半枝莲抗肿瘤的信号通路研究进展

半枝莲在中国药用历史悠久,经现代研究证实含有黄酮类、多糖类、二萜类等多种抗肿瘤有效成分。梳理近年来半枝莲及其活性成分靶向肿瘤的各个信号通路的相关文献发现,半枝莲及其活性成分通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)、Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-cate-nin)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)途径、核因子-κB(NF-κB)、蛋白53(p53)和Hedgehog等多条信号通路,发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、降低迁移和侵袭能力、抗肿瘤血管形成、调节机体的免疫功能等作用,达到抗肿瘤效应。广泛应用于结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤疾病的治疗。研究以细胞信号通路为切入点,总结半枝莲抗肿瘤的作用机制,以期为深入挖掘半枝莲抗肿瘤机制及其临床应用提供参考。

一测多评法同时测定半枝莲配方颗粒中5种黄酮类成分含量

目的建立同时测定半枝莲配方颗粒中野黄芩苷、黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、芹菜素5种黄酮类成分含量的一测多评法。方法半枝莲配方颗粒经80%甲醇超声提取,色谱柱为Agilent Eclipse XDB C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为甲酸水溶液(pH 2.5)-甲醇(65∶35,V/V),流速为0.8 mL/min,柱温为30℃,检测波长为280 nm,进样量为10µL。以野黄芩苷为参照,建立与黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、芹菜素的相对保留时间和相对校正因子,并测定9批半枝莲配方颗粒中5种黄酮类成分的含量。结果黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、芹菜素、野黄芩苷的质量浓度分别在1.58~50.63µg/mL(r=0.999)、6.33~101.25µg/mL(r=0.999)、1.57~50.25µg/mL(r=0.998)、1.45~46.50µg/mL(r=0.998)、28.14~900.50µg/mL(r=0.997)范围内与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为97.44%,96.78%,100.59%,96.01%,95.33%,RSD分别为1.79%,1.67%,2.86%,1.79%,1.35%(n=6);精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于3.00%(n=6)。不同高效液相色谱仪和色谱柱测定的黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、芹菜素相对于野黄芩苷的相对保留时间、相对校正因子的RSD均小于3.00%(n=9)。外标法和一测多评法测定9批半枝莲配方颗粒中5种黄酮类成分的含量相对偏差均不超过1.48%(n=9)。结论该方法简单可靠、结果准确,可用于半枝莲配方颗粒中5种黄酮类成分的含量测定。

基于网络药理学探讨半枝莲-白花蛇舌草治疗银屑病的作用机制

目的:通过网络药理学探究半枝莲-白花蛇舌草对银屑病产生治疗作用的活性成分、作用靶点、相关通路等作用机制。方法:在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)对半枝莲-白花蛇舌草进行检索,得到活性化合物及对应靶点,通过UniProt转换为对应基因名,通过GeneCards和TTD这两个数据库整合去重得到最终的银屑病疾病靶点。用Cytoscape 3.9.1构建“半枝莲-白花蛇舌草-活性成分-作用靶点”网络图,通过Venny 2.1.0得到半枝莲-白花蛇舌草与银屑病的交集靶点。通过STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络图,从DAVID数据库中得到基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析结果。利用AutoDock 1.5.6软件进行分子对接分析。结果:本研究得到半枝莲-白花蛇舌草主要通过槲皮素、木犀草素等重要活性成分作用于苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、肿瘤蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA)等关键靶点发挥治疗银屑病的作用。参与银屑病治疗的通路主要包括癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路等156条KEGG通路。分子对接结果表明主要活性成分与核心靶点蛋白有良好的结合活性。结论:半枝莲-白花蛇舌草可通过多个成分、靶点及通路达到治疗银屑病的目的,其作用机制与抑制炎症反应等方面有关。

基于网络药理学探讨龙葵-半枝莲药对治疗胃癌的作用机制

目的:运用网络药理学探讨具有抗肿瘤活性的龙葵-半枝莲药对治疗胃癌的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)检索龙葵、半枝莲的活性化学成分与作用靶点,通过GeneCards、OMIM、TTD、Drugbank、PharmGKB数据库检索胃癌疾病靶点,将预测的药物作用靶点与疾病靶点取交集,获得交集靶点,利用Cytoscape 3.7.2软件进行“药物-活性成分-靶点”网络构建。将交集靶点导入STRING数据库,搭建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。基于Metascape数据库进行基因本体论(GO)生物过程与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,依据结果绘制相应结果图,运用Cytoscape 3.7.2构建“靶点-通路”网络,研究其作用机制。结果:共筛选出龙葵-半枝莲药对33种活性化学成分、对应229个靶点,其中作用于胃癌的交集靶点有139个;PPI网络关键靶点主要有细胞肿瘤蛋白p53(Tumor Protein p53,TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt Serine/Threonine Kinase 1,AKT1)、白蛋白(Albumin,ALB)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3,CASP3)、血管内皮生长因子A(Vascular Endothelial Growth Factor A,VEGFA)、雌激素受体(Estrogen Receptor,ESR)1等。GO富集分析得到富集的生物过程集中在对外来刺激、无机物及激素的反应,细胞死亡的正向调节,凋亡信号通路等方面;KEGG通路富集分析得到磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、缺氧诱导因子-1(Hypoxia Inducible Factor-1,HIF-1)信号通路和核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)信号通路等重要通路。对可能的多条信号通路对胃癌病程进展的干预进行分析,得出龙葵、半枝莲两味中药可能通过抑制胃癌细胞的生长、代谢、分化、自噬达到抗癌的目的。结论:该研究结果预测了龙葵-半枝莲药对治疗胃癌的可能作用靶点及通路,但尚有不足之处,需要后期实验研究验证。

半枝莲含药血清通过抑制mTOR信号通路影响非小细胞肺癌NCI-H1650细胞上皮间质转化

目的探讨半枝莲含药血清通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)NCI-H1650细胞上皮间质转化。方法选取健康青紫蓝大白兔制备半枝莲含药血清,根据不同剂量分为对照组、低剂量组(A组)、中剂量组(B组)、高剂量组(C组)。选取人非小细胞肺癌细胞NCI-H1650与含药血清培养,采用逆转录RT-PCR、免疫印迹、MTT、划痕实验等方法,观察4组不同剂量半枝莲含药血清抑制mTOR信号通路对NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖、迁移的影响。结果4组mTOR表达量差异具有统计学意义,其中C组mTOR表达量低于对照组和A组(P<0.05);4组Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达相对灰度值差异具有统计学意义,且C组Vimentin、N-cadherin灰度值低于对照组、A组、B组,E-cadherin灰度值高于对照组(P<0.05);4组24、48、72 h吸光度差异具有统计学意义,且C组24、48、72 h吸光度低于对照组、A组、B组(P<0.05);4组NCI-H1650细胞迁移率差异具有统计学意义,且A组、B组、C组迁移率低于对照组,C组低于A组、B组(P<0.05)。结论高剂量半枝莲含药血清可通过抑制mTOR信号通路影响NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖及迁移,从而抑制NSCLC发生和发展。

半枝莲合二妙汤联合辛复宁治疗高危型HPV感染临床观察

目的探讨半枝莲合二妙汤联合辛复宁治疗高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的临床效果。方法筛选72例高危型HPV感染患者为研究对象,采用随机数字表法分成对照组(给予辛复宁治疗)和研究组(给予半枝莲合二妙汤联合辛复宁治疗),每组36例,分别按既定治疗方案治疗3个月,比较2组HPV转阴率、中医证候积分和中医证候疗效。结果治疗后,研究组HPV转阴率明显高于对照组(P<0.05),中医证候积分明显低于对照组(P<0.05);研究组中医证候总有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论半枝莲合二妙汤联合辛复宁治疗高危型HPV感染的临床效果优于单纯辛复宁治疗,能有效提高HPV转阴率和改善中医证候疗效,是一种值得推广的中西医结合治疗方案。

基于网络药理学及中药复方数据挖掘探究“黄芪-半枝莲”药对抑制胃癌的作用机制

目的:基于网络药理信息数据探究“黄芪-半枝莲”药对治疗胃癌的有效活性成分及作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索收集黄芪、半枝莲药物活性成分,据药动学特征,以口服生物利用度≥30%和类药性≥0.18为指标进行筛选,确定其中活性成分;利用OMIM,GeneCards和DigSee数据库,以“gastric cancer”为关键词,对胃癌相关靶点进行检索及筛选,将三个数据库筛选结果合并,删除重复项后得到胃癌的相关靶标信息;结合活性成分及靶点,建立成分-靶点网络,并进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:“黄芪-半枝莲”共含49个活性化学成分,与胃癌对应作用靶点241个;获得GO富集分析条目2783个(P<0.05),其中生物过程条目2501个,分子功能条目149个,细胞组分条目133个,KEGG通路富集筛选得到261条信号通路(P<0.05),涉及肿瘤信号通路、丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase,MAPK)信号通路等。结论:“黄芪-半枝莲”药对可能通过增加黄酮总量及依赖其活性成分抑制细胞增殖、诱发调亡、抑制肿瘤血管生成等发挥抑制胃癌的作用。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位的抗肿瘤作用。方法将接种S180肉瘤细胞的小鼠分为阴性组、阳性(环磷酰胺,CTX)组、白:半配对组,白半水提醇溶组以及白半水提醇沉组。给药12 d后,称重,取材,记录瘤重,计算抑瘤率、生长抑制率,记录肝脏、脾脏质量并计算指数。HE染色方法观察肿瘤组织细胞的形态学特征,ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量,细胞免疫荧光标记法检测细胞凋亡。结果CTX组、不同给药组抑瘤率分别为83.46%、50.82%、32.79%、36.61%。与阴性对照组相比,CTX组肝指数、脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);给药各组肝指数和脾指数,明显升高(P<0.05,P<0.01)。HE染色显微镜观察,瘤组织出现大面积坏死区,但提取物组细胞坏死较少。用ELISA法测得,各中药给药组能提高机体IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平。体外细胞凋亡实验初步证明白花蛇舌草、半枝莲药对具有细胞毒作用,其提取物细胞毒作用减弱。结论白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位均具有抗肿瘤作用,提取分离后各部分作用均有所减弱,说明中药配伍作用的合理性以及综合性。

半枝莲的HPLC指纹图谱研究

目的:研究半枝莲的 HPLC 指纹图谱的测定方法,并确定其指纹图谱。方法:采用 Discovery-C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-水(0.05%甲酸)的溶剂系统线性梯度洗脱[0 min→30 min→70 min,甲醇-水(0.05%甲酸)比例为25:75→40:60→75:25],流速1 mL·min^(-1),检测波长335 nm,柱温24℃,进样量10 μL。结果:通过对10批不同产地半枝莲药材的研究建立了半枝莲药材的指纹图谱,其中13个色谱峰为共有峰。利用 HPLC 指纹图谱相似性评价软件评价,10批药材的相似度在0.985～0.744之间。结论:利用半枝莲指纹图谱可以对半枝莲药材进行质量评价。该方法的优点在于提取方法简单,用HPLC 即可使大部分化学成分得到较好的分离。数据表明,该法具有很好的稳定性、重复性和可行性。可为半枝莲药材提供更为科学的依据和有效的鉴别方法。

半枝莲提取物对黄曲霉素B_1所诱发肝癌Notch1的影响

目的:探讨半枝莲提取物(ESB)对黄曲霉素B1所诱发的肝癌大鼠Notch1的影响。方法:选取60只Wistar大鼠,随机分为空白组、模型组、半枝莲提取物低、高剂量组,每组15只。建立用黄曲霉素B1所诱发的肝癌大鼠的动物模型。其中空白组与模型组给予蒸馏水灌胃,半枝莲提取物低、高剂量组给予不同浓度的ESB灌胃治疗。灌胃1次/d,连续治疗1个月。治疗结束后将所有大鼠处死,观察各组大鼠的体质量、肝表面的结节数,并取肝组织采用免疫组化法检测肝组织中Notch1的表达情况。结果:与空白组比较,模型组和ESB低、高剂量组大鼠的体质量明显降低(P<0.05),肝表面的结节数明显增多(P<0.05),Notch1阳性细胞数明显升高(P<0.05);与模型组比较,ESB低、高剂量组大鼠的体重升高(P<0.05),肝表面的结节数及Notch1阳性细胞数明显降低(P<0.05)。结论:低、高剂量的半枝莲提取物能够有效的抑制肝癌的恶化,其机制可能与下调肝组织中Notch1有关。

复方半枝莲胶囊抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察复方半枝莲胶囊抗肿瘤的作用。方法:采用MTT法观察其对人肝癌细胞、人胃癌细胞的体外抑瘤作用,并观察其对S180及HEPS实体瘤的抑制作用。结果:复方半枝莲胶囊对两种人癌细胞降解MTT半数抑瘤浓度(IC50)分别为1.05mg/mL、1.08mg/mL;体内对S180及HEPS实体瘤有明显的抑制作用,最大抑制率分别为65.31%、49.80%。结论:复方半枝莲胶囊具有明显的抗肿瘤作用。

半枝莲方治疗银屑病血热证的临床观察

目的:观察半枝莲方治疗银屑病血热证的疗效。方法:采用随机对照分组法,将75例寻常型银屑病血热证患者分为3组。治疗组25例,予半枝莲方口服联合卡泊三醇乳膏外用治疗;对照1组25例,给予卡泊三醇乳膏外用;对照2组25例,给予半枝莲方口服。于治疗前后分别对3组患者皮损进行真菌培养、同时进行PASI评分及中医证候评分,4周后观察3组患者临床疗效。结果:治疗后3组PASI评分、中医证候评分较前均有改善(P<0.05);治疗后治疗组与对照1组PASI评分、中医证候评分及真菌培养阴性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后治疗组与对照2组PASI评分、中医证候评分及真菌培养阴性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗组愈显率为88.0%,对照1组为48.0%,对照2组为76.0%,治疗组与对照1组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照2组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:半枝莲方可能通过降低皮损真菌感染率而达到治疗血热证银屑病的效果。

基于RhoA信号转导通路探讨半枝莲石油醚提取物对人三阴性乳腺癌细胞的影响

目的:研究半枝莲石油醚提取物对EGF诱导的人三阴性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)Ezrin和RhoA蛋白表达的影响,探讨其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、分化的作用机制。方法:溶剂萃取法获得半枝莲石油醚提取物,通过Agilent HPLC-ESI-Q-TOF-MS MassHunter软件分析,于PubChem数据库中获取半枝莲石油醚提取物熊果酸的分子对接信息。采用分子对接技术对半枝莲石油醚提取物中熊果酸与RhoA蛋白受体的对接进行可视化分析。为探讨其抑制肿瘤细胞的分化、增殖机制,取对数生长期细胞分为7组,用含2%胎牛血清培养液进行饥饿培养24 h,给予30 ng/mL EGF分别干预30 min、24 h后,分别给予相应药物培养30 min,采用Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中RhoA、p-RhoA及Ezrin蛋白表达情况。结果:质谱分析显示,半枝莲石油醚提取物中主要包括长链脂肪酸和萜类成分。生物信息分子对接发现,熊果酸是半枝莲调控RhoA的有效活性成分。Western blotting结果显示,EGF诱导MDA-MB-231细胞30 min及24 h后p-RhoA和Ezrin蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05);经Fasudil和半枝莲石油醚提取物干预30 min后,MDA-MB-231细胞p-RhoA和Ezrin蛋白相对表达量均明显降低(P<0.05);7组MDA-MB-231细胞RhoA蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。EGF可能以RhoA蛋白磷酸化的形式参与下游蛋白信号调控,增强肿瘤癌细胞中Ezrin蛋白表达,进而促进癌细胞侵袭和转移。结论:熊果酸是半枝莲调控RhoA的有效活性成分。半枝莲石油醚提取物可通过RhoA信号通路抑制MDA-MB-231细胞的增殖、转移和分化,进而对人三阴性乳腺癌起到治疗作用。

“半枝莲-黄芪”药对治疗非小细胞肺癌的网络药理学研究

目的:基于中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP),研究"半枝莲-黄芪"药对对非小细胞肺癌的作用靶点、信号转导通路,深刻探讨"半枝莲-黄芪"药对治疗非小细胞肺癌的作用机制,丰富中医学治疗非小细胞肺癌的内容,为该疾病的治疗提供新的思路和方法。方法:通过TCMSP以文献检索的方式收集含有半枝莲-黄芪药对的化合物,并通过药代动力学和毒性计算出每一化合物的药代动力学性质。结果:通过分析"药物-活性成分-靶点"网络,得出半枝莲素、高车前素、芹菜素二甲醚、三裂鼠尾草素等10种成分是"半枝莲-黄芪"药对治疗非小细胞肺癌的主要活性物质;筛选出信号传导及转录激活因子3(STAT3)、SRC原癌基因(SRC ProOncogene,SRC)、生长因子受体结合蛋白2(GRB2)、组蛋白乙酰基转移酶P300(EP300)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)五个关键靶点。结论:通过研究"半枝莲-黄芪"药对在非小细胞肺癌治疗中的作用靶点、信号转导通路,体现了中医药治疗非小细胞肺癌的整体观念,为非小细胞肺癌临床提供新的理论支持。

郑邦本常用对药举隅

郑邦本老师常用黄芪60 g配伍益母草15～30 g治疗肾病综合征、肾炎综合征、慢性肾炎、糖尿病肾病;灵芝30 g配刺五加15 g对脾肾阳虚,体虚乏力,食欲不振,腰膝酸痛,失眠多梦等证尤为有效,常用于疲劳综合征、神经衰弱的治疗;苏子10 g配地龙10 g降气止咳平喘,常用于支气管哮喘、喘息性支气管炎的治疗;木香10 g配伍槟榔10 g行气宽肠,治疗腹胀、肛门坠胀疗效显著;益母草15～30 g配生山楂30 g活血通经,治疗月经量少、痛经、不孕症等;半枝莲30 g与垂盆草30 g清热利湿退黄,退黄与降酶并举,常用于治疗肝功能异常湿热证;血肉有情之品鹿角胶10 g配伍骨碎补15 g补肾强筋骨,用于骨质疏松、骨折术后愈合不佳、脑萎缩等病;穿山甲5～10 g配鹿角片5～10 g治疗乳腺增生、输卵管不通疗效显著;怀牛膝15 g配刘寄奴30 g治疗血瘀阻络引起的关节疼痛,用于风湿性关节炎、膝骨性关节炎、骨关节损伤疾病。上述对药为郑老师经过长期临床验证,效如桴鼓,具有可重复性,如能在辨证基础上正确运用,常能收到良好效果。

半枝莲提取物抑制HepG2肝癌细胞的作用研究

目的考察半枝莲提取物对HepG2肝癌细胞的抑制作用及作用机制。方法体外培养HepG2肝癌细胞,MTT法考察半枝莲提取物对HepG2肝癌细胞增殖的影响;TRANSWELL法考察察半枝莲提取物对HepG2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;透射电镜观察半枝莲提取物对HepG2肝癌细胞自噬的影响;Western-Blot法考察半枝莲提取物对HepG2肝癌细胞Raf/MEK/ERK信号通路蛋白的影响。结果0、1.6、3.2、6.25、25、50、100μg/mL和200μg/mL半枝莲提取物孵育后,HepG2肝癌细胞生存率分别为(100.3±3.2)%、(97.8±11.9)%、(88.2±11.1)%、(65.3±8.7)%、(40.9±5.8)%、(27.3±4.0)%、(17.3±1.0)%、(8.3±0.5)%;半枝莲提取物可诱发HepG2肝癌细胞的自噬;20μg/mL半枝莲提取物组迁移率显著高于0μg/mL半枝莲提取物组(t=10.255,P=0.000);20μg/mL半枝莲提取物组侵袭率显著高于0μm半枝莲提取物组(t=8.260,P=0.001);半枝莲提取物可剂量依赖性地抑制p-MEK和p-ERK的表达。结论半枝莲提取物可抑制HepG2肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移,诱发细胞的自噬,该作用与半枝莲提取物抑制Raf/MEK/ERK信号通路有关。

半枝莲HPLC指纹图谱建立及9种黄酮类成分含量测定

目的建立半枝莲高效液相指纹图谱,并测定9种黄酮类成分的含量作为其质控标准。方法采用HPLC法,应用Agilent Extend-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-甲酸水溶液(pH 2.5)为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),检测波长280 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果建立了10批半枝莲药材的指纹图谱,得到40个共有峰,并指认了9个成分峰,分别是野黄芩苷、圣草酚、黄芩苷、野黄芩素、柚皮素、木犀草素、芹菜素、黄芩素、汉黄芩素,相似度在0.872~0.988。9种成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系(R^(2)≥0.9992),平均加样回收率为93.22%~116.49%,RSD为0.89%~4.68%。结论此方法重复性好、稳定、可行,符合指纹图谱的分析要求,可同时测定9种黄酮类成分,为建立半枝莲药材质控标准提供参考依据。

复方半枝莲胶囊体外抗肿瘤作用的实验研究

目的观察复方半枝莲胶囊体外抗肿瘤作用。方法采用活细胞计数法、MTT法、集落形成试验观察其对人肝癌细胞、人宫颈癌Hala细胞及人胃癌细胞的体外抑瘤作用。结果复方半枝莲胶囊对上述三种人癌细胞的生长增殖曲线具有明显的抑制作用;对三种人癌细胞降解MTT半数抑瘤浓度(IC50)分别为1.05 mg/mL、0.75mg/mL、1.08 mg/mL;对三种人癌细胞的集落形成有明显的抑制作用,最大抑制率分别为45.16%、68.42%、45.31%。结论复方半枝莲胶囊体外具有明显的抗肿瘤活性。

“半枝莲-白花蛇舌草”药对治疗胃癌的网络药理学作用机制分析

目的基于网络药理学,探讨"半枝莲-白花蛇舌草"药对治疗胃癌(GC)的有效活性成分及作用机制。方法通过TCMSP数据库选取"半枝莲-白花蛇舌草"药对中含有的131个化合物,筛选其活性成分及潜在靶点;通过人类孟德尔遗传数据库、GeneCards数据库挖掘GC疾病靶点;结合化合物及疾病靶点,构建化合物-靶点网络图,并进行GO功能富集及KEGG通路富集分析。结果 "半枝莲-白花蛇舌草"药对中含有34个活性成分,对应GC161个靶点;主要通过调控RNA聚合酶II启动子、胞质、胞外间隙、血管生成、细胞凋亡信号通路等治疗胃癌,主要涉及肿瘤信号通路、蛋白聚糖信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、p53信号通路等。结论 "半枝莲-白花蛇舌草"药对治疗胃癌的作用机制确切,这为临床中医治疗胃癌提供了客观依据,亦可指导"半枝莲-白花蛇舌草"药对治疗胃癌作用机制的实验研究。