黄芪多糖调控Bcl-2/Bax信号通路抑制卵巢腺癌Caov-3细胞生长的实验研究

目的研究黄芪多糖调控Bcl-2/Bax信号通路对卵巢腺癌Caov-3细胞生长的影响。方法将黄芪多糖分为低、中、高剂量组,分别加入10、50、100 mg/mL黄芪多糖,流式细胞术检测10、50、100 mg/mL黄芪多糖作用Caov-3细胞后对细胞周期的影响,显微镜下观察Caov-3细胞凋亡情况和形态变化,Western blot法检测3组药物作用Caov-3细胞后对Bcl-2、Bax蛋白表达水平及对Bcl/Bax的影响;同时,比较阿司匹林联合黄芪多糖与单用黄芪多糖对Caov-3细胞的抑制率。结果黄芪多糖低、中、高剂量组对Caov-3细胞的抑制率分别为40%、50%、65%,黄芪多糖的IC_(50)为50 mg/mL,与对照组比较,黄芪多糖高剂量组对Caov-3细胞的抑制效果最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05);黄芪多糖联合阿司匹林的抑制效果优于单纯使用黄芪多糖(P<0.05)。与对照组比较,黄芪多糖高剂量组对Caov-3细胞周期的影响更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,黄芪多糖高剂量组Caov-3细胞凋亡的数目显著增加,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2/Bax降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪多糖能有效抑制Caov-3细胞的生长,联合阿司匹林效果更好。其机制可能与黄芪多糖调控Bcl-2/Bax信号通路,促进细胞凋亡有关。

小檗碱在调控Bcl-2/Bax信号通路诱导细胞凋亡应用效果与研究进展

小檗碱主要是从黄连根茎中提取的天然活性成分,与多个细胞内靶标相互作用,具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种广泛的药理活性。细胞凋亡作为一种重要的细胞死亡方式,在生物体的发育、免疫系统的调节、肿瘤抑制以及组织修复等方面扮演着重要的角色。既往研究初步证实,小檗碱能够通过调控细胞凋亡起到治疗神经系统、心血管系统、消化系统以及免疫系统等相关疾病的作用,主要体现在其影响细胞凋亡相关蛋白表达及信号通路的转导上,尤其是Bcl-2/Bax信号通路。Bcl-2/Bax作为细胞凋亡通路中的重要调节者,在神经、心血管、消化以及免疫系统疾病的发生和发展中发挥重要作用,然而,小檗碱在这些疾病中如何调控细胞凋亡的机制仍有待进一步研究。相关研究证实小檗碱在阿尔茨海默病、帕金森、亨廷顿病等疾病中可调控Bcl-2/Bax信号通路诱导的细胞凋亡起到神经系统保护作用;其在阿霉素或缺氧诱导心脏损伤、心肌缺血/再灌注损伤、以及心肌梗死后心力衰竭等疾病中可调控Bcl-2/Bax信号通路诱导的细胞凋亡发挥对心血管系统的保护作用;其在幽门螺杆菌诱导胃损伤、慢性萎缩性胃炎、脓毒症并发肠损伤以及放射性肠炎等疾病中均可调控Bcl-2/Bax信号通路诱导的细胞凋亡发挥对胃肠道系统的保护作用;其在类风湿关节炎、结直肠癌、宫颈癌以及三阴性乳腺癌等疾病中均可调控Bcl-2/Bax信号通路诱导的细胞凋亡,发挥对免疫系统的保护作用。文章从Bcl-2/Bax信号通路角度对小檗碱介导细胞凋亡的作用机理进行系统综述,以期为小檗碱在疾病临床治疗中的应用提供科学依据。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

活血明目方对体外加压培养大鼠RGCs NF-κB信号通路凋亡相关因子Bax及Bcl-2的影响

目的观察活血明目方对体外加压大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中凋亡相关因子Bax和Bcl-2表达的干预作用。方法将SD大鼠随机分为4组,每组3只大鼠,采取体外加压培养SD大鼠凋亡模型,制备活血明目方含药肠吸收液,观察活血明目方对体外加压RGCs在NF-κB信号通路作用下对Bax、Bcl-2表达的影响。结果Q-PCR和Western blot检测发现,与模型组相比,含药肠吸收液组中Bax相对表达量显著下降(P<0.05),而Bcl-2相对表达量则显著上升(P<0.01)。结论活血明目方含药肠吸收液对RGCs凋亡具有一定的抑制作用。

从NF-κB/Bcl-2信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡角度探讨中医药抑制类风湿关节炎滑膜炎症机制的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为主要特征的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)的抗凋亡是导致该病病情发展的主要因素。如何促进FLS凋亡并抑制炎症反应是目前RA治疗和研究的重点。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)/B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)信号通路在RA发病过程中发挥了关键作用,其与FLS炎症倾向、抗凋亡等密切相关。研究并探讨NF-κB/Bcl-2信号通路调控FLS凋亡的机制及作用,介绍中医药靶向该通路促进FLS凋亡进而抑制RA滑膜炎症的研究现状,旨在为中医药治疗RA的研究提供一定基础。

橙皮苷调控Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡

【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H_(2)O_(2)处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg/mL橙皮苷处理24 h,然后采用CCK-8法测定奶牛乳腺上皮细胞活性,通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,利用实时荧光定量PCR检测奶牛乳腺上皮细胞的Bcl-2、Bax和Caspase3基因表达水平,并以Western blotting检测Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白的表达变化。【结果】与空白对照组(CK)相比,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著下降(P<0.01,下同),发生凋亡的细胞比例极显著升高,且DNA片段呈梯状条带;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P<0.05,下同),且细胞凋亡程度低,发生凋亡的细胞数目较少。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著上升,细胞凋亡比例极显著降低,且DNA片段的梯状条带减少。在Bax、Bcl-2和Caspase3基因及其蛋白表达方面,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞中的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著或极显著高于CK组,而Bcl-2基因及其蛋白表达水平较低;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著低或极显著于CK组,Bcl-2基因及其蛋白表达水平则均高于CK组;与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达极显著下调,而Bcl-2基因及其蛋白表达极显著上调。【结论】橙皮苷通过Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡,有效提高细胞活性,故推测橙皮苷对促进乳腺器官发育和维持泌乳能力具有良好的正向效应。

葛菊护肝片调节NF-κB和Bcl-2/Bax信号通路改善酒精所致的小鼠肝脏损伤

目的:探究葛菊护肝片对酒精性肝损伤小鼠肝脏的保护作用,并基于核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白/Bcl-2相关X蛋白(Bax)信号通路探讨其作用机制。方法:SPF级雄性ICR小鼠60只,按体质量随机分为正常组、模型组、复方益肝灵片组、葛菊护肝片低、中、高剂量组。葛菊护肝片低、中、高剂量组分别灌胃0.2、0.4、0.8 g·kg^(-1)葛菊护肝片;复方益肝灵片组灌胃剂量0.16 g·kg^(-1)的复方益肝灵片,连续28 d,每天给药1次;正常组及模型组灌胃等体积纯水。第29天除正常组外,其余各组小鼠灌胃53°白酒,灌胃2次,灌胃间隔6 h;第30天取材。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变;透射电镜观察肝细胞超微结构改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肝组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织NF-κB p65、磷酸化核因子抑制蛋白α(p-IκBα)、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血清ALT、AST含量显著升高(P<0.01),肝组织MDA、TG含量显著升高(P<0.01),GSH含量显著下降(P<0.01),肝脏HE染色、油红O和电镜肝损伤评分显著升高(P<0.01);肝组织NF-κB、p-IκBα、Bax蛋白表达量均明显升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达量明显降低(P<0.05)。与模型组比较,葛菊护肝片低、中、高剂量组血清ALT、AST含量显著下降,肝组织MDA、TG含量显著下降,GSH含量显著增加(P<0.01);葛菊护肝片中、高剂量组HE和电镜评分显著降低(P<0.01);葛菊护肝片中、高剂量组小鼠肝组织NF-κB、p-IκBα、Bax蛋白表达量显著降低(P<0.01),葛菊护肝片低、中、高剂量组Bcl-2蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论:葛菊护肝片对ALD小鼠肝脏有一定的保护作用,其机制可能是通过下调NF-κB信号通路减轻肝组织炎症,下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达抑制肝细胞凋亡实现的。

基于caspase-3/bcl-2/bax信号通路的槐定碱诱导胰腺癌细胞株capan-1凋亡机制研究

目的探讨槐定碱对人胰腺癌细胞株capan-1作用及机制。方法 MTT法检测细胞增殖;Hoechst33342染色法观察细胞凋亡;流式检测细胞凋亡和细胞周期百分率;Western blot法检测caspase-3/bcl-2/bax表达。结果槐定碱可以成浓度依赖性诱导capan-1细胞增殖抑制和凋亡,增加S/G2期细胞比例,下调bcl-2和pro-caspase-3表达水平,上调bax蛋白的表达。结论槐定碱能通过调节caspase-3/bcl-2/bax信号通路而诱导细胞凋亡。

基于Bcl-2/Bax信号通路探讨湿生扁蕾乙酸乙酯提取物治疗溃疡性结肠炎作用机制

目目的的:探讨藏族医药湿生扁蕾乙酸乙酯提取物通过B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)介导的凋亡通路防治复发型大鼠大肠湿热型溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用“病证结合”法构建复发型大鼠大肠湿热UC模型,将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、湿生扁蕾乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组(150、75、37.5 mg·kg^(-1))及美沙拉嗪组(135 mg·kg^(-1)),连续灌胃给药14 d,记录大鼠一般状态,观察大鼠结肠长度及肠黏膜损伤情况,测定结肠湿质量指数,计算肝脏、脾脏、胸腺脏器系数。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠病理变化,原位末端标记法(TUNEL)检测结肠上皮细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白3(Claudin3)、闭合蛋白(Occludin)的表达,免疫组化法(IHC)观察结肠上皮细胞中Bax、Caspase-3的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)、肠上皮凋亡、肝脏、脾脏指数及血清中炎症因子IL-1β和IL-6水平均显著升高(P<0.01),肠黏膜保护蛋白ZO-1、Claudin3、Occludin表达显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9表达显著升高(P<0.01),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,湿生扁蕾乙酸乙酯提取物高、中、低剂量均能够显著改善大鼠的一般状态,减轻结肠病变,降低肠上皮细胞凋亡、肝脏、脾脏指数,上调ZO-1、Claudin3、Occludin及Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,以湿生扁蕾高、中剂量效果明显(P<0.05,P<0.01)。结论:湿生扁蕾乙酸乙酯提取物能够通过调节Bcl-2/Bax信号通路,减轻肠黏膜损伤,发挥治疗UC作用。

黄芪甲苷通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

目的观察黄芪甲苷(Astragaloside-IV,AS)抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导凋亡作用,并探讨其Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路作用机制。方法将MCF-7细胞分为空白对照组(AS,0μmol·L-1)和黄芪甲苷50、25、12.5μmol·L-1浓度组。采用CCK-8和台盼蓝计数法检测黄芪甲苷对MCF-7细胞增殖和生长曲线的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法观察黄芪甲苷对MCF-7细胞凋亡形态学的影响;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot法分析黄芪甲苷对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,黄芪甲苷25、50μmol·L-1组MCF-7细胞增殖明显被抑制(P<0.01),生长曲线(2~7 d)显著减缓(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡明显增多;RT-PCR和Western Blot试验结果发现黄芪甲苷25、50μmol·L-1组MCF-7细胞Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论黄芪甲苷可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路有关。

肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Bcl-2/Bax、Fas/FasL信号通路的影响

目的:观察Bcl-2/Bax、Fas/Fas L介导的信号转导通路在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用及肾气丸对其的影响。方法:采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,同时以肾气丸进行干预12周。HE染色观察大鼠肝组织病理组织学变化,免疫组织化学检测肝组织中Fas、Fas L、Bcl-2、Bax、Caspase-8蛋白的表达;Realtime-PCR法检测肝组织Caspase-8 mRNA表达。结果:模型组大鼠肝组织Bcl-2、Bax、Fas、Fas L蛋白以及Caspase-8 mRNA和蛋白表达均较正常组显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值较正常组明显的降低(P<0.05);大鼠肝组织Caspase-8蛋白表达与Fas、Fas L蛋白表达均呈明显正相关(r分别为0.907、0.804,P均<0.01);予以肾气丸干预后,Bax、Fas、Fas L蛋白的表达以及Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均较模型组明显的降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较模型组明显的增加(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾气丸可能通过影响Bcl-2/Bax、Fas/Fas L信号转导通路,下调Bax、Fas、Fas L、Caspase-8表达,减少肝细胞的脂性凋亡,从而防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生发展。

制冰片介导Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路改善心肌细胞H/R损伤

目的研究天竺黄制冰片对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及潜在作用机制。方法通过给予H9C2心肌细胞不同的缺氧时间体外模拟缺血再灌注损伤,测定损伤后H9C2心肌细胞中超氧化物歧化酶(superioxide diamutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)水平,评估模型是否成功建立。MTT方法测定天竺黄、冰片及制冰片对H9C2细胞的安全浓度范围,并检测天竺黄、冰片及制冰片对H/R诱导后心肌细胞中MDA、SOD和LDH生成的影响。采用Real-time PCR和Western blot方法检测天竺黄制冰片对H/R诱导H9C2细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3基因和蛋白的表达。结果缺氧6 h,复氧4 h,心肌细胞存活率小于50%,细胞中MDA和LDH水平显著增加,SOD活性显著降低,成功模拟缺血再灌注模型。天竺黄、冰片及制冰片在12.5~100μg/mL浓度范围内,对心肌细胞活力均没有影响。天竺黄(6.25~100μg/mL)对H/R诱导的H9C2细胞活力没有显著影响;冰片(25~100μg/mL)显著增加H/R诱导的H9C2细胞活力(P<0.05),制冰片(25~100μg/mL)极显著增加了H/R诱导的H9C2细胞活力(P<0.01)。同时,与模型组相比,冰片和制冰片分别给药均降低了H/R诱导的心肌细胞中MDA和LDH的水平,提高了SOD的活性,且同浓度制冰片调节作用优于冰片。同时,天竺黄制冰片通过上调了Bcl-2基因和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3基因和蛋白表达,发挥抑制细胞凋亡的作用。结论天竺黄制冰片可通过调控Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路阻碍心肌细胞凋亡,进而达到保护心肌的作用。

姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/AKT信号通路、Bcl-2、BAX的影响

目的:探究姜黄素对脑缺血大鼠脑组织PI3K/Akt信号转导通路的影响及作用机制。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素A组和姜黄素B组,每组18只。其中模型组、姜黄素A、B组慢性脑缺血大鼠模型制备采用将大鼠两侧颈动脉结扎的方法,假手术组和模型组大鼠分别给予等剂量生理盐水。采用免疫组化法检测大鼠PI3K、AKT、Bcl-2、BAX蛋白表达情况,采用干湿重法检测脑组织水含量,采用甲酰胺法检测血脑屏障通透性。结果:与模型组比较,姜黄素组大鼠PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均明显增高(P<0.05,P<0.01,P<0.05),脑组织含水量、BAX表达及伊文思蓝含量显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),差异均具有统计学意义。结论:姜黄素对缺血性脑损伤的保护机制可能是其穿透血脑屏障后激活了PI3K/AKT信号通路,介导Bcl-2蛋白表达增加以及BAX蛋白表达降低,进而调节二者平衡。

黄夏白冬消癌汤对Lewis肺癌小鼠Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的观察黄夏白冬消癌汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响。方法选取40只雄性C57BL/6小鼠,于小鼠右侧腋窝皮下注射Lewis肺癌细胞悬液建立肺癌模型。将造模成功的Lewis肺癌小鼠随机分为4组,每组10只。模型组给予生理盐水灌胃(1次/d),顺铂组给予顺铂2 mg/kg腹腔注射(每2 d 1次),黄夏白冬消癌汤低、高剂量组分别给予2 g/mL和4 g/mL黄夏白冬消癌汤灌胃(1次/d),均连续干预14 d。测量各组干预2,4,6,8,10,12,14 d后肿瘤长径与短径,计算肿瘤体积;干预结束后脱颈椎处死小鼠,称瘤重,计算抑瘤率;取各组小鼠瘤组织,采用Western blot法检测瘤组织中NF-κBp65、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleved-Caspase-3蛋白表达情况,采用qPCR法检测瘤组织中NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA相对表达量。结果黄夏白冬消癌汤低剂量组干预6~14 d期间各时间点肿瘤体积及干预结束后瘤重与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);顺铂组及黄夏白冬消癌汤高剂量组肿瘤生长延缓,各时间点肿瘤体积及干预结束后瘤重均明显低于模型组(P均<0.05),抑瘤率均明显高于黄夏白冬消癌汤低剂量组(P均<0.05),顺铂组与黄夏白冬消癌汤高剂量组各时间点肿瘤体积、干预结束后瘤重、抑瘤率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。顺铂组及黄夏白冬消癌汤低、高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65及NF-κB p65、Bcl-2 mRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),Cleved-Caspase-3/Caspase-3均明显高于模型组(P均<0.05);顺铂组及黄夏白冬消癌汤高剂量组Bax/Bcl-2及Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),黄夏白冬消癌汤低剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);黄夏白冬消癌汤低、高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65及Bcl-2 mRNA相对表达量均明显高于顺铂组(P均<0.05),Cleved-Caspase-3/Caspase-3及Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显低于顺铂组(P均<0.05),NF-κB p65 mRNA相对表达量与顺铂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);黄夏白冬消癌汤高剂量组Bax/Bcl-2与顺铂组比较差异无统计学意义(P>0.05),黄夏白冬消癌汤低剂量组明显低于顺铂组(P<0.05)。结论黄夏白冬消癌汤可以通过上调Bax、Caspase-3和下调Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达以促进肺癌细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。

黄连素通过Akt/Bcl-2/Bax通路诱导卵巢透明癌细胞凋亡

目的:研究黄连素对卵巢透明癌ES2细胞凋亡的影响,并探讨其对肿瘤细胞的影响机制。方法:ES2细胞培养过程,加25、50、100、200μmol/L黄连素,分别作用6、12、24、48h。CCK-8法检测黄连素对ES2细胞活力的影响;流式细胞术检测黄连素对ES2细胞凋亡能力的影响;通过Hoechst荧光染色观察ES2细胞核形态的改变;Western blot法检测ES2细胞中Akt/Bcl-2/Bax信号通路相关蛋白表达的改变。结果:ES2细胞活力随着黄连素浓度及作用时间的增加而降低,存在浓度与时间依赖性。随着黄连素作用浓度的增加,ES2细胞总凋亡率升高(P<0.01),细胞染色质固缩,荧光强度增强,Bax蛋白表达上调(P<0.01),Bcl-2及p-Akt表达下调(P<0.01)。结论:黄连素可通过Akt/Bcl-2/Bax信号通路诱导卵巢透明癌ES2细胞凋亡,抑制增殖,进而发挥抗肿瘤的作用,为临床早期卵巢透明细胞癌的治疗策略提供实验依据及思路。

有氧运动激活BDNF/miR-195/Bcl-2信号通路抑制CUMS抑郁小鼠海马神经细胞凋亡

目的:探讨有氧运动激活慢性不可预知应激性刺激(Chronic Unpredictable Stress,CUMS)抑郁小鼠海马BDNF/miR-195/Bcl-2信号通路改善海马功能的作用。方法:8周龄雄性健康KM小鼠,随机数字法分为空白对照组(CG)、CUMS抑郁模型组(MG)和抑郁+有氧运动组(EG),每组12只。13种慢性不可预知应激刺激28天建立CUMS抑郁模型,EG组在建模成功后适应性运动1周后,采用小动物跑台进行8周的有氧运动训练。训练结束后测定各组小鼠的神经行为评分,ELISA法测定血清BDNF,免疫组化法进行海马组织BDNF的定位表达,TUNEL检测海马组织细胞凋亡率,RTPCR检测凋亡相关miRNA与m RNA的表达水平,western blot检测海马BDNF蛋白表达水平。结果:CUMS抑郁小鼠海马功能显著降低,神经行为学评分下降,血清BDNF含量降低,造模效果显著。mRNA与miRNA高度相关的基因涉及到miR-195与BDNF,且两者的差异表达量与有氧运动相关,RT-PCR检测模型组小鼠海马组织Bax、Caspase-3表达上调,Bcl-2表达下降。有氧运动可有效改善抑郁小鼠海马功能,上调海马组织BDNF与Bcl-2的表达水平,下调miR-195和Bax的表达水平,抑制Caspase-3的活化,降低海马细胞凋亡率,且海马miR-195表达水平与BDNF表达呈显著负相关。结论:CUMS抑郁小鼠海马miR-195上调通过靶向抑制Bcl-2的表达水平促进海马细胞凋亡。有氧运动可显著上调抑郁小鼠海马BDNF的表达水平,抑制miR-195在小鼠海马细胞中的促凋亡作用,下调Bax、Caspase-3的表达,发挥抗凋亡作用。这一作用可能与BDNF/miR-195/Bcl-2信号通路的激活有关。

胃复春胶囊通过调节Bcl-2/Bax号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的研究胃复春胶囊对人胃癌细胞的作用,为胃复春胶囊在抗消化道肿瘤方面的应用提供依据。方法NCI-N87人胃癌细胞与不同浓度的胃复春胶囊提取物共孵育,采用Cell Counting Kit-8试剂盒检测细胞活力;流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot法检测与细胞凋亡相关的蛋白表达情况。结果胃复春胶囊提取物能够剂量和时间依赖地抑制NCI-N87细胞生长,诱导NCI-N87细胞产生凋亡,且使细胞周期阻滞在G0/G1期;经过胃复春胶囊提取物处理24 h后,实验组NCI-N87细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w表达量下调;促凋亡蛋白Bax、Bad表达量上调,呈剂量依赖性。结论胃复春胶囊提取物能抑制胃癌细胞的增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其作用机制推测与Bcl-2/Bax信号通路有关。文章为临床上胃复春胶囊治疗胃癌提供了依据。

白花蛇舌草注射剂抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及调控Bcl-2/CytC信号通路诱导线粒体凋亡

目的评估白花蛇舌草注射液在诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡作用相关机制。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法观察细胞在白花蛇舌草注射液作用后24、48 h的增殖变化;使用倒置显微镜和透射电镜对细胞进行形态学观察;应用Western blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyt C蛋白的表达。结果白花蛇舌草注射液能抑制SMMC-7721细胞增殖且呈剂量依赖性;电镜下观察100μg/m L白花蛇舌草注射液作用后,引起染色质固缩、边移,出现早期凋亡现象;白花蛇舌草注射液处理24 h后可引起Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低,释放Cyt C,激活Caspase-3蛋白表达。结论白花蛇舌草注射液可以抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,诱导其凋亡,可能与其调控Bcl-2/Cyt C信号通路相关。

复方苦参汤对溃疡性结肠炎DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用

目的:探讨复方苦参汤对溃疡性结肠炎大鼠DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用.方法:SD♂大鼠84只(体质量200g±20g)随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、复方苦参汤大剂量组、复方苦参汤中剂量组和复方苦参汤小剂量组,每组14只.除对照组外,其余5组均依据Morris等三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.造模后观察记录大鼠的大便和精神状态,并于第3天随机处死2只造模大鼠,取结肠镜下观察其病理组织学变化发现:大鼠结肠糜烂、充血及溃疡,证明造模成功.建立大鼠溃疡性结肠炎模型后给予美沙拉嗪组大鼠3mL/d(0.5g/L)美沙拉嗪混悬液灌胃,复方苦参汤大、中、小剂量组分别按不同含生药浓度的复方苦参汤液3mL/d(0.67、0.34、0.17g/L)灌胃,对照组和模型组给予等量的生理盐水3mL/d灌胃,连续灌胃15d后,禁食24h,处死大鼠,取结肠组织石蜡包埋切片,HE染色比较各组结肠组织病理组织学改变,Realtime-PCR和免疫组织化学技术检测实验大鼠结肠组织的Bcl-2、β-arrestin1及δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)mRNA和蛋白表达表达变化.结果:各组大鼠结肠组织中Bcl-2、β-arrestin1和DOR表达有显著差异(P<0.05).与对照组比较,模型组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1和DOR表达明显升高(24.11±12.61vs11.88±5.90,38.90±5.30vs14.34±8.97,23.57±9.96vs9.68±3.94,均P<0.05);与模型组比较,美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达均显著下降,但美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组之间比较Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达无显著差异.结论:在实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中DOR、β-arrestin1和Bcl-2的表达升高,DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路可能参与了溃疡性结肠炎的病理过程,复方苦参汤可改善溃疡性结肠炎大鼠的结肠组织病理学改变,机制可能与调节该信号通路有关.

山茱萸莫罗苷经Bcl-2/Bax通路抗H9c2心肌细胞氧化应激损伤研究

目的探讨山茱萸莫罗苷经Bcl-2/Bax信号通路抗H9c2心肌细胞氧化应激损伤作用。方法体外培养H9c2细胞进行实验,阴性对照组(A组)加入无血清DMEM培养基;阳性对照组(B组)加入终浓度为200μmol/L的H2O2;莫罗苷低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组)分别加入终质量浓度为25,50,100μg/m L的山茱萸莫罗苷,同时给予终浓度为200μmol/L的H2O2,继续培养24 h后,检测H9c2细胞增殖和凋亡情况,同时检测H9c2细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素c(Cyt-c)和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)水平。结果与A组相比,B组和C1组、C2组、C3组组H9c2细胞增殖率和SOD,GSHPx,Bcl-2水平降低,H9c2细胞凋亡率和ROS,MDA,Bax,Cyt-c,Caspase-3水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组相比,C1组、C2组、C3组H9c2细胞增殖率和SOD,GSHPx,Bcl-2水平升高,H9c2细胞凋亡率和ROS,MDA,Bax,Cyt-c,Caspase-3水平降低,C1组、C2组、C3组呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论山茱萸莫罗苷可通过Bcl-2/Bax信号通路发挥H9c2心肌细胞抗氧化和抗凋亡作用,可防护H2O2诱导的氧化应激损伤。