果肉的80%乙醇提取物对三种水果炭疽病菌均没有抑制效果;鲜品水提物的抑菌作用优于干粉水提物;青香蕉果皮水提物对香蕉炭疽病菌无明显的抑制效果,热激处理能增强果皮冷、热水提物对芒果和番木瓜炭疽病菌的抑制作用。青香蕉果肉水提物对三种水果的炭疽病菌具有微弱的抑制作用,而热激处理可增强果肉冷、热水提物对三种炭疽病菌的抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌的抑制作用最强;冷激处理后,只有热水提取物表现出了对三种炭疽病菌的抑制作用。最低抑菌浓度试验结果表明,经热激处理的青香蕉鲜品水提取物对三种病原菌的最低抑菌浓度为10%。本研究结果对于了解香蕉采后病害系统防御机制及果蔬采后生物防治理论的扩展具有理论及现实意义。

白骨壤抗菌蛋白对香蕉炭疽病菌的抑制作用

本文以红树植物白骨壤叶为材料,以硫酸铵分级沉淀分离不同的抗菌蛋白,采用抑制菌丝生长速率和孢子萌发的方法测定白骨壤抗菌蛋白对香蕉炭疽病菌的抗菌活性,显微观察分析抗菌作用方式机理,进行白骨壤抗菌蛋白对感病香蕉的贮藏防病实验。结果表明:35%、75%、85%硫酸铵沉淀分离的抗菌蛋白(抗菌蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)具有明显抗菌活性,其抑制菌丝生长的半效应浓度(EC_(50))分别为:7.93±0.29、6.80±0.28、16.21±0.13μg/m L。100μg/m L的抗菌蛋白(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)溶液对香蕉炭疽分生孢子的萌发抑制率分别达到95.5%±0.01%、97.5%±0.03%、92.5%±0.01%。显微观察发现三种抗菌蛋白处理的菌丝分别出现了扭曲、断裂、畸形以及原生质外渗现象。经抗菌蛋白处理后的采后感病香蕉果实具有明显降低发病率的效果。抗菌蛋白Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对香蕉炭疽病的防治效果分别达到74.48%±0.68%、77.24%±0.53%、75.87%±0.24%。

香蕉炭疽菌拮抗生防菌株的筛选及鉴定

从香蕉组织中分离筛选到18株在平板上对香蕉炭疽菌孢子有明显抑菌活性的菌株,将这18株菌分别与香蕉炭疽菌共同接种到香蕉果指上进行活体防效复筛,发现与清水对照组相比较,AcT-02、AcT-07、AcT-09、AcT-11、AcT-13共5株细菌均表现出显著的防治效果,防效分别为49.77%±4.20%、47.87%±8.97%、63.82%±3.16%、68.15%±2.48%和73.85%±2.39%,香蕉病情指数显著降低;将该5株菌进行香蕉自然发病的防效试验,发现只有AcT-13菌株具有显著防治效果,其病情指数为18.67%,比对照降低了13%,将AcT-13进行形态学观察、生理生化特性测定以及分子学序列分析,初步将AcT-13菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。

香蕉果实MaNPC1基因原核表达及多克隆抗体制备

【目的】对香蕉果实非特异性磷脂酶C基因(MaNPC1)开放阅读框(ORF)进行原核表达,并制备其多克隆抗体,为深入探究MaNPC1在香蕉果实抵御炭疽病中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆MaNPC1基因ORF序列,对其进行生物信息学分析及抗原性预测,并通过双酶切法构建其原核表达载体,利用热激法转入大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,重组蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫新西兰兔,以制备多克隆抗体。同时,运用Westernblotting和实时荧光定量PCR分别检测香蕉果实贮藏过程中在炭疽病侵染胁迫下MaNPC1蛋白表达水平及MaNPC1基因相对表达量。【结果】重组质粒pGEX-6p-3-MaNPC1经双酶切后得到1650 bp的特异性条带,说明原核表达载体构建成功,将其转入大肠杆菌Rosetta 2(DE3)感受态细胞后成功表达。MaNPC1蛋白分子式为C_(2747)H_(4249)N_(769)O_(793)S_(10),分子量为61.06 kD,理论等电点(pI)为8.96;丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和丝氨酸含量较高,分别占氨基酸总数的8.7%、8.2%、7.8%和7.7%;不稳定指数为47.14,表明其为不稳定蛋白;蛋白抗原区段丰富且亲水性氨基酸数目明显高于疏水性氨基酸,有利于后续抗体的制备。制备的多克隆抗体效价较高,为1∶2048000。Westernblotting检测发现,香蕉果实贮藏过程中MaNPC1蛋白表达水平呈上升-下降-上升的变化趋势;炭疽病侵染组MaNPC1蛋白除贮藏15 d时的表达水平比对照组低外,其他贮藏时间均略高于对照组。实时荧光定量PCR检测结果表明,MaNPC1基因相对表达量在香蕉果实贮藏过程中呈逐渐上升趋势;贮藏3~15 d,炭疽病侵染组MaNPC1基因相对表达量均显著高于对照组(P<0.05)。【结论】炭疽病侵染能提高MaNPC1蛋白表达水平,故推测MaNPC1蛋白参与香蕉果实抵抗炭疽病侵染。

香蕉炭疽病的浸染途径、发病机理与防治措施

香蕉炭疽病(Anthracnose)是一种严重的世界性病害,由芭蕉炭疽病(Colletotrichum musae)侵染引起,在果实采后贮藏、运输、销售过程中发生。文章综述了香蕉炭疽病的浸染途径、发病机理与防治措施的研究进展。