不同配伍比例的半枝莲-白花蛇舌草药对对肝癌细胞增殖活性的影响

目的:研究不同配伍比例的半枝莲-白花蛇舌草药对(简称半白药对,SB-OD)对肝癌细胞株(MHCC97H细胞和Huh7细胞)增殖活性的抑制作用。方法:运用CCK-8法观察不同配伍比例的半白药对(半白1∶1,半白2∶1,半白1∶2)干预MHCC97H和Huh7细胞24 h,分别计算其IC_(50)值;并应用细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,分析不同配伍比例的半白药对对MHCC97H和Huh7细胞增殖活性的影响。结果:不同配伍比例的半白药对作用MHCC97H和Huh7细胞后的生存活力明显下降(P<0.01),并呈浓度依赖性,其中半白1∶1组作用于MHCC97H和Huh7细胞的IC_(50)值分别为6.69 mg/mL和7.95 mg/mL;半白2∶1组作用于MHCC97H和Huh7细胞的IC_(50)值分别为2.58 mg/mL和3.43 mg/mL;半白1∶2组作用于MHCC97H和Huh7细胞的IC_(50)值分别为15.04 mg/mL和16.60 mg/mL。不同配伍比例的半白药对干预MHCC97H和Huh7细胞后的克隆形成率明显降低(P<0.01)。结论:不同配伍比例的半白药对均能够抑制肝癌MHCC97H和Huh7细胞的增殖活性,2∶1配伍比例的抑制作用最佳,可作为半白药对抗肿瘤研究的实验基础。

半枝莲抗肿瘤的信号通路研究进展

半枝莲在中国药用历史悠久,经现代研究证实含有黄酮类、多糖类、二萜类等多种抗肿瘤有效成分。梳理近年来半枝莲及其活性成分靶向肿瘤的各个信号通路的相关文献发现,半枝莲及其活性成分通过调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、酪氨酸蛋白激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)、Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-cate-nin)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)途径、核因子-κB(NF-κB)、蛋白53(p53)和Hedgehog等多条信号通路,发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、降低迁移和侵袭能力、抗肿瘤血管形成、调节机体的免疫功能等作用,达到抗肿瘤效应。广泛应用于结肠癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤疾病的治疗。研究以细胞信号通路为切入点,总结半枝莲抗肿瘤的作用机制,以期为深入挖掘半枝莲抗肿瘤机制及其临床应用提供参考。

基于TCGA研究左右半结肠癌基因表达差异及苦参-大血藤-半枝莲作用机制

【目的】探讨左半结肠癌与右半结肠癌的基因表达差异及大肠癌核心药对苦参-大血藤-半枝莲作用于左右半结肠癌的机制差异。【方法】下载134例左半结肠癌及194例右半结肠癌患者癌症基因组图谱(TCGA)的转录组数据,应用R软件实现2组差异基因分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;通过BATMAN-TCM数据库获取苦参-大血藤-半枝莲药对的活性成分及靶点,基于左右半结肠癌差异基因,分别进行药对-左/右半结肠癌KEGG富集分析、蛋白质互作(PPI)网络构建,比较药对治疗左、右半结肠癌富集的生物信号通路差异及关键靶点差异。【结果】左半结肠癌与右半结肠癌相对于正常癌旁组织共同的差异表达基因共6051个,左半结肠癌特异性的差异表达基因共1958个,右半结肠癌特异性的差异表达基因共1739个;左半结肠癌特异性KEGG富集通路14条,右半结肠癌特异性KEGG富集通路23条。苦参-大血藤-半枝莲药对活性化合物共85个,对应的靶点合计469个,药对-左半结肠癌靶点富集于10条KEGG信号通路,关键靶点为DRD2、CACNA1C、HTR3A、COMT、TH,药对-右半结肠癌靶点富集于1条KEGG信号通路,核心靶点为HTR3A、DRD2、TH、AGT、GRIN2B。【结论】左半结肠癌与右半结肠癌存在基因表达差异:左半结肠癌与免疫功能异常、AMPK信号通路异常等机制有关,右半结肠癌与中性粒细胞外陷阱形成、酒精中毒、Hippo信号通路异常等机制有关。除调控细胞周期及必需氨基酸代谢等机制外,苦参-大血藤-半枝莲药对对调节左半结肠癌肠道内分泌功能、抑制右半结肠癌炎症反应具有特异性作用,亦可能对结肠癌患者具有情绪调控作用。

中药半枝莲质量评价的研究进展

目的了解中药半枝莲质量评价的研究进展。方法通过查阅相关文献并归纳总结,对半枝莲质量评价方面的研究进行综述。结果半枝莲质量评价的研究内容主要包括性状和显微鉴定、指纹图谱研究以及含量测定研究,其中对于有效部位和药材中单体成分的含量测定研究报道相对较多。结论半枝莲的质量评价研究取得了一定进展,但尚存在一些问题,需要进一步深入探讨。

半枝莲含药血清通过抑制mTOR信号通路影响非小细胞肺癌NCI-H1650细胞上皮间质转化

目的探讨半枝莲含药血清通过抑制雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路影响非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)NCI-H1650细胞上皮间质转化。方法选取健康青紫蓝大白兔制备半枝莲含药血清,根据不同剂量分为对照组、低剂量组(A组)、中剂量组(B组)、高剂量组(C组)。选取人非小细胞肺癌细胞NCI-H1650与含药血清培养,采用逆转录RT-PCR、免疫印迹、MTT、划痕实验等方法,观察4组不同剂量半枝莲含药血清抑制mTOR信号通路对NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖、迁移的影响。结果4组mTOR表达量差异具有统计学意义,其中C组mTOR表达量低于对照组和A组(P<0.05);4组Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达相对灰度值差异具有统计学意义,且C组Vimentin、N-cadherin灰度值低于对照组、A组、B组,E-cadherin灰度值高于对照组(P<0.05);4组24、48、72 h吸光度差异具有统计学意义,且C组24、48、72 h吸光度低于对照组、A组、B组(P<0.05);4组NCI-H1650细胞迁移率差异具有统计学意义,且A组、B组、C组迁移率低于对照组,C组低于A组、B组(P<0.05)。结论高剂量半枝莲含药血清可通过抑制mTOR信号通路影响NCI-H1650细胞上皮间质转化、增殖及迁移,从而抑制NSCLC发生和发展。

基于网络药理学研究半枝莲抗三阴性乳腺癌的作用机制

目的利用网络药理学探讨半枝莲治疗三阴性乳腺癌的作用机制。方法本研究采用网络药理学方法,主要包括靶点预测、网络构建和功能富集。从中药系统药理学数据库与分析平台中获取“半枝莲”所有化合物靶点,并与其活化物进行匹配,发现木犀草素和汉黄芩素为主要相关化合物。构建蛋白-蛋白相互作用网络获得相关靶点信息,构建半枝莲与三阴性乳腺癌相关靶点网络,分析半枝莲抗三阴性乳腺癌的关键信号通路。结果共获得15个活性化合物的104个靶点。网络分析得出10个半枝莲治疗三阴性乳腺癌的关键靶点。功能富集分析表明,半枝莲可能通过协同调节多种生物学相关信号通路,对三阴性乳腺癌产生治疗作用。结论半枝莲治疗三阴性乳腺癌的药理机制可能与其协同调节细胞凋亡、细胞周期、分化、增殖、迁移、侵袭和血管生成密切相关。

基于网络药理学的半枝莲治疗膀胱癌相关作用机制研究

目的通过网络药理学方法探讨半枝莲治疗膀胱癌的作用机制,为临床治疗提供理论依据。方法利用中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)数据库获得半枝莲化学成分及对应作用靶点基因,利用GeneCards数据库获得膀胱癌相关靶点基因,利用Cytoscape软件构建半枝莲“成分-靶点-疾病”三者相互关系网络,采用STRING数据库对半枝莲作用于膀胱癌的潜在作用靶点进行蛋白相互作用网络分析并筛选关键靶点。利用在线工具Metascape对共同靶点进行基因本体功能富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果半枝莲含29个活性成分、228个靶基因,膀胱癌含4645个靶基因,共同靶点190个,关键靶点可能为AKT1、TP53、JUN、TNF、EGFR、MAPK1等。KEGG富集分析主要涉及癌症途径、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路等。结论本研究借助网络药理学方法初步预测了半枝莲通过多靶点、多通路治疗膀胱癌,为临床治疗提供新靶点和新思路。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

半枝莲的HPLC指纹图谱研究

目的:研究半枝莲的 HPLC 指纹图谱的测定方法,并确定其指纹图谱。方法:采用 Discovery-C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-水(0.05%甲酸)的溶剂系统线性梯度洗脱[0 min→30 min→70 min,甲醇-水(0.05%甲酸)比例为25:75→40:60→75:25],流速1 mL·min^(-1),检测波长335 nm,柱温24℃,进样量10 μL。结果:通过对10批不同产地半枝莲药材的研究建立了半枝莲药材的指纹图谱,其中13个色谱峰为共有峰。利用 HPLC 指纹图谱相似性评价软件评价,10批药材的相似度在0.985～0.744之间。结论:利用半枝莲指纹图谱可以对半枝莲药材进行质量评价。该方法的优点在于提取方法简单,用HPLC 即可使大部分化学成分得到较好的分离。数据表明,该法具有很好的稳定性、重复性和可行性。可为半枝莲药材提供更为科学的依据和有效的鉴别方法。

白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位的抗肿瘤作用。方法将接种S180肉瘤细胞的小鼠分为阴性组、阳性(环磷酰胺,CTX)组、白:半配对组,白半水提醇溶组以及白半水提醇沉组。给药12 d后,称重,取材,记录瘤重,计算抑瘤率、生长抑制率,记录肝脏、脾脏质量并计算指数。HE染色方法观察肿瘤组织细胞的形态学特征,ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量,细胞免疫荧光标记法检测细胞凋亡。结果CTX组、不同给药组抑瘤率分别为83.46%、50.82%、32.79%、36.61%。与阴性对照组相比,CTX组肝指数、脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);给药各组肝指数和脾指数,明显升高(P<0.05,P<0.01)。HE染色显微镜观察,瘤组织出现大面积坏死区,但提取物组细胞坏死较少。用ELISA法测得,各中药给药组能提高机体IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平。体外细胞凋亡实验初步证明白花蛇舌草、半枝莲药对具有细胞毒作用,其提取物细胞毒作用减弱。结论白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位均具有抗肿瘤作用,提取分离后各部分作用均有所减弱,说明中药配伍作用的合理性以及综合性。

清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H_(22)细胞的作用及免疫学机制比较

【目的】比较清热解毒中药和补益类中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制。【方法】选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药,并与补益代表药黄芪进行比较;将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、黄芪组和热休克处理对照组(热休克组)。在活体肝癌H22腹水细胞腹腔接种后当天,冬凌草组、半枝莲组和黄芪组分别以30、 15、15 g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,连续12 d;热休克组小鼠以43℃热处理20 min,每4天1次,共3次;模型组不予任何处理。12 d后处死小鼠,分别抽取腹水制片,光镜下观察细胞形态,并采用免疫组化法检测腹水CD4+、CD8+T细胞表达。【结果】冬凌草组、半枝莲组和热休克组见腹水肝癌H22细胞大量坏死和凋亡,黄芪组对肿瘤细胞形态无明显影响;冬凌草组和半枝莲组腹水中CD4+、CD8+表达均升高,而热休克组则主要是CD8+表达升高,黄芪组以CD4+表达升高为主。【结论】清热解毒中药可致小鼠腹水肝癌H22细胞坏死和凋亡,机制可能与其提高细胞免疫功能,从而增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力有关。黄芪未见有直接杀伤肿瘤细胞的作用,其抗肿瘤作用可能主要是通过提高CD4+的表达而实现的。

半枝莲中微量元素的微波消解-火焰原子吸收光谱法测定

目的建立中草药微量元素的测定方法。方法采用微波消解处理半枝莲，火焰原子吸收光谱法测定其6种微量元素的含量。结果半枝莲中Fe，Cu，Zn，Mn，Ca，Mg的含量十分丰富。该方法加标回收率在93．0％～103．75％之间。结论微波消解-火焰原子吸收光谱法简单、快速、灵敏、准确，可用于中草药微量元素的测定。

HPLC测定半枝莲中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量

建立半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量同时测定的HPLC方法。色谱条件为DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱分离,检测波长为335 nm,流动相为乙腈(A)-1%冰醋酸水溶液(B)进行梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为30℃。野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素浓度分别在2.0~200、0.5~50、0.5~50、0.5~50μg/m L范围内与峰面积积分值线性关系良好。在精密度实验、稳定性实验、重复性实验中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素峰面积的相对标准偏差(RSD)<2.0%;野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的加样回收率范围及平均值和RSD分别为97.73%~101.7%、99.72%、1.36%(n=9),97.78%~102.8%、99.53%、1.99%(n=9),97.40%~102.4%、99.39%、1.84%(n=9)和97.80%~102.0%、99.24%、1.49%(n=9)。所测12份不同产地半枝莲药材中,野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素的含量范围分别为2.41~7.08、0.26~0.56、0.31~0.90、0.28~0.95 mg/g。本方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率实验符合要求,能准确、稳定地对半枝莲药材中野黄芩苷、黄芩素、木犀草素和芹菜素含量进行同时定量测定。

半枝莲中微量元素与活性成分含量的量变分析

通过测定不同产地半枝莲药材中微量元素和活性成分的含量,探讨半枝莲药材中物质成分间的关系,为半枝莲药材的质量评价提供参考。采用火焰原子吸收光谱法测定半枝莲中9种微量元素含量,HPLC法测定半枝莲中野黄芩苷的含量,紫外分光光度计法测定半枝莲总黄酮和多糖的含量,进行相关性、回归分析。并通过聚类分析对不同产地的半枝莲进行评价。结果表明野黄芩苷、总黄酮与Zn含量呈显著正相关关系,与Mn含量呈极显著正相关关系;多糖与Zn、Mn含量呈显著正相关关系。并以此为基础,建立相应回归方程模型,聚类分析表明不同产地的半枝莲有一定的相似性与差异。说明半枝莲中微量元素与活性成分含量之间存在密切相关关系,具体量化关系需进一步研究,以期为半枝莲药材种植及质量评价提供依据。

半枝莲总黄酮对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞衰老的影响

目的研究半枝莲总黄酮(HF)对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响,并探讨可能的作用机制。方法将不同浓度的HF(30、50 mg/L)分别放于NGM和DMEM培养基中,研究对线虫的寿命、生殖能力、氧化应激、抗氧化酶活力、相关基因表达以及对HUVECs的抗氧化酶活力和相关基因表达的影响。结果 HF能显著延长线虫的平均寿命和最大寿命,对其生殖能力没有损害,子代数目无统计学差异,35℃急性热应激下的平均生存时间显著延长;同时,HF均能提高秀丽线虫和人HUVECs中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活性,并上调两种细胞中抗衰老基因daf-16、sir-2.1的表达。结论 HF可能通过提高抗氧化酶活力和抗氧化基因的表达水平,能够延缓线虫衰老及急性热应激下的应激能力同时不损害生殖能力,并保护内皮细胞免受损伤。

五种中药对139株微生物体外抗菌活性的实验研究

目的:研究连翘、大青叶、夏枯草、盐肤木树皮水煎液,以及半枝莲挥发油对临床分离菌株的抑制作用,探讨中药在治疗感染性疾病方面的综合作用。方法:将5种中药制成一定浓度的水煎液,按K-B法测定5种中药、中药联合左氧氟沙星及中药联合维生素C对139株从临床标本中分离出的微生物的体外抑制作用。用琼脂稀释法测定大青叶、盐肤木树皮水煎液、半枝莲挥发油3种中药及左氧氟沙星对139株微生物的最低抑菌浓度(MIC)。结果:大青叶、盐肤木树皮水煎液及半枝莲挥发油对139株微生物有一定的抑菌作用,而连翘、夏枯草对139株微生物的抑菌效果较差;大青叶、盐肤木树皮水煎液、半枝莲挥发油与左氧氟沙星联合应用后对139株微生物的抑菌效果有所增强;在中药中加入一定浓度的维生素C后,增加了中药对微生物的抑菌作用。结论:利用现有的抗感染中、西药物进行组合是一种有效治疗微生物感染性疾病的途径。

半枝莲和白花蛇舌草总多糖对S_(180)荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的:探讨半枝莲和白花蛇舌草总多糖对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤及其免疫调节作用。方法:采用MTT比色法检测肿瘤细胞的生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期的改变;建立S180荷瘤小鼠模型,观察小鼠肿瘤的生长情况,计算抑瘤率、胸腺与脾脏指数;观察对荷瘤小鼠体液免疫功能及网状内皮系统吞噬功能的影响。以上动物试验在造模同时灌胃给予不同剂量的半枝莲和白花蛇舌草总多糖和环磷酰胺,模型组和正常组动物给予等容量的生理盐水。结果:浓度为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL的半枝莲和白花蛇舌草总多糖均可抑制S180肿瘤细胞株的体外增殖,且抑制作用呈浓度-效应依赖性,100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL使G0/G1期细胞百分数增加,G2/M期细胞百分数下降;200mg/kg对S180荷瘤小鼠瘤重生长具有明显抑制作用,并且增加其胸腺指数和脾脏指数;200mg/kg和100mg/kg明显提高S180荷瘤小鼠的血清半数溶血素值,200mg/kg显著提高荷瘤小鼠的吞噬指数K及吞噬系数α值。结论:半枝莲和白花蛇舌草总多糖对S180荷瘤小鼠具有较强抗肿瘤作用,并可以提高其免疫系统功能。

半枝莲多糖对宫颈癌及自分泌运动因子AMFR的影响

目的:观察半枝莲多糖对U14宫颈癌自发转移小鼠的作用,分析其抗肿瘤作用可能机制。方法:将60只昆明种小鼠随机均分为5组:空白组、半枝莲多糖小剂量组、半枝莲多糖中剂量组、半枝莲多糖大剂量组、西药组,每组分别于右腋皮下接种U14宫颈癌细胞悬液以建立肿瘤自发转移模型,免疫组化法观察各组小鼠肿瘤组织中AMFR表达情况。结果:半枝莲多糖可明显抑制宫颈癌自发转移小鼠实体瘤的生长,降低肿瘤组织中AMFR的表达。结论:半枝莲多糖可抑制宫颈癌小鼠肿瘤的生长,机制可能是通过减少肿瘤组织中AMFR的表达实现的。

半枝莲对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞端粒酶活性的影响

目的:研究半枝莲对人肺巨细胞癌细胞株PG细胞端粒酶活性的影响。方法:用不同浓度的半枝莲含药血清分别处理人肺巨细胞癌细胞株PG细胞,采用流式细胞仪法观察其对PG细胞端粒酶活性的影响。结果:经半枝莲含药血清作用的PG细胞端粒酶活性明显下降。结论:下调肿瘤细胞的端粒酶活性,可能是半枝莲抗肿瘤的重要机制之一。

刘鲁明运用大剂量半枝莲治疗胰腺癌经验

介绍刘鲁明教授运用大剂量半枝莲治疗胰腺癌经验。半枝莲在经验方清胰化积汤中起"清热解毒,利湿消肿"作用,随着半枝莲剂量的增加,能明显改善胰腺癌患者的临床症状,最大用量可至150 g。