半枝莲抗肿瘤的信号通路研究进展

半枝莲在中国药用历史悠久,经现代研究证实含有黄酮类、多糖类、二萜类等多种抗肿瘤有效成分。梳理近年来半枝莲及其活性成分靶向肿瘤的各个信号通路的相关文献发现,半枝莲及其活性成分通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)、Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-cate-nin)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)途径、核因子-κB(NF-κB)、蛋白53(p53)和Hedgehog等多条信号通路,发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、降低迁移和侵袭能力、抗肿瘤血管形成、调节机体的免疫功能等作用,达到抗肿瘤效应。广泛应用于结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤疾病的治疗。研究以细胞信号通路为切入点,总结半枝莲抗肿瘤的作用机制,以期为深入挖掘半枝莲抗肿瘤机制及其临床应用提供参考。

半枝莲含药血清通过抑制mTOR信号通路影响非小细胞肺癌NCI-H1650细胞上皮间质转化

目的探讨半枝莲含药血清通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)NCI-H1650细胞上皮间质转化。方法选取健康青紫蓝大白兔制备半枝莲含药血清,根据不同剂量分为对照组、低剂量组(A组)、中剂量组(B组)、高剂量组(C组)。选取人非小细胞肺癌细胞NCI-H1650与含药血清培养,采用逆转录RT-PCR、免疫印迹、MTT、划痕实验等方法,观察4组不同剂量半枝莲含药血清抑制mTOR信号通路对NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖、迁移的影响。结果4组mTOR表达量差异具有统计学意义,其中C组mTOR表达量低于对照组和A组(P<0.05);4组Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达相对灰度值差异具有统计学意义,且C组Vimentin、N-cadherin灰度值低于对照组、A组、B组,E-cadherin灰度值高于对照组(P<0.05);4组24、48、72 h吸光度差异具有统计学意义,且C组24、48、72 h吸光度低于对照组、A组、B组(P<0.05);4组NCI-H1650细胞迁移率差异具有统计学意义,且A组、B组、C组迁移率低于对照组,C组低于A组、B组(P<0.05)。结论高剂量半枝莲含药血清可通过抑制mTOR信号通路影响NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖及迁移,从而抑制NSCLC发生和发展。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

半枝莲的HPLC指纹图谱研究

目的:研究半枝莲的 HPLC 指纹图谱的测定方法,并确定其指纹图谱。方法:采用 Discovery-C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-水(0.05%甲酸)的溶剂系统线性梯度洗脱[0 min→30 min→70 min,甲醇-水(0.05%甲酸)比例为25:75→40:60→75:25],流速1 mL·min^(-1),检测波长335 nm,柱温24℃,进样量10 μL。结果:通过对10批不同产地半枝莲药材的研究建立了半枝莲药材的指纹图谱,其中13个色谱峰为共有峰。利用 HPLC 指纹图谱相似性评价软件评价,10批药材的相似度在0.985～0.744之间。结论:利用半枝莲指纹图谱可以对半枝莲药材进行质量评价。该方法的优点在于提取方法简单,用HPLC 即可使大部分化学成分得到较好的分离。数据表明,该法具有很好的稳定性、重复性和可行性。可为半枝莲药材提供更为科学的依据和有效的鉴别方法。

半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响

目的观察半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响,探讨其抑瘤机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为空白组及半枝莲小、中、大剂量组,分别早晚灌胃给药,半枝莲小、中、大剂量组给药量分别为0.75、1.50、3.00 g/mL,空白组给予等量生理盐水,连续4 d,第5日取血,分离血清,分别作用于等量HepG2细胞,MTT法检测各组细胞黏附情况。结果半枝莲组与空白组相比,能明显抑制HepG2细胞的黏附(P<0.05),呈明显的量效关系。结论半枝莲可能通过抑制肿瘤细胞的黏附来发挥抗肿瘤的作用。

半枝莲HPLC指纹图谱建立及9种黄酮类成分含量测定

目的建立半枝莲高效液相指纹图谱,并测定9种黄酮类成分的含量作为其质控标准。方法采用HPLC法,应用Agilent Extend-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-甲酸水溶液(pH 2.5)为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),检测波长280 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果建立了10批半枝莲药材的指纹图谱,得到40个共有峰,并指认了9个成分峰,分别是野黄芩苷、圣草酚、黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、木犀草素、芹菜素、黄芩素、汉黄芩素,相似度在0.872~0.988。9种成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系(R^(2)≥0.9992),平均加样回收率为93.22%~116.49%,RSD为0.89%~4.68%。结论此方法重复性好、稳定、可行,符合指纹图谱的分析要求,可同时测定9种黄酮类成分,为建立半枝莲药材质控标准提供参考依据。

基于网络药理学的半枝莲-半边莲药对治疗胃癌的作用机制研究

目的使用网络药理学研究方法构建半枝莲-半边莲药对基于多成分、多靶点、多通路作用于胃癌的机制。方法利用TCMSP、TCMID、PharmMapper数据库获取药物有效活性成分及药物对应潜在靶标,利用GeneCards、OMIM及DisGeNET数据库筛选胃癌相关靶点;利用String数据库及Cytoscape 3.7.2构建化合物-靶点网络、Venn图以及PPI网络图;利用ClueGO及CluePedia插件对筛选出的基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果共筛选出半枝莲-半边莲44种化学成分,对应301个靶点,得到作用于胃癌的交集靶点157个,GO功能分析集中在对细胞死亡、凋亡的调控,对多种蛋白激酶活性的调节等方面,KEGG分析得到PI3K-Akt信号通路和MAPK信号通路等重要通路。结论该研究结果预测了半枝莲-半边莲药对治疗胃癌的可能作用靶点及通路,但尚有不足之处,需要后期实验研究验证。

半枝莲药理效应及临床应用研究进展

半枝莲的应用历史悠久,其干、鲜品皆可入药,具有抗肿瘤、抑菌、抗炎等活性。干品常用于治疗各类癌症以及肝病、胃病等,而鲜品在蛇虫咬伤、疔疮肿毒方面的疗效更佳。目前的科学研究以及临床应用大多集中于半枝莲干品,少见鲜品。文章通过查阅有关半枝莲的国内外文献,在其干、鲜品的药理效应以及临床应用方面分别进行综述,对于半枝莲的了解更为全面,为今后更好地开发半枝莲提供依据。

半枝莲中黄酮类成分提取和含量测定方法研究

目的探讨半枝莲药材中黄酮类成分的提取及含量的测定。方法采用超声提取方式对半枝莲中黄酮类成分进行检测,高效液相色谱法对提取的黄酮类成分中的野黄芩苷、木犀草素进行含量测定。结果①本实验超声提取的条件:超声提取时间为30 min,温度为65℃,乙醇浓度为45%,黄酮类提取物的测得率为13.12%;②高效液相色谱条件为:FortisC_(18)色谱柱(4.0 mm×150 mm,2.5μm),流动相为A:甲醇,B:乙腈,C:0.2%磷酸水缓冲溶液梯度洗脱,柱温为28℃,检测波长225 nm,流速为1.0 mL/min,进样量为15μL;野黄芩苷线性关系方程:Y=2.8165×10^(4)X+0.0632×10^(2)(r=0.9997),木犀草素线性关系方程:Y=3.2165×10^(4)X-0.0217×10^(2)(r=0.9994),野黄芩苷在9.87~250.21 mg/L,木犀草素在1.14~29.32 mg/L范围内线性关系良好。结论超声提取在时间为30 min,温度为65℃,乙醇浓度为45%时半枝莲中黄酮类成分的提取率较好,对含量的测定采用高效液相色谱法进行,方法简单,易行,重复性好,稳定性高,是含量测定的最佳方式。

半枝莲高效液相色谱指纹图谱研究

采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈(A)-水(0.2%磷酸,B)为流动相,梯度洗脱(0~15 min,5%~15%A;15~85 min,15%~35%A),流速1 m L·min-1,检测波长270 nm,柱温25℃,进样量10μL,建立了不同产地半枝莲药材的指纹图谱。其精密度、重现性以及稳定性良好。以野黄芩苷作为对照峰,标定了13个特征峰为其共有峰。采用中药色谱指纹图谱相似度软件进行测评,8份药材的相似度介于0.953~0.768。主成分分析获得2个主要成分,累积贡献率可达80.347%。应用指纹图谱并结合主成分分析,能够准确的评价半枝莲药材的质量。

白花蛇舌草-半枝莲药对治疗非小细胞肺癌的网络药理学研究

目的:利用网络药理学方法,研究白花蛇舌草-半枝莲药对治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的分子机制。方法:检索中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP),筛选并预测白花蛇舌草-半枝莲药对的有效活性成分与作用靶点。检索人类基因数据库(GeneCards)获取与NSCLC相关的基因。结合网络构建与分析等相关方法,筛选白花蛇舌草-半枝莲药对治疗NSCLC的关键靶点。使用富集分析数据库(DAVID)对关键靶点进行基因本体论(GO)生物学过程分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:从TCMSP获取药对成分131种,按照药物代谢动力学(ADME)筛选出有效活性成分33种,预测作用靶点196个。挖掘GeneCards获取基因3015个。利用图形化显示网络分析和编辑软件(Cytoscape)分别构建活性成分与疾病的蛋白质-蛋白质相互作用网络,抽取合并网络后进行拓扑属性分析,筛选出关键靶点142个。对关键靶点进行GO生物学过程与KEGG通路富集分析显示,主要涉及265种生物学过程与114条信号通路,与NSCLC发生发展密切相关。结论:白花蛇舌草-半枝莲药对治疗NSCLC,具有多成分、多途径、多靶点的特点,其主要涉及RNA转录启动、细胞凋亡、细胞表皮生长、细胞增殖、T细胞调节等癌症相关生物学过程,并在多种癌症相关通路均有富集。