基于Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究加味旋覆代赭汤治疗食管癌前病变的作用机制

目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模成功后,分别进行药物灌胃干预,空白组、模型组用生理盐水灌胃,中药组和西药组分别给予加味旋覆代赭汤、西药(雷贝拉唑+莫沙必利)灌胃,给药8周取材。利用光学显微镜观察食管上皮组织的形态学变化;分别应用蛋白质印迹法(Western-blot)及聚合酶链式反应(PCR)检测食管上皮组织Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠食管上皮病理积分升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组大鼠食管上皮病理积分均降低(P<0.01)。PCR及Western-blot检测结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,中药、西药组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均增高(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠食管组织中Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可能通过下调Bcl-2/Bax比值,增加线粒体外膜通透性,释放凋亡因子,激活Caspase-3,使病变组织发生凋亡,扭转食管上皮异型增生,从而起到治疗食管癌前病变的作用。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax水平的影响

目的:探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响及其治疗魄不安于肺不寐可能的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组和西药组,每组8只。采用水环境小平台法干预9 d建立魄不安于肺不寐大鼠模型,造模成功后,中药组予以桂枝加龙骨牡蛎汤7.6 g·kg-1·d-1灌胃,西药组予以右佐匹克隆片0.1 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d,测量体质量。采用免疫组织化学法及蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量减轻(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2的表达显著减少(P<0.01),Caspase-3、Bax表达显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著减少(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.01),Bax、Caspase-3相对表达量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠体质量显著增加(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2表达增加(P<0.05),Caspase-3、Bax表达减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织中Bcl-2相对表达量增加(P<0.05),Bax、Caspase-3相对表达量显著减少(P<0.01)。结论:桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺不寐大鼠的睡眠可能与增加其脑组织Bcl-2、降低Caspase-3、Bax表达水平有关。

基于caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响

目的基于caspase-3/Bcl2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。方法建立肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol,将细胞分为pcDNANC组(转染pcDNA-NC空白载体)、pcDNA-SMAC组(转染pcDNA-SMAC载体)、siRNA-NC组(转染siRNANC空病毒载体)和siRNA-SMAC组(转染siRNA-SMAC慢病毒载体)。qRT-PCR法检测细胞中SMAC mRNA表达;MTT法检测细胞敏感度;克隆实验法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力;Western blot法检测细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果肺腺癌A549细胞较BEAS-2B正常细胞中SMAC mRNA表达明显降低(P<0.05)。pcDNA-SMAC组较pcDNA-NC组细胞中SMAC mRNA表达显著升高(P<0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达显著降低(P<0.05)。和pcDNA-NC组相比,pcDNA-SMAC组细胞IC_(50)、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著降低,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显高于pcDNA-NC组(P<0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞IC_(50)、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著升高,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论高表达SMAC可增加肺腺癌细胞的紫杉醇敏感度、抑制细胞增长和侵袭、促进细胞凋亡,且对caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路有一定调控作用。

基于Bax/Bcl-2/Caspase-3通路探讨健脾益肾化浊方对多囊卵巢综合征大鼠卵巢功能的改善作用

目的观察健脾益肾化浊方通过Bax/Bcl-2/Caspase-3通路调节多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢功能的作用机制。方法SD大鼠采用高脂饮食联合来曲唑造模,将造模成功的大鼠随机分为空白对照组,模型组,健脾益肾化浊方高、中、低剂量组及阳性药二甲双胍组。应用ELISA法检测各组大鼠血清LH、T和LH/FSH水平;HE染色观察大鼠卵巢组织的形态;免疫组化法和Western blotting法检测各组大鼠Bcl-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)的蛋白表达。结果ELISA结果显示,健脾益肾化浊方各剂量治疗组LH、T和LH/FSH水平明显下降,FSH水平明显升高;HE染色结果显示,健脾益肾化浊方各剂量组的卵巢组织可得到明显改善;免疫组化结果显示,Bax在卵巢颗粒细胞、间质及黄体细胞中的表达升高,Bcl-2在卵母细胞、黄体和卵泡液中表达升高,Caspase-3在颗粒细胞、卵母细胞膜和间质中表达升高;Western blotting结果显示,健脾益肾化浊方各治疗组Bax和Caspase-3蛋白相对表达量下调,Bcl-2蛋白相对表达量上调,Bax/Bcl-2比值降低。结论健脾益肾化浊方可通过下调PCOS大鼠卵巢组织Bax、Caspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2比值,上调Bcl-2蛋白表达,调整卵巢细胞增殖凋亡过程,改善卵巢微环境,调节内分泌水平,促进卵泡的发育与成熟,从而达到改善卵巢排卵功能的作用。

活血明目方对体外加压培养大鼠RGCs NF-κB信号通路凋亡相关因子Bax及Bcl-2的影响

目的观察活血明目方对体外加压大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中凋亡相关因子Bax和Bcl-2表达的干预作用。方法将SD大鼠随机分为4组,每组3只大鼠,采取体外加压培养SD大鼠凋亡模型,制备活血明目方含药肠吸收液,观察活血明目方对体外加压RGCs在NF-κB信号通路作用下对Bax、Bcl-2表达的影响。结果Q-PCR和Western blot检测发现,与模型组相比,含药肠吸收液组中Bax相对表达量显著下降(P<0.05),而Bcl-2相对表达量则显著上升(P<0.01)。结论活血明目方含药肠吸收液对RGCs凋亡具有一定的抑制作用。

橙皮苷调控Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡

【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H_(2)O_(2)处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg/mL橙皮苷处理24 h,然后采用CCK-8法测定奶牛乳腺上皮细胞活性,通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,利用实时荧光定量PCR检测奶牛乳腺上皮细胞的Bcl-2、Bax和Caspase3基因表达水平,并以Western blotting检测Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白的表达变化。【结果】与空白对照组(CK)相比,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著下降(P<0.01,下同),发生凋亡的细胞比例极显著升高,且DNA片段呈梯状条带;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P<0.05,下同),且细胞凋亡程度低,发生凋亡的细胞数目较少。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著上升,细胞凋亡比例极显著降低,且DNA片段的梯状条带减少。在Bax、Bcl-2和Caspase3基因及其蛋白表达方面,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞中的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著或极显著高于CK组,而Bcl-2基因及其蛋白表达水平较低;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著低或极显著于CK组,Bcl-2基因及其蛋白表达水平则均高于CK组;与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达极显著下调,而Bcl-2基因及其蛋白表达极显著上调。【结论】橙皮苷通过Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡,有效提高细胞活性,故推测橙皮苷对促进乳腺器官发育和维持泌乳能力具有良好的正向效应。

槲皮素通过抑制Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡通路保护内毒素血症小鼠心肌损伤

目的:观察槲皮素对内毒素血症小鼠心肌损伤的保护作用,并探讨Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路机制。方法:18只C57BL/6N小鼠随机分为对照组(Control组)、脂多糖诱导内毒素血症模型组(LPS组)、槲皮素治疗组(QR组)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中cTnI、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β和IL-6水平;心脏超声检测小鼠LVEDd、LVESd、EF、FS、CO等心脏结构及心功能指标;Western Blot法检测心脏组织中Caspase3、Bax、Bcl-2的表达。结果:与Control组比较,LPS组cTnI、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β和IL-6表达均升高,EF、FS、CO等心功能指标均下降,Caspase3和Bax表达增强,Bcl-2表达减弱;与LPS组比较,QR组cTnI、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-1β和IL-6表达均下降,EF、FS、CO等心功能指标均升高,Caspase3和Bax表达减弱,Bcl-2表达增强。结论:槲皮素对LPS诱导内毒素血症小鼠心肌损伤具有保护作用,其作用机制与降低炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6释放,抑制Caspase3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。

黄芪甲苷通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

目的观察黄芪甲苷(Astragaloside-IV,AS)抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导凋亡作用,并探讨其Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路作用机制。方法将MCF-7细胞分为空白对照组(AS,0μmol·L-1)和黄芪甲苷50、25、12.5μmol·L-1浓度组。采用CCK-8和台盼蓝计数法检测黄芪甲苷对MCF-7细胞增殖和生长曲线的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法观察黄芪甲苷对MCF-7细胞凋亡形态学的影响;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot法分析黄芪甲苷对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,黄芪甲苷25、50μmol·L-1组MCF-7细胞增殖明显被抑制(P<0.01),生长曲线(2~7 d)显著减缓(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡明显增多;RT-PCR和Western Blot试验结果发现黄芪甲苷25、50μmol·L-1组MCF-7细胞Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论黄芪甲苷可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路有关。

参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾组织凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响

目的:探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾小球足细胞凋亡的影响。方法:制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA),复制膜性肾病小鼠模型。将40只模型小鼠随机分为模型组、参芪蛭龙汤高、低剂量组和雷公藤多苷片组,另取10只正常小鼠作为正常组。连续给药4周后,处死小鼠,HE、Masson、PAS染色观察肾组织病理变化;RT-PCR检测肾组织Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Bax(/BCL2-相关X蛋白)、Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3)mRNA表达变化;Western blot检测肾组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达变化。结果:HE染色发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组肾小球体积减小,仅有炎性细胞浸润减少;Masson染色可见,与模型组比较,各给药组可见肾小球体积减小,基底膜增厚及组织纤维化减轻;PAS染色可见,各给药组基底膜病变较模型组显著减轻,参芪蛭龙汤高剂量组并未出现明显基底膜增厚等改变。RT-PCR结果显示,与模型组比较,参芪蛭龙汤各组小鼠肾组织Bax、Caspase-3 mRNA表达减少(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达增加(P<0.01);Western blot结果发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠肾组织Bax、Caspase-3蛋白表达减少(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论:参芪蛭龙汤能够改善膜性肾病小鼠肾组织病变,抑制肾小球足细胞凋亡。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3凋亡机制抑制小鼠气道平滑肌细胞的增殖

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的抗增殖及促凋亡作用,并分析其在Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3凋亡机制发挥的调控作用。方法体外培养小鼠气道平滑肌细胞,再用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的H_(2)O_(2)刺激细胞增殖,作用不同时间(12、24、48、72 h),探索H_(2)O_(2)最佳作用浓度和时间。接着将ASMCs分为对照组、H_(2)O_(2)组、1,25(OH)_(2)D_(3)、H_(2)O_(2)+1,25(OH)_(2)D_(3)4组进行培养,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMCs增殖活性的变化,并用流式细胞仪检测其凋亡情况。并用蛋白印迹法检测各组Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白的表达情况。结果H_(2)O_(2)刺激小鼠气道平滑肌细胞增殖的最佳作用浓度和时间分别为25μmol/L和24 h。1,25(OH)_(2)D_(3)干预能明显降低ASMCs增殖能力,并增加其凋亡率。H_(2)O_(2)+1,25(OH)_(2)D_(3)组细胞凋亡率为21.9%(对照组细胞凋亡率为7.1%,H_(2)O_(2)组细胞凋亡率为4.8%),差异具有统计学意义(P<0.01)。1,25(OH)_(2)D_(3)干预后,蛋白印迹法结果显示ASMCs的Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2表达水平下降。结论1,25(OH)_(2)D_(3)能抑制H_(2)O_(2)刺激ASMCs的增殖,并促进其凋亡,其机制与Bax/Bcl-2/ccleaved caspase-3凋亡通路有关。

益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨益气活血化浊解毒方是否可通过调控Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。方法:72只SPF级雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、益气活血化浊解毒方低剂量组(TCM-L)、中剂量组(TCM-M)、高剂量组(TCM-H)、尼莫地平组(Nim),每组12只大鼠。建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h后再灌注。造模24h后,各用药组分别予相应浓度的药物灌胃,其余各组等容积生理盐水灌胃,连续治疗3d。采用改良神经功能缺损评分评估大鼠神经功能损伤情况;盐酸2,3,5-三苯基四氮(TTC)染色观察脑梗死体积;TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况;Western blot检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的情况;荧光定量PCR法检测Caspase-3mRNA表达的情况。结果:(1)与Sham组比较,MCAO组的大鼠神经功能缺损症状显著加重(P<0.05);脑梗死体积占比增大(P<0.05);缺血区细胞凋亡率增加(P<0.05);Western blot检测显示大鼠脑组织Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05);PCR检测显示Caspase-3mRNA表达显著升高(P<0.05)。(2)与MCAO组比较,TCM组和Nim组的神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05);脑梗死体积百分比减少(P<0.05);缺血区细胞凋亡率降低(P<0.05);Western blot检测显示大鼠脑组织Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);PCR检测显示Caspase-3mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:益气活血化浊解毒方可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Caspase-3蛋白及Caspase-3mRNA表达抑制神经细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。

制冰片介导Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路改善心肌细胞H/R损伤

目的研究天竺黄制冰片对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及潜在作用机制。方法通过给予H9C2心肌细胞不同的缺氧时间体外模拟缺血再灌注损伤,测定损伤后H9C2心肌细胞中超氧化物歧化酶(superioxide diamutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)水平,评估模型是否成功建立。MTT方法测定天竺黄、冰片及制冰片对H9C2细胞的安全浓度范围,并检测天竺黄、冰片及制冰片对H/R诱导后心肌细胞中MDA、SOD和LDH生成的影响。采用Real-time PCR和Western blot方法检测天竺黄制冰片对H/R诱导H9C2细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3基因和蛋白的表达。结果缺氧6 h,复氧4 h,心肌细胞存活率小于50%,细胞中MDA和LDH水平显著增加,SOD活性显著降低,成功模拟缺血再灌注模型。天竺黄、冰片及制冰片在12.5~100μg/mL浓度范围内,对心肌细胞活力均没有影响。天竺黄(6.25~100μg/mL)对H/R诱导的H9C2细胞活力没有显著影响;冰片(25~100μg/mL)显著增加H/R诱导的H9C2细胞活力(P<0.05),制冰片(25~100μg/mL)极显著增加了H/R诱导的H9C2细胞活力(P<0.01)。同时,与模型组相比,冰片和制冰片分别给药均降低了H/R诱导的心肌细胞中MDA和LDH的水平,提高了SOD的活性,且同浓度制冰片调节作用优于冰片。同时,天竺黄制冰片通过上调了Bcl-2基因和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3基因和蛋白表达,发挥抑制细胞凋亡的作用。结论天竺黄制冰片可通过调控Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路阻碍心肌细胞凋亡,进而达到保护心肌的作用。

沙库巴曲缬沙坦钠通过Bax/caspase-3信号通路抑制心肌细胞凋亡

为了探索沙库巴曲缬沙坦钠(LCZ696)抑制心衰心肌细胞凋亡的作用机制,腹腔注射盐酸阿霉素构建SD大鼠心衰模型,模型构建成功后随机分为心衰组(HF)、缬沙坦组(Val)、LCZ696低剂量组(LCZ-L)、LCZ696高剂量组(LCZ-H),空白组(Control),治疗8周后观察大鼠平均动脉压(MAP)、体质量、心率(HR)变化,检测血清中脑钠肽(BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸肌酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)含量,超声评价各组大鼠心功能改善情况;将大鼠左心室心肌组织进行HE染色和Tunel染色;检测活化的AKT(P-AKT)、Bax、caspase-3蛋白表达.结果显示:心衰大鼠经Val及LCZ696治疗后超声显示心脏功能均有明显改善,BNP、CK-MB、CK、AST、ALT水平下降,其中LCZ-H组降低最明显;HE染色及Tunel染色显示经治疗后细胞凋亡数减少,心肌组织中P-AKT含量较HF增加,Bax、caspase-3蛋白含量较HF组降低,LCZ-H组减少最显著.综上可知,LCZ696通过抑制Bax/caspase-3信号通路抑制心肌细胞凋亡,改善心功能.

miR-216a对重症急性胰腺炎腺泡损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1 通路的影响

目的探索miR-216a对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腺泡细胞损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1通路的影响.方法将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组、SAP组、anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组.Con组不做任何处理,其余各组采用雨蛙肽(10 nmol/L)联合脂多糖(lipo poly saccharide,LPS)(10 mg/L)处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建SAP细胞模型,anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组分别转染anti-miR-NC、anti-miR-216a、miR-NC、miR-216a mimics.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组细胞中miR-216a及P2X7、NLRP3、caspase-1 mRNA相对表达量;Western blot法检测各组细胞中P2X7、NLRP3、Caspase-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cellymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific protease-3,Cleaved caspase-3)蛋白表达情况.结果各组细胞中IL-6、TNF-α含量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞凋亡率和Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量比较,Con组<Sch+miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<anti-miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞Bcl-2蛋白相对表达量比较,anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组<Con组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞中miR-216a和P2X7、NLRP3、Caspase-1 mRNA及其蛋白相对表达量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-216a可通过抑制P2X7-NLRP3/caspase-1信号通路减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,从而减轻SAP腺泡损伤.

复方蛇龙胶囊抑制Bax/Caspase-3信号通路减轻膜性肾病大鼠肾组织细胞凋亡的研究

目的 探讨复方蛇龙胶囊抑制Bax/Caspase-3信号通路减轻膜性肾病大鼠肾组织细胞凋亡的影响。方法 抽取10只6周龄SPF级雄性SD大鼠作为正常组,其余40只采用注射阳离子化牛血清白蛋白(Alb)构建膜性肾病大鼠模型,采用随机数字表法将其分为模型组,雷公藤多苷片组,复方蛇龙胶囊低、高剂量组,每组10只。除正常组和模型组灌服等量生理盐水外,其余各组灌胃给予相应药物,连续4周。HE染色、Masson染色、透射电镜及扫描电镜观察各组肾组织病理学变化;比较各组大鼠尿微量白蛋白(mAlb)和血肌酐(SCr)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、Alb、总蛋白(TP)含量;比较各组大鼠肾组织细胞凋亡率;比较各组大鼠肾组织Nephrin、Podocin、Bcl-2、Bax和Caspase-3 m RNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠尿m Alb含量升高(P<0.05);血清Alb、TP含量降低,TC、TG和SCr含量升高(P<0.05)。与模型组比较,复方蛇龙胶囊低、高剂量组大鼠尿m Alb含量降低(P<0.05);血清Alb、TP含量升高,TC、TG和SCr含量降低(P<0.05)。与复方蛇龙胶囊低剂量组比较,复方蛇龙胶囊高剂量组尿m Alb降低(P<0.05);血清Alb、TP含量升高,SCr含量降低(P<0.05)。正常组大鼠HE染色可见肾小球结构完整;Masson染色未见组织纤维化。模型组大鼠HE染色可见肾小球体积增大,肾小管可见空泡变性,并伴有蛋白管型;Masson染色可见组织纤维化,蓝色胶原纤维组织出现。与模型组比较,复方蛇龙胶囊低、高剂量组大鼠肾小球体积增大、肾小管空泡变性及组织纤维化有所减轻。正常组基底膜结构完整,足细胞结构正常;模型组肾小球大面积水肿,基底膜增厚,足突融合变宽,足细胞结构严重损伤,细胞骨架蛋白裸露;与模型组比较,复方蛇龙胶囊低、高剂量组大鼠基底膜增厚程度减轻,足细胞形态结构趋于正常。与正常组比较,模型组大鼠肾组织细胞凋亡率升高(P<0.05);与模型组比较,复方蛇龙胶囊低、高剂量组大鼠肾组织细胞凋亡率降低(P<0.05);与复方蛇龙胶囊低剂量组比较,复方蛇龙胶囊高剂量组大鼠肾组织细胞凋亡率降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠Nephrin、Podocin、Bcl-2 m RNA表达水平降低,Caspase-3、Bax m RNA表达水平升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。与模型组比较,复方蛇龙胶囊低、高剂量组大鼠Nephrin、Podocin、Bcl-2 m RNA表达水平升高,Caspase-3、Bax m RNA表达水平降低,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。与复方蛇龙胶囊低剂量组比较,复方蛇龙胶囊高剂量组Nephrin、Podocin m RNA表达水平升高,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。结论 复方蛇龙胶囊能有效改善膜性肾病大鼠蛋白尿,显著减轻肾脏病理损伤,延缓膜性肾病进展,其机制可能与抑制足细胞凋亡有关。

黄夏白冬消癌汤对Lewis肺癌小鼠Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的观察黄夏白冬消癌汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响。方法选取40只雄性C57BL/6小鼠,于小鼠右侧腋窝皮下注射Lewis肺癌细胞悬液建立肺癌模型。将造模成功的Lewis肺癌小鼠随机分为4组,每组10只。模型组给予生理盐水灌胃(1次/d),顺铂组给予顺铂2 mg/kg腹腔注射(每2 d 1次),黄夏白冬消癌汤低、高剂量组分别给予2 g/mL和4 g/mL黄夏白冬消癌汤灌胃(1次/d),均连续干预14 d。测量各组干预2,4,6,8,10,12,14 d后肿瘤长径与短径,计算肿瘤体积;干预结束后脱颈椎处死小鼠,称瘤重,计算抑瘤率;取各组小鼠瘤组织,采用Western blot法检测瘤组织中NF-κBp65、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleved-Caspase-3蛋白表达情况,采用qPCR法检测瘤组织中NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA相对表达量。结果黄夏白冬消癌汤低剂量组干预6~14 d期间各时间点肿瘤体积及干预结束后瘤重与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);顺铂组及黄夏白冬消癌汤高剂量组肿瘤生长延缓,各时间点肿瘤体积及干预结束后瘤重均明显低于模型组(P均<0.05),抑瘤率均明显高于黄夏白冬消癌汤低剂量组(P均<0.05),顺铂组与黄夏白冬消癌汤高剂量组各时间点肿瘤体积、干预结束后瘤重、抑瘤率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。顺铂组及黄夏白冬消癌汤低、高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65及NF-κB p65、Bcl-2 mRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),Cleved-Caspase-3/Caspase-3均明显高于模型组(P均<0.05);顺铂组及黄夏白冬消癌汤高剂量组Bax/Bcl-2及Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),黄夏白冬消癌汤低剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);黄夏白冬消癌汤低、高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65及Bcl-2 mRNA相对表达量均明显高于顺铂组(P均<0.05),Cleved-Caspase-3/Caspase-3及Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显低于顺铂组(P均<0.05),NF-κB p65 mRNA相对表达量与顺铂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);黄夏白冬消癌汤高剂量组Bax/Bcl-2与顺铂组比较差异无统计学意义(P>0.05),黄夏白冬消癌汤低剂量组明显低于顺铂组(P<0.05)。结论黄夏白冬消癌汤可以通过上调Bax、Caspase-3和下调Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达以促进肺癌细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。

芹菜素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的探讨黄酮类化合物芹菜素对大鼠实验性心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)时心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,并分析心肌组织病理学损伤程度。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血45 min,再灌注2 h制作缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为8组,即正常组(normal group,Normal)、假手术组(sham oper-ation group,Sham)、生理盐水缺血/再灌注组(saline ischemi-a-reperfusion group,NS)、溶剂对照组(solvent control group,Sol)、美托洛尔对照组(metoprolol control group,Meto)、芹菜素低、中、高剂量(1、2、4 mg.kg-1)用药组(apigenin low,medium and high dose treatment group,Api1,Api2,Api4)。再灌注2 h后迅速取出心脏,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞;免疫组化法测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达;做病理组织切片检查心肌损伤情况。结果芹菜素各剂量组心肌细胞凋亡率明显低于NS组(P<0.05),Api1,Api2,Api4能剂量依赖性地降低大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡率;芹菜素各剂量组剂量依赖性地提高大鼠心肌缺血/再灌注的Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低大鼠心肌缺血/再灌注的Bax、Caspase-3蛋白表达量(P<0.05);芹菜素各剂量组与NS组比较,心肌组织损伤的病理学变化明显减轻(P<0.05)。结论芹菜素对缺血/再灌注心肌的保护效应可能与其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡有关;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3蛋白表达有关;芹菜素能明显减轻心肌组织损伤。

轻中度亚低温对大鼠心肺复苏后脑细胞caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究不同程度亚低温对大鼠心肺复苏(CPR)后脑组织凋亡的影响。方法利用窒息法制作心肺复苏模型,SD大鼠15只,随机分为对照组(正常体温)、34℃低温组、32℃低温组,每组各5只。对照组在CPR后置于室温25℃下常规治疗;34℃低温组(34+/-0.2℃)和32℃低温组(32+/-0.2℃)在CPR 0.5 h后分别给予亚低温治疗。各组大鼠均于CPR后12 h取脑组织,免疫组化法测定大脑皮层caspase-3蛋白表达,Western blotting测定Bcl-2、Bax表达,同时观察各组脑组织病理变化。结果与常温组相比,低温组神经元caspase-3表达均明显减弱(P<0.05),其中32℃低温组caspase-3表达减弱更加明显(P<0.05);低温组Bcl-2表达明显增强(P<0.05),32℃低温组的Bcl-2蛋白表达比34℃低温组表达更强;3组大鼠神经元凋亡蛋白bax的表达无明显差异。结论亚低温可能通过降低caspase-3蛋白的表达、增强Bcl-2的表达,从而抑制脑细胞凋亡减轻脑损伤,32℃亚低温治疗比34℃更能起到脑保护的作用。

丹参川芎嗪注射液对缺血性脑卒中患者血流变及外周血BCL-2、BAX、Caspase-3蛋白水平的影响

目的：观察丹参川芎嗪注射液治疗缺血性脑卒中的临床疗效,并探讨其对血流变学及外周血BCL-2、BAX、Caspase-3蛋白含量的影响。方法：2012年1月~2013年12月在河北医科大学第二医院神经内科收治的缺血性脑卒中患者96例,患者按随机数字表分为对照组和观察组,两组患者均接受常规基础治疗,观察组患者在常规治疗基础上接受丹参川芎嗪注射液进行治疗,疗程均为4周。治疗前及治疗4周评估患者神经功能缺损严重程度、患侧肢体运动功能、日常生活能力和生活质量,测定血流变学指标及外周血BCL-2、BAX和Caspase-3蛋白含量。结果：（1）治疗4周时观察组患者NIHSS评分均较对照组患者显著降低（P〈0.01）,而FMI、MBI和SIS较对照组患者显著升高（P〈0.01）;（2）治疗4周时观察组患者HCT、ESR、WBV和FIB均较对照组患者显著降低（P〈0.01）;（3）治疗4周时观察组患者外周血BCL-2蛋白含量较对照组患者显著升高（P〈0.01）,而BAX和Caspase-3蛋白含量较对照组患者显著降低（P〈0.01）。结论：丹参川芎嗪注射液对缺血性脑卒中具有显著疗效,可改善患者的神经功能、患侧肢体运动功能、日常生活能力和生活质量,其机制可能与调节BCL-2、BAX与Caspase-3蛋白表达进而抑制细胞凋亡以及改善患者血流变学有关。