表达barstar基因及bar基因的转基因油菜的研究

从细菌Ｂａｃｉｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ染色体ＤＮＡ中克隆了ｂａｒｎａｓｅ抑制剂ｂａｒｓｔａｒ的基因，构建了带有ＴＡ－２９基因５′调控区（－１３００－＋３）与ｂａｒｓｔａｒ基因编码区、ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与除草剂抗性基因ｂａｒ两个表达框架的植物表达质粒ｐＢＢＳ。以“双低”油菜“５－４”的子叶柄为受体，通过农杆菌介导的遗传转化，获得了在含有１０ｍｇ／Ｌ卡那霉素和２０ｍｇ／ＬＰＰＴ的筛选培养基上再生的转基因植株。ＰＣＲ分析结果表明，ｂａｒｓｔａｒ基因已整合到油菜染色体上；Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测表明，ｂａｒｓｔａｒ基因及ｂａｒ基因在转基因植物中得到了正确的调控与表达。以转基因油菜“５－４”为父本授粉给表达ｂａｒｎａｓｅ基因的雄性不育植株，不育株能正常结实。

烟草绒毡层特异启动子TA29、解淀粉芽孢杆菌Barstar基因的克隆与测序

以基因组ＤＮＡ 为材料，分别对普通烟绒毡层特异启动子ＴＡ２９ 和解淀粉芽孢杆菌Ｂａｒｓｔａｒ 基因的编码序列进行了克隆和全序列分析。结果表明，ＴＡ２９ 全长１５２６ｂｐ ，含有ＴＡＴＡｂｏｘ；Ｂａｒｓｔａｒ 基因的编码序列全长２７３ｂｐ，包括起始密码子ＡＴＧ 和终止密码子ＴＧＡ。

Barnase在大肠杆菌中的分泌表达和诱导条件优化

从解淀粉芽孢杆菌中PCR分别扩增解淀粉芽孢杆菌核糖核酸酶barnase基因及其抑制剂barstar基因,采用将barnase基因置于barstar基因保护下的克隆策略,以pET-22b(+)质粒为基础,构建大肠杆菌分泌型表达质粒.IPTG诱导表达目的蛋白后将培养基蛋白进行SDS-PAGE分析并从诱导温度、IPTG诱导浓度和诱导时间三方面初步优化诱导表达条件.