缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax表达的影响。方法将雄性昆明种小鼠随机分为4组,每组6只,分别给予10%,20%,30%的乙醇和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续30d,通过心肌细胞的核固红鄄结晶紫和免疫组织化学染色,分析细胞凋亡及凋亡相关基因——B细胞淋巴瘤/白血病鄄2基因(B鄄celllymphoma/leukemia鄄2,Bcl鄄2)和Bcl相关蛋白(Bcl鄄associatedxprotein熏Bax)的表达。结果实验组部分心肌细胞核染色质凝集,染为蓝紫色;定量分析显示,实验组异常的心肌细胞核明显多于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中Bcl鄄2的表达弱于对照组(P<0.01),且分布不均;而实验组心肌细胞中Bax的表达明显增强(P<0.01),可见棕色粗大颗粒。结论心肌细胞凋亡在乙醇对心肌影响的发生机制上发挥一定的作用;随着乙醇浓度的增加,心肌细胞的凋亡征象愈加明显;乙醇引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax的异常表达有关。

乙醇对金黄地鼠胚胎神经上皮细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨乙醇染毒对金黄地鼠胚胎神经上皮细胞内B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)基因和Bcl相关蛋白(Bcl-associatexprotein,Bax)表达的影响。方法成年未经产金黄地鼠48只,实验组分6组,每组5只;对照组分6组,每组3只。实验组于孕7.5d腹腔注射乙醇,剂量为5.8g/kg,分别于4、8、16、24、48和72h后剖腹取胎,用免疫组织化学和图象分析技术对各期鼠胚神经上皮的Bcl-2和Bax的表达进行检测。对照组腹腔注射生理盐水。结果对照组Bcl-2和Bax正常分布于金黄地鼠胚胎神经上皮和周围间充质的核膜和胞浆,随时间推移,二者的表达量逐渐增高,于处理后16h达到高峰,与对照组相比,升高有统计学意义(P<0.01),之后逐渐下降。各实验组胚胎神经上皮细胞的Bcl-2免疫组化染色强度均不同程度地低于对照组,Bax的表达在8h低于对照组,其他各组均不同程度地高于对照组。结论乙醇能抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达,从而参与了乙醇致神经管畸形中细胞凋亡的调节。

电针对骶髓损伤后神经源性膀胱大鼠凋亡相关因子Bcl-2、Bax的影响

目的观察电针次髎、中极、三阴交穴对骶髓损伤后神经源性膀胱(逼尿肌无反射型)大鼠膀胱组织中B淋巴细胞蛋白-2(bcl-2)及Bcl相关X蛋白(bax)表达的影响,以探讨电针治疗该病的可能机制。方法将SD雌性大鼠40只,随机抽取10只为空白组,其余造模成功后随机分为模型组、电针穴位组和电针对照点组,每组10只。术后第15天起电针穴位组、电针对照点组分别施以每日1次治疗,治疗7次后取膀胱组织行Elisa法检测bcl-2及bax在膀胱组织中的表达。结果电针治疗后各组膀胱逼尿肌组织中,模型组、电针穴位组和电针对照点组bcl-2及bax表达均较空白组高(P<0.01),电针穴位组和电针对照点组bcl-2表达较模型组升高(P<0.01),bax表达较模型组降低(P<0.01),且电针穴位组疗效明显优于对照点组(P<0.01)。结论电针次髎、中极、三阴交穴可提高骶髓损伤后NB大鼠膀胱组织中bcl-2的表达、抑制bax的表达。电针对骶髓损伤后神经源性膀胱的治疗作用可能是通过促进bcl-2、抑制bax的表达以部分抑制膀胱平滑肌细胞凋亡,从而保护受损膀胱逼尿肌组织。

牦牛B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1的原核表达及体外活性

为研究牦牛(Bos grunniens) B细胞淋巴瘤2相关蛋白A1 (B cell lymphoma 2 related protein A1, BCL2A1)的原核表达及体外活性。采用原核表达载体构建、细胞划痕实验、CCK-8法、透射电镜和实时荧光定量PCR等方法。结果显示,成功构建pET-32a-BCL2A1重组质粒,表达获得约33 kDa的BCL2A1。终浓度为0.02μg/mL、0.2μg/mL、2.0μg/mL的BCL2A1均能使HepG2细胞活性显著降低(P <0.05),并在一定程度上抑制细胞的迁移。2.0μg/mL BCL2A1导致HepG2细胞核固缩,胞质中高密度物质聚集,溶酶体吞噬形成致密的凋亡小体等。此外,细胞凋亡相关基因CASP9的mRNA水平在2.0μg/mL组中显著上调(P <0.05),CASP8的mRNA水平在0.2μg/mL和2.0μg/mL组中显著上调(P <0.05),而CASP3和Cyt c的mRNA水平在3个浓度处理组均显著上调(P <0.05)。这提示BCL2A1可能通过凋亡途径影响HepG2细胞活性,为进一步探索牦牛BCL2A1基因功能积累资料。

宫颈癌组织中BAG3蛋白表达水平及意义

目的分析Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)在宫颈癌组织中的表达水平及意义。方法选取2016年10月至2018年10月该院收治的201例研究对象的宫颈组织标本为研究对象,其中宫颈癌组织标本70例(宫颈癌组)、低级别鳞状上皮内瘤变(LSIL)组织标本46例(LSIL组)、高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)组织标本50例(HSIL组)和宫颈正常组织标本35例(正常组)。采用免疫组织化学染色法检测所有标本组织中BAG3蛋白表达水平,分析不同临床病理特征宫颈癌患者BAG3蛋白表达差异,采用多因素Cox回归分析影响宫颈癌患者预后的因素。结果BAG3蛋白在宫颈癌组中的高表达率>HSIL组>LSIL组>正常组(P<0.05);低分化、淋巴结转移宫颈癌患者的BAG3蛋白高表达率分别高于高/中分化、无淋巴结转移患者(P<0.05);70例宫颈癌患者3年生存率为60.00%,K-M生存曲线显示BAG3高表达患者3年生存率低于BAG3低表达患者,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.821,P=0.023)。不同分化程度、有无淋巴结转移、不同BAG3蛋白表达水平的宫颈癌患者3年生存率差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox分析结果显示,低分化、有淋巴结转移、BAG3蛋白高表达均是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论BAG3蛋白在宫颈癌组织中呈高表达,其表达水平与宫颈癌分化程度、淋巴结转移有关,BAG3蛋白高表达是宫颈癌预后的危险因素,有望作为诊治宫颈癌的有效生物标志物。

中医干预心肌缺血再灌注大鼠疗效及PI3K-Akt/Bax/Bcl信号通路影响的Meta分析

目的系统评价中医干预大鼠心肌缺血再灌注模型的疗效及对PI3K-Akt/Bax/Bcl信号通路影响。方法计算机检索知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed、Cochrance Library、Embase数据库,从建库以来至2022年9月20日的数据。利用NoteExpress软件导入文献,按照纳入标准与排除标准筛选文献,提取并合并数据,使用动物实验风险偏倚SYRCLE工具进行质量评估,应用Stata 16软件进行Meta分析,在疗效方面分析9项结局指标,使用固定或随机效应模型合并统计量;在异质性方面分析纳入研究≥8篇的结局指标4项,使用敏感性或描述性分析;在敏感性与发表偏倚方面分析纳入研究≥10篇的结局指标3项,使用剪补法分析。结果纳入总研究30项,总样本量684只大鼠,在不同疗效指标方面:治疗组改善血清肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)(SMD=-2.45,95%CI[-3.46,-1.44],P<0.001)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)(SMD=-2.47,95%CI[-3.25,-1.68],P<0.001)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)(SMD=-3.24,95%CI[-4.28,-2.21],P<0.001)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)(SMD=1.75,95%CI[1.09,2.41],P<0.001)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)(SMD=-3.55,95%CI[-5.17,-1.93],P<0.001)、心肌组织蛋白磷酸化丝苏氨酰蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)(P-Akt)(SMD=5.53,95%CI[3.85,7.21],P<0.001)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)(SMD=11.85,95%CI[7.12,16.57],P<0.001)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)(SMD=3.7,95%CI[1.3,6.09],P<0.001),Bcl相关X蛋白(Bax)(SMD=-5.3,95%CI[-7.62,-2.98],P<0.001)、9项结局均优于对照组;在4项结局指标的异质性方面:2项结局指标剔除可信区间差距较大的研究后无异质性,2项结局指标采用描述性分析;在3项结局指标的敏感性与发表偏倚方面:结果显示Meta分析结论可靠,虽有发表偏倚但数据稳健。结论中医干预大鼠心肌缺血再灌注疗效显著,其机制可能是激活PI3K-Akt/Bax/Bcl信号通路,抑制再灌注后心肌细胞损伤凋亡。但此研究纳入研究数量有限,样本量及外文文献较少,还需更多高质量、大样本的基础研究论证。

异氟醚和七氟醚对新生大鼠皮质凋亡以及Akt和Bcl-xl/Bad表达的不同影响

【目的】研究相同麻醉深度的异氟醚和七氟醚对新生大鼠皮质神经细胞凋亡以及Akt和Bcl-xl/Bad蛋白表达的影响。【方法】5窝出生后7d(P7)的新生大鼠,每窝取11只(总共55只),每窝随机分为异氟醚组(I组)4只,七氟醚组(S组)4只和对照组(C组)3只。各组分别吸入1.1%异氟醚或1.8%七氟醚或空气4h,在麻醉结束时每窝每组各取一只幼鼠经心脏穿刺抽血检测血气和血糖的变化(n=5);在麻醉结束后2h每窝每组各取1只幼鼠灌注取脑,免疫组织化学法检测顶叶皮质区(PC)Caspase-3表达(n=5);另外,C组在麻醉处理0h,I组和S组分别在麻醉2h,4h每窝各取一只幼鼠取新鲜脑皮质,Westernblot检测磷酸化Akt,以及Akt,Bcl-xl和Bad表达的变化(n=5)。组间资料的比较采用单因素方差分析。【结果】I组Caspase-3阳性细胞数为(27.12±5.22)个/mm2,较对照组[(3.15±0.59)个/mm2]增加751.11%(P<0.001),比S组[(9.05±1.76)个/mm2]增加199.67%(P<0.01);S组Caspase-3表达与对照组比较差异无统计学意义。I组磷酸化Akt表达在麻醉2h较对照组降低66.31%(P<0.01),4h呈回升趋势;S组在2h和4h与对照组无统计学差异。I组Bad表达在麻醉2h较对照组增加162.2%(P<0.05),S组Bad表达在2h和4h与对照组差异均无统计学意义。I组和S组在2h和4hBcl-xl表达与对照组差异均无统计学意义。I组Bcl-xl/Bad比值在麻醉2h较对照组降低42.85%(P<0.01),S组在2h和4h与对照组无统计学差异。【结论】0.5MAC异氟醚比七氟醚诱导更多新生大鼠大脑皮质神经细胞凋亡,异氟醚抑制Akt磷酸化并降低Bad表达,下调Bcl-xl/Bad比值可能是其诱导神经细胞凋亡的机制之一;七氟醚不会影响Akt磷酸化和Bcl-xl/Bad比值。

脑缺血再灌注皮质Bax,Bcl-2和GFAP的表达及川芎嗪的干预作用

目的:探讨脑缺血再灌注(CIR)大鼠脑皮质Bax,Bcl-2和GFAP表达及川芎嗪的干预作用。方法:72只Wister大鼠随机分成假手术组,模型组,小剂量治疗组和大剂量治疗组。其中54只大鼠利用Bannister’s颈动脉血引流法复制CIR动物模型。治疗组分别向腹腔注射川芎嗪50mg/kg或100mg/kg。术后12,24,72h取脑组织,用免疫组织化学方法检测Bax,Bcl-2和GFAP(胶质纤维酸性蛋白)阳性细胞。结果:模型组Bax,Bcl-2和GFAP阳性细胞值明显高于假手术组和治疗组,Bax/Bcl-2大于1;治疗组Bax,GFAP阳性细胞数减少,Bcl-2增多,治疗大剂量组Bax/Bcl-2比值明显下降小于1。结论:川芎嗪能够下调CIR脑皮质Bax和GFAP表达和上调Bcl-2表达,说明川芎嗪通过干预基因表达发挥脑保护作用。

眩晕定颗粒对后循环缺血性眩晕家兔Bcl-2,Bax及BDNF表达的影响

目的探讨眩晕定颗粒对家兔气虚血瘀型后循环缺血性眩晕模型前庭神经核区Bax、Bcl-2及脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响。方法建立气虚血瘀型后循环缺血性眩晕家兔模型,以西比灵为西药对照,眩晕宁为中药对照,免疫组化法测定前庭神经核区Bax、Bcl-2和BDNF表达。结果造模后模型组家兔脑干前庭神经核Bcl-2及BDNF表达显著下降,Bax表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);药物干预后,与模型组比较,眩晕定颗粒使家兔脑干前庭神经核Bcl-2及BDNF表达上调,并可抑制Bax的表达。结论眩晕定颗粒治疗家兔实验性眩晕的作用与其促进脑组织Bcl-2、BDNF表达,抑制Bax表达有关。

低pH液复灌对兔心肌缺血再灌注的保护作用与Bcl-2、Bax表达的关系

目的探讨低pH液复灌对体外循环(extracorporeal circulation,ECC)下兔缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌的保护作用与Bcl-2、Bax表达的关系。方法成年新西兰大白兔30只,完全随机分为5组(n=6):对照组(C组)不停跳,体外循环180 min;缺血再灌注组(I/R组)全心缺血40 min,再灌注120 min;pH=7.4组与pH=6.9组于再灌注前2 min予37℃的95%O2+5%CO2饱和的pH值为7.4或6.9的K-H液灌注;缺血后处理组(P组)再灌注的前2 min给予缺血后处理。体外循环结束后,光镜观察心肌形态学变化;ELISA测定血清肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)浓度;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达;免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与I/R组比较,pH=6.9组和P组心肌组织损伤较轻,cTnI浓度较低(P<0.05),pH=6.9组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显增高[(1.058 1±0.165 7)vs(0.648 2±0.070 8),(0.233 1±0.022 5)vs(0.156 5±0.019 2),P<0.05],Bax mRNA和蛋白表达水平明显降低[(1.353 3±0.138 1)vs(1.901 7±0.198 1),(0.173 5±0.015 1)vs(0.247 1±0.021 3),P<0.05];pH=6.9组和P组之间Bcl-2、Bax表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外循环下再灌注初短暂低pH(pH=6.9)液复灌可以模拟缺血后处理的心肌保护作用,其保护机制与调节Bcl-2、Bax的表达有关。

组织芯片技术检测BAG3蛋白在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨Bcl相关抗凋亡蛋白3(又称BAG3蛋白)在结肠癌组织中的表达及其临床意义,阐明BAG3蛋白与结肠癌发生发展的关系。方法:选取90例结肠癌患者的结肠癌组织和癌旁组织,采用组织芯片技术和免疫组织化学SP法检测组织中BAG3蛋白的表达,Kaplan-Meier、单因素和多因素生存分析法分析结肠癌患者临床病理参数与预后的关系。结果:BAG3蛋白在结肠癌组织中呈高表达,90例结肠癌组织中BAG3蛋白阳性表达率为37.8%,癌旁组织中BAG3蛋白阳性表达率为0.01%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。BAG3蛋白表达与患者性别和肿瘤大小有关联(P<0.05),与患者年龄、病理分级、TNM分期和有无淋巴结转移无关联(P>0.05)。Kaplan-Meier分析,BAG3在结肠癌组织中的表达与患者预后无关联,年龄较小的患者生存率较高,TNM分期低的患者生存率较高。结论:BAG3蛋白在结肠癌组织中呈高表达,蛋白表达与肿瘤大小有关联;BAG3蛋白可能作为结肠癌的肿瘤标志物或治疗靶点。

miR⁃21、ILK及Bax蛋白在CIN中的表达及临床意义

目的探究微小RNA⁃21(miR⁃21)、整合素连接激酶(ILK)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)在宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达及临床意义。方法将2020年1月至2022年10月苏州科技城医院收诊并治疗的63例宫颈上皮内瘤变(CIN组)纳入研究,选择同期84名健康志愿者(对照组)共同参与本次研究,对比两组miR⁃21、ILK及bax蛋白的表达,分析宫颈组织中miR⁃21、ILK及Bax蛋白阳性表达与病理特征的关系。结果CIN组miR⁃21相对量高于对照组,差异有统计学意义(t=16.906,P<0.05);CIN组Bax蛋白阳性率低于对照组,差异有统计学意义(x^(2)=70.948,P<0.05);CIN组ILK阳性率高于对照组,差异有统计学意义(x^(2)=109.485,P<0.05);不同年龄阶段、不同组织类型的miR⁃21、Bax蛋白、ILK阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05);而CIN分级越高,宫颈组织中ILK阳性率高,Bax阳性率越低,miR⁃21相对量越多,差异均有统计学意义(x^(2)=0.005,x^(2)=0.001,t=0.027,P<0.05)。结论miR⁃21、ILK、Bax蛋白均在CIN患者中异常表达,与病变细胞的凋亡密切关联。

JAK/STAT通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤(I/R)中的作用。方法将36只SD大鼠随机分为对照组I、/R组、Ag490(JAK2激酶抑制剂)组(n=12)。I/R组和Ag490组大鼠夹闭双侧肾动脉60min,恢复再灌注24h,对照组大鼠除不钳夹双侧肾蒂外,余步骤与I/R组、Ag490组相同。Ag490组大鼠术前1h以8mg/kg Ag490灌胃,对照组和I/R组给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察肾组织的病理改变,免疫组化方法检测肾组织中STAT 3、Bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果组织学检查发现对照组肾小管排列整齐,间质无充血水肿;I/R组可见部分肾小管上皮细胞肿胀,空泡变性,肾小管扩张,可见管型和坏死脱落细胞,间质充血水肿,大量炎细胞浸润;Ag490组组织损伤较I/R组加重。免疫组化结果显示,I/R组STAT 3、Bcl-2蛋白表达较对照组明显增多,细胞凋亡增加(P<0.05);Ag490组STAT 3、Bcl-2的蛋白水平较I/R组明显降低,细胞凋亡加重(P<0.05)。结论 I/R可通过JAK2途径诱导STAT 3激活,上调Bcl-2蛋白表达;阻断JAK2激活可抑制STAT 3表达,下调Bcl-2蛋白表达,加重细胞凋亡。

血清Omentin-1、Bax和RBP4在非创伤性股骨头坏死病情评估及诊断中的价值

目的探讨血清网膜素(Omentin-1)、Bcl2-相关X蛋白(Bax)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)在非创伤性股骨头坏死(NTONFH)病情评估及诊断中的价值。方法采用回顾性研究方法,选取2020年2月至2022年12月徐州医科大学附属医院经影像学检查确诊为NTONFH的患者100例作为病例组,另外选取100名健康体检志愿者作为对照组。检测对比两组患者血清Omentin-1、Bax和RBP4水平。并按照是否存在股骨头塌陷、国际骨循环研究会(ARCO)分期标准、患侧分布进行分层分析NTONFH患者血清Omentin-1、Bax和RBP4水平,确定其与患者病情的关系。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Omentin-1、Bax和RBP4诊断NTONFH的价值。结果病例组患者的血清Bax水平显著高于对照组,血清Omentin-1、RBP4水平均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。股骨头塌陷患者的血清Bax水平显著高于非股骨头塌陷患者,Omentin-1、RBP4水平均显著低于非股骨头塌陷患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。ARCOⅡ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的血清Bax水平逐渐升高,ARCOⅡ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者的血清Omentin-1、RBP4水平逐渐降低,组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。双侧股骨头坏死患者血清Bax水平显著高于单侧患者,血清Omentin-1、RBP4水平均显著低于单侧患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Omentin-1诊断股骨头坏死的敏感度为84.66%,特异度为77.20%,曲线下面积(AUC)值为0.872;Bax诊断股骨头坏死的敏感度为90.17%,特异度为83.75%,AUC值为0.780;RBP4诊断股骨头坏死的敏感度为70.57%,特异度为74.95%,AUC值为0.917。结论NTONFH患者Bax水平显著升高,Omentin-1、RBP4水平均显著降低,并且与患者股骨头塌陷与否、患侧分布、ARCO分期有关,在患者病情评估中具有重要参考价值。另外,Omentin-1、Bax、RBP4对NTONFH均有较好的诊断价值。

右旋美托咪啶通过Akt/Bad通路抑制异氟醚引起的新生大鼠海马细胞凋亡

目的研究右旋美托咪啶(dexmedetomidine,Dex)对异氟醚所致新生大鼠海马细胞凋亡的保护作用及与Akt/Bad信号通路的关系。方法出生7 d SD大鼠随机分为空气组(Air+NS)、二甲基亚砜组(Air+DMSO)、LY294002组(Air+LY)、异氟醚组(Iso+NS)、异氟醚+Dex组(Iso+Dex)、异氟醚+Dex+LY294002组(Iso+Dex+LY)。前3组吸入空气6h,后3组吸入体积分数为0.0075异氟醚6h。吸入异氟醚前40min,Air+DMSO组、Air+LY组和Iso+Dex+LY组分别经侧脑室注射5μl体积分数为0.1的DMSO或25μg LY294002;Iso+Dex组和Iso+Dex+LY组分别在麻醉0、2、4 h腹腔内注射Dex 25μg·kg-1;Air+NS组和Iso+NS组在同时间点腹腔内注射等体积生理盐水。Western blot法检测海马激活型caspase-3、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、Bad、磷酸化Bad(p-Bad)、Bcl-xl蛋白表达变化(n=5),TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡(n=5)。结果 Dex可明显减少异氟醚引起的海马CA1区TUNEL阳性细胞表达(P<0.01),减低激活型caspase-3(P<0.01)和Bad蛋白表达(P<0.01),上调p-Akt/Akt、p-Bad/Bad和Bcl-xl/Bad比值(P<0.01)。LY294002逆转了Dex对上述蛋白表达的影响。结论Dex通过激活Akt/Bad信号通路减少异氟醚诱导的新生大鼠海马细胞凋亡。

长程服用苯巴比妥和托吡酯对幼鼠脑组织中Bcl-2和Bax蛋白的影响

目的探讨长程服用苯巴比妥(PB)和托吡酯(TPM)对幼鼠脑组织中Bcl-2和Bax蛋白的影响。方法将60只日龄18 d的健康SD幼鼠随机分为正常对照组、PB组、TPM组,各20只。根据给药时程又将每个给药组分为2周短程及4周长程给药组,共6组,各10只。PB组给予PB 30 mg·kg-1·d-1灌胃,TPM组给予TPM 40 mg·kg-1·d-1灌胃,正常对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。3组分别于2周、4周时测幼鼠体质量后采血并处死,称取脑质量,脑组织石蜡包埋,切片,进行苏木素-伊红染色及尼氏染色,光镜下观察脑组织形态变化。用免疫组化方法检测各组大鼠脑切片海马及额叶皮质凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果短程PB给药组和短程TPM给药组体质量、脑质量及脑组织结构变化与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。长程PB给药组幼鼠脑质量较正常对照组明显减轻(P<0.01),额叶皮质神经元减少,且神经元结构明显异常。长程TPM给药组体质量、脑质量及脑组织结构变化与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。长程PB给药组幼鼠脑组织额叶皮质Bax蛋白表达水平高于正常对照组(P<0.01),Bax/Bcl-2比值高于正常对照组(P<0.05)。长程TPM给药组幼鼠脑组织Bax蛋白水平及Bax/Bcl-2比值与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论长程服用PB可引起发育中脑组织明显的组织学损伤及神经元坏死与过度凋亡,幼鼠脑组织额叶皮质Bax蛋白表达显著增强和Bax/Bcl-2比值增高可能是未成熟鼠脑质量减轻和引起脑功能障碍重要原因。长程服用TPM后幼鼠脑组织结构无明显变化。

黄芪多糖联合顺铂对人肺癌A549细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的观察黄芪多糖与顺铂对人肺癌A549细胞增殖、细胞周期、诱导凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法采用四甲基偶氮唑盐法检测黄芪多糖、顺铂及两药联合对细胞增殖的影响;用流式细胞仪分析对细胞周期及凋亡率的影响;用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting法检测对人肺癌A549细胞B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)基因表达水平的影响。结果黄芪多糖、顺铂及两药联合对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用呈时间-浓度依赖关系;与阴性对照组比较,黄芪多糖作用后可出现G1期细胞阻滞,顺铂作用后出现S期细胞阻滞,两药联合出现G1、S期细胞阻滞,差异均有统计学意义(P<0.01)。两药联合较阴性对照组及单用黄芪多糖、顺铂明显上调Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达,下调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论黄芪多糖可协同顺铂增强对人肺癌A549细胞的促凋亡作用,其作用机制与上调Bax、Caspase-3的表达、下调Bcl-2的表达有关。

微小RNA⁃204⁃3p通过靶向调控Krüppel样因子6对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨微小RNA⁃204⁃3p(miR⁃204⁃3p)对高糖诱导小鼠足细胞MPC5损伤的保护作用及其分子机制。方法采用高糖(30 mmol/L D⁃葡萄糖)处理MPC5细胞。实时定量PCR(qPCR)检测细胞中miR⁃204⁃3p与锌指蛋白Krüppel样因子6(KLF6)mRNA水平。MPC5细胞分为NG组(正常对照),HG组(高糖刺激),HG+miR⁃204⁃3p组、HG+miR⁃NC组、HG+si⁃KLF6组、HG+si⁃NC组,HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA⁃KLF6组和HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA组。蛋白质印迹法(Western Blot)检测肌动蛋白微丝偶联蛋白(synaptopodin)、结蛋白(desmin)、B细胞淋巴瘤/白血病⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)与活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved⁃caspase⁃3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,生物学信息预测和双荧光素酶报告基因分析miR⁃204⁃3p和KLF6的靶向关系。结果与正常对照相比,高糖可显著降低MPC5细胞中miR⁃204⁃3p表达量[(0.41±0.04)比(1.02±0.08)],上调KLF6 mRNA[(2.86±0.27)比(1.03±0.08)]和蛋白[(0.89±0.08)比(0.46±0.04)]水平,还可上调KLF6、desmin[(0.81±0.07)比(0.34±0.03)]、Bax、cleaved⁃caspase⁃3蛋白表达及细胞凋亡率[(22.46±2.08)%比(5.26±0.64)%],下调synaptopodin蛋白[(0.34±0.03)比(0.76±0.07)]及Bcl⁃2蛋白表达量(P<0.05)。与HG+miR⁃NC组比较,HG+miR⁃204⁃3p组明显提高synaptopodin[(0.67±0.06)比(0.32±0.03)]及Bcl⁃2蛋白水平,降低desmin[(0.41±0.04)比(0.83±0.08)]、Bax、cleaved⁃caspase⁃3蛋白水平及细胞凋亡率[(11.25±1.65)%比(24.58±2.47)%](P<0.05)。与HG+si⁃NC组比较,HG+si⁃KLF6组明显提高synaptopodin[(0.62±0.06)比(0.28±0.03)]及Bcl⁃2蛋白水平,降低desmin[(0.49±0.05)比(0.86±0.08)]、Bax蛋白水平及细胞凋亡率[(14.69±1.87)%比(25.47±2.68)%](P<0.05)。miR⁃204⁃3p直接靶向KLF6。与HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA组比较,HG+miR⁃204⁃3p+pcDNA⁃KLF6组显著增加高糖刺激小鼠肾脏足MPC5细胞中KLF6、desmin[(0.68±0.06)比(0.36±0.04)]、Bax蛋白表达量和细胞凋亡率[(18.41±1.67)%比(11.05±1.02)%],显著减少synaptopodin蛋白[(0.38±0.03)比(0.69±0.07)]和Bcl⁃2蛋白表达量(P<0.05)。结论miR⁃204⁃3p通过直接靶向KLF6抑制高糖刺激的足细胞凋亡,保护细胞损伤。

奥曲肽对大鼠急性胰腺炎腺泡死亡方式的影响

目的探讨奥曲肽对急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)腺泡细胞死亡方式的影响。方法使用奥曲肽对急性胰腺炎大鼠模型进行治疗,采用原位TUNEL及RT-PCR等技术,观察各组胰腺组织内Bax mRNA变化及胰腺腺泡细胞凋亡情况、胰腺病理学改变及组织学评分变化情况。结果大鼠胰腺细胞凋亡指数与胰腺组织病理学评分呈负相关;奥曲肽可使AP模型的胰腺组织内Bax mRNA表达增加,诱导胰腺腺泡细胞凋亡增加,使胰腺病理学改变及组织学评分改善。结论奥曲肽可能诱导AP腺泡细胞的凋亡,减轻胰腺炎的严重程度。