牛Basigin基因变异体的克隆与鉴定

为了研究牛Basigin(BSG)基因是否存在变异体,采用3′RACE和测序技术对牛的BSG基因进行克隆和鉴定,成功克隆出了牛BSG基因4条转录本的3′端片段,分别命名为BSG-v1、BSG-v2、BSG-v3和BSG-v4,其中BSG-v2、BSG-v3和BSG-v4是新发现的牛BSG基因变异体。研究表明,BSG-v2在第7外显子处发生了3′端可变剪接,导致BSG-v2的外显子7比BSG-v1的短了515 bp,但没有改变BSG基因的开放阅读框;BSG-v3和BSG-v4都发生了选择性多聚腺苷酸化,由于没有外显子7,导致产生了更短的3′UTR,说明牛的BSG基因存在不同形式的变异体,这为进一步研究牛BSG基因在不同生物学过程中的功能提供了分子生物学基础。

抑制消减杂交技术筛选大鼠急性心肌缺血后差异基因

目的采用抑制消减杂交技术,筛选早期心肌缺血相关的RNA分子,为相关研究和应用提供依据。方法 10只SD雄性大鼠结扎冠状动脉前降支1h,制作心肌缺血模型。以缺血心肌的RNA分子为实验组,以非缺血区的RNA分子为对照组,用Clontech公司抑制消减杂交试剂盒进行杂交。经蓝白斑筛选阳性克隆测序并经过斑点杂交确认,构建早期大鼠心肌缺血后抑制消减杂交文库,所得序列和Genbank数据库比对。结果筛选到10个阳性克隆和11个未知基因的表达序列标签(expressed sequence tag,EST),按照功能分类,包括代谢相关的酶类基因,核糖体和翻译相关的基因,心肌重塑相关的基因等,其中组织蛋白酶L1,basigin等基因等是首次报道与早期心肌缺血相关。结论采用抑制消减杂交技术获得的差别表达基因可为早期心肌缺血提供新的目标分子。