Bcl-2相关的永生基因4对胃癌干细胞自我更新能力的调控作用

目的:探讨Bcl-2相关的永生基因4(Bcl-2 associated athanogene 4,BAG4)在胃癌干细胞(gastric cancer stem cells,GCSCs)自我更新能力中的调控作用。方法:采用成球培养法分离/富集GCSCs,并对其生物学特征进行鉴定。采用慢病毒干扰技术构建沉默BAG4表达的MGC803胃癌细胞系,以平板克隆形成和成球实验分别检测沉默BAG4对胃癌细胞克隆形成和成球能力的影响。结果:成球培养法成功分离/富集出球细胞(sphere cell,SC)。与普通单层贴壁细胞相比,MGC803-SC高表达干性相关基因Sox2、Oct4和Bmi1,具有更强的克隆形成能力(198±17 vs.92±11,P<0.001),诱导分化后干性标志物CD44表达下降,在体外具有更强的侵袭能力(185±18 vs.84±11,P<0.01)。上述实验结果证实MGC803-SC具有GCSCs特性。BAG4在GCSCs中的表达水平明显高于普通贴壁胃癌细胞,沉默BAG4明显降低胃癌细胞的克隆形成和成球能力。结论:沉默BAG4基因能有效抑制GCSCs的自我更新能力,有望成为胃癌靶向治疗的新靶标。

miR-125a-5p通过下调BAG4表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-125a-5p通过调控Bcl-2相关永生基因4(Bcl-2-associated athanogene 4,BAG4)的表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:选用2014年1月至2015年12月兰州大学第一医院手术切除的82例胃癌组织标本及配对的癌旁组织以及人胃癌细胞系MGC803、BGC823、SGC7901、HGC27及人胃黏膜上皮细胞(GES-1),qPCR法检测胃癌组织、癌旁组织及胃癌细胞系中miR-125a-5p的表达水平。分别将miR-125a-5p mimic、miR-125a-5p inhibitor、(si-BAG4)siRNA-BAG4及阴性对照质粒转染至胃癌细胞,划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测miR-125a-5p/BAG4信号轴对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。WB检测胃癌细胞中BAG4蛋白的表达。荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p和BAG4之间的靶向调控关系。结果:miR-125a-5p在胃癌组织和细胞系中均低表达(均P<0.01)。miR-125a-5p的表达与患者的性别(P=0.953)、年龄(P=0.772)、肿瘤部位(P=0.867)、组织学分级(P=0.745)和肿瘤大小(P=0.088)无相关性,与胃癌患者的T分期(P=0.003)、N分期(P=0.001)、M分期(P=0.027)和TNM分期(P=0.035)显著相关,差异有统计学意义。miR-125a-5p低表达是胃癌患者总生存时间的独立危险因素。过表达miR-125a-5p显著抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01)。敲降BAG4可逆转miR-125a-5p inhibitor对胃癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。荧光素酶报告基因实验证实miR-125a-5p可与BAG4 3'非翻译区(untranslated regions,UTR)结合抑制其表达。结论:miR-125a-5p通过靶向下调BAG4的表达水平进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。

microRNA-9的表达及其负性调控BAG4对胃癌细胞增殖与侵袭的影响

背景与目的:研究显示,microRNA-9(miR-9)在多种恶性肿瘤中表达下调,但其在胃癌中的表达情况及功能尚有待明确。笔者前期通过生物信息学方法预测Bcl-2相关永生基因4(BAG4)可能是miR-9的靶基因,并且发现BAG4在胃癌组织中呈高表达。因此,本研究探讨miR-9在胃癌中的表达与功能,及其与BAG4的关系。方法:采用qRT-PCR法检测胃癌组织与癌旁组织,以及胃癌细胞系与正常胃黏膜细胞中miR-9的表达水平。分别用miR-9模拟物和miR-9抑制物过表达和敲低胃癌细胞的miR-9后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。荧光素酶报告基因实验分析miR-9和BAG4的靶向关系,并用qRT-PCR法和Western blot检测转染miR-9模拟物和si-BAG4的胃癌细胞中BAG4的表达,以及相关功能实验加以验证。结果:miR-9在胃癌组织(vs.癌旁组织)和胃癌细胞系(vs.正常胃黏膜细胞)中的表达均明显降低(均P<0.05)。miR-9的表达与胃癌患者的肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期明显有关(均P<0.05)。miR-9高表达胃癌患者的总生存率明显高于miR-9低表达胃癌患者(P=0.028)。胃癌细胞过表达miR-9后,增殖和侵袭能力明显减弱,而敲低miR-9后,增殖和侵袭能力明显增强(均P<0.05)。荧光素酶报告基因实验显示BAG4是miR-9下游的靶基因。转染miR-9模拟物或si-BAG4的胃癌细胞中BAG4的mRNA与蛋白表达均明显降低,而转染miR-9抑制物胃癌细胞中BAG4的mRNA与蛋白表达均明显降低(均P<0.05)。转染si-BAG4的胃癌细胞的增殖与侵袭能力明显降低,同时转染miR-9抑制物可逆转si-BAG4对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响(均P<0.05)。结论:miR-9在胃癌中表达降低,且其表达与胃癌的不良生物学特征密切相关,其作用机制可能通过负性调控BAG4的表达,从而影响胃癌细胞的增殖和侵袭。