不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建及BcFT上游调控因子筛选

FLOWERING LOCUS T(FT)是调控植物开花途径中的关键基因,前期研究中,在比较晚开花wym-97和早开花cx-49两个品种的BcFT启动子时,发现cx-49的BcFT启动子存在一个1577 bp的插入片段。为探索该插入片段对不结球白菜开花的影响,本研究构建不结球白菜酵母杂交cDNA文库,继而利用酵母单杂交技术筛选与BcFT启动子互作的蛋白。结果显示,本研究所得cDNA文库的库容为1.8×10^(6)CFU,重组率为100%,插入片段长度分布范围约400~2000 bp,平均长度大于1000 bp,表明不结球白菜酵母杂交cDNA文库构建成功。自激活试验表明,800 ng·mL^(-1)的金担子素(AbA)可以抑制诱饵载体的自激活。通过酵母单杂交试验筛选到结合BcFT启动子插入片段的上游蛋白BcSAP18和BcDEAR2。综上,本研究成功构建了不结球白菜酵母杂交cDNA文库并获得了BcFT启动子插入片段的互作蛋白,为进一步研究BcFT在不结球白菜开花中的调控机制奠定了基础。

不结球白菜开花基因BcFT的亚细胞定位及其互作蛋白的筛选

[目的]开花基因FT是开花通路下游关键基因。本文旨在研究不结球白菜BcFT的亚细胞定位及互作蛋白的筛选,深入了解不结球白菜BcFT的功能及其调控机制。[方法]构建亚细胞定位载体p EZS-NL-BcFT,利用亚细胞定位技术研究BcFT的空间表达。通过酵母双杂交技术筛选与BcFT互作的蛋白,构建酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-BcFT,转化酵母Y2H Gold菌株,验证自激活性和自毒性。对不结球白菜酵母双杂交c DNA文库进行筛选,得到与BcFT互作的片段,并根据基因片段进行比对,以不结球白菜c DNA为模板进行基因全长克隆,构建p GADT7载体,进行共转化验证,最后对筛选得到的2个蛋白进行生物信息学分析。[结果]BcFT蛋白在整个细胞中均有分布。诱饵载体p GBKT7-BcFT表达产物对酵母细胞无自激活性和自毒性,通过酵母双杂交及共转验证得到2个与BcFT互作的蛋白:Bc PPD5和Bc VHA-E1。生物信息学分析预测这2个蛋白均为亲水性蛋白,不含信号肽,Bc PPD5蛋白的氨基酸序列存在1个跨膜区,二级结构中不规则卷曲所占比例最大,第163和296氨基酸残基之间存在1个Psb P结构域;Bc VHA-E1蛋白无跨膜区,二级结构中α螺旋所占比例最大,无特定结构域。[结论]确定了BcFT蛋白在整个细胞中均有表达。利用酵母双杂交技术筛选得到2个与BcFT互作蛋白,进一步分析发现其可能通过光周期路径影响开花。

BaCo_(0.2)Fe_(0.6)Ti_(0.2)O_(3-δ)的制备、氧非化学计量和电子输运性能研究

采用修饰的Pechini方法制备了纯相BaCo0.2Fe0.6Ti0.2O3-δ(BCFT)样品.X射线衍射(XRD)证明了该方法制备的陶瓷粉体及烧结样品为单一的六方钙钛矿相结构.扫描电镜(SEM)观察显示BCFT烧结样品具有均匀的微结构.电导测量显示:在570℃以下具有电阻负温度系数(NTC)特征,而在570～1000℃则呈电阻正温度系数(PTC)特征,结合碘滴定对BCFT样品在不同温度下的氧非化学计量测量结果,分析认为该电导出现极值的现象是因为高温晶格氧析出导致样品空穴载流子浓度降低所致.对电阻负温度系数温度段的电子输运性能和稳定性的研究表明,BCFT在200～300℃之间具有较好的阻温特征和重复性,有望作为一种在该温度段使用的新型NTC材料.

混合氧离子导体BaCo_(0.2)Fe_(0.6)Ti_(0.2)O_(3-δ)的制备与性能研究

采用修饰的 Pechini方法制备了纯相混合氧离子导体 Ba Co0 .2 Fe0 .6Ti0 .2 O3 -δ(BCFT)样品。 X射线衍射(XRD)证明了该方法制备的陶瓷粉体及烧结样品为单一的六方钙钛矿相结构。扫描电镜 (SEM)观察显示BCFT烧结样品具有均匀的微结构。电导测量显示 :在 5 70℃以下具有电阻负温度系数 (NTC)特征 ,而在 5 70～ 1 0 0 0℃则呈电阻正温度系数 (PTC)特征。结合 BCFT烧结样品的氧非化学计量碘滴定结果分析认为 :高温晶格氧在 5 0 0～ 60 0℃的大量析出使空穴载流子浓度降低是导致电导率出现极值的原因 ,这同时也说明了BCFT在 45 0～ 80 0℃物理热膨胀系数的峰值现象。