Bax channel blocker逆转衰老骨髓间充质干细胞生物学行为的研究

目的:探讨Bax channel blocker(BCB)对自然衰老大鼠骨髓间充质干细胞(aged-BMSCs)生物学功能的影响。方法:全骨髓贴壁培养法获得22月龄(老年)和2周龄(年青)大鼠BMSCs,β-gal染色鉴定aged-BMSCs,用BCB对实验组细胞进行干预,以Nanog和Oct-4为靶标,RT-PCR筛选最佳作用浓度。使用RT-PCR和Western Blot分别检测细胞衰老水平及成骨分化的关键基因及蛋白的表达;对细胞药物干预同时进行成骨分化诱导,培养14 d后进行碱性磷酸酶(ALP)染色,21 d后茜素红染色。结果:BCB对aged-BMSCs最佳实验浓度为10μmol/L。BCB能明显降低aged-BMSCs细胞内β-gal含量,在mRNA水平和蛋白水平降低衰老相关基因p53和p21WAF1/cip1表达;明显提升干细胞标记物Nanog、Oct-4。成骨分化诱导后,成骨分化标志基因表达上调,ALP和茜素红染色水平提升。结论:BCB能够逆转aged-BMSCs的衰老,促进其骨向分化。

氨氯地平对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响

目的探讨钙通道阻滞药氨氯地平(amlodipine)对实验性2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因bax,bcl-2的影响,以及其防治糖尿病肾病的可能机制。方法通过高糖高脂膳食喂养SD雄性大鼠,诱发胰岛素抵抗,再注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发高血糖,复制实验性2型糖尿病大鼠模型。实验分为3组,对照组、糖尿病组和氨氯地平治疗组。分别于注射STZ第8和12周后各取6只大鼠,光镜观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测大鼠肾组织bcl-2以及bax表达,流式细胞术检测大鼠肾组织细胞凋亡率及bcl-2、bax表达。结果糖尿病组肾小球系膜基质增生,基底膜增厚及细胞外基质堆积;少部分肾小管轻度萎缩或管腔扩张,上皮细胞肿胀,胞浆内可见小脂肪空泡。流式细胞术结果显示:糖尿病组肾小球及肾小管凋亡率高于其他各组,治疗组肾小球及肾小管凋亡率与糖尿病组比较降低,且有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示:bcl-2与bax在各组均有不同程度表达,糖尿病组bcl-2与bax表达增强,治疗组与糖尿病组比较bcl-2表达增强,bax表达减弱。结论细胞凋亡及相关基因bcl-2/bax参与了糖尿病肾病的发病;氨氯地平可以通过bax表达下降、bcl-2表达增加使肾脏细胞凋亡率减少从而达到保护肾脏的作用。