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题名马蓝IGPS基因的克隆、表达分析及原核表达
被引量:1
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作者
蔡国倩
宁书菊
叶齐
胡永乐
马小毛
魏道智
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机构
福建农林大学生命科学学院/福建省农业生态过程与安全监控重点实验室
福建农林大学农学院/作物生态与分子生理学福建省高校重点实验室
武夷学院生态与资源工程学院
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出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第8期2167-2174,共8页
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基金
国家自然科学基金面上项目(No.81573517)
福建省自然科学基金面上项目(No.2019J01827)
福建农林大学科技创新专项基金项目(No.CXZX2020011A)。
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文摘
吲哚-3-甘油磷酸合酶(indole-3-glycerol phosphate synthase,IGPS)是广泛参与生物体内色氨酸、生长素等吲哚化合物合成途径中重要的关键酶之一。为了研究BcIGPS在马蓝吲哚类生物碱合成中的作用,基于马蓝转录组数据,通过RT-PCR技术从马蓝中克隆得到IGPS基因序列,命名为BcIGPS;利用生物信息学分析BcIGPS序列特性;运用qPCR分析BcIGPS在马蓝不同器官及外源诱导处理下的时空表达情况;构建pET-32a-BcIGPS原核表达载体,并优化诱导表达条件。结果表明:BcIGPS(GenBank登录号:MT210517)全长为1176 bp,包含1个开放阅读框(ORF),编码392个氨基酸,具丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位点31个,无跨膜结构,无信号肽,亚细胞定位于叶绿体中。BcIGPS含有product(indole)活性结构域和IGPS、TrpC特异性位点。qPCR分析结果显示,BcIGPS基因在不同器官的相对表达丰度依次为:叶>茎>花>根;其响应茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、乙烯利(ETH)外源诱导信号的诱导,经MeJA和ETH处理后,分别在24 h和36 h最高,为初始水平的5.53、6.87倍;在SA处理下,BcIGPS表达响应最为强烈,呈先骤升后骤降的变化趋势,在12 h最高达初始水平的33.13倍;ABA处理后,其表达量变化不显著。所构建的pET-32a-BcIGPS原核表达载体在大肠杆菌BL21中表达,其最适条件为37℃、0.4 mmol/L IPTG培养3 h,BcIGPS重组蛋白主要以包涵体形式存在,且蛋白分子量与预测相符。
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关键词
马蓝
bcigps
基因克隆
表达分析
原核表达
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Keywords
Baphicacanthus cusia
bcigps
gene cloning
expression analysis
prokaryotic expression
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分类号
S961.6
[农业科学—水产养殖]
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