氯化两面针碱通过PI3K/Akt/Bcl-2/caspase-3/PARP通路诱导小细胞肺癌细胞H1688和H446凋亡

目的探究氯化两面针碱诱导小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞H1688和H446发生凋亡及其可能的作用机制。方法MTT法检测氯化两面针碱或顺铂(cisplatin,DDP)对SCLC细胞活性的影响;采用倒置荧光显微镜和HE染色法观察氯化两面针碱或DDP处理后细胞形态变化;流式细胞术检测氯化两面针碱或DDP对细胞凋亡的影响;MTT法检测凋亡抑制剂Z-VAD-FMK对氯化两面针碱或DDP诱导细胞发生凋亡的影响;Western blot法检测氯化两面针碱或DDP处理后细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3、PARP、p-PI3K及p-Akt蛋白的表达变化。结果MTT结果显示,氯化两面针碱作用于细胞48 h后,细胞的活力明显降低;与DDP相比,氯化两面针碱能以更小的IC_(50)抑制SCLC细胞;倒置荧光显微镜与HE染色结果表明,与DDP相似,氯化两面针碱可诱导SCLC细胞发生凋亡的形态学变化;流式细胞术结果表明,与DDP相似,氯化两面针碱可诱导SCLC发生细胞凋亡;MTT实验结果表明,氯化两面针碱对SCLC细胞凋亡的抑制作用可被凋亡抑制剂Z-VAD-FMK部分拮抗;Western blot结果显示,与DDP相似,氯化两面针碱可抑制PI3K及Akt的表达,升高Bax、抑制Bcl-2,促进caspase-3和PARP的裂解。结论氯化两面针碱可通过抑制PI3K及Akt的激活,来诱导SCLC细胞发生凋亡。

基于Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究加味旋覆代赭汤治疗食管癌前病变的作用机制

目的:探究加味旋覆代赭汤对食管癌前病变大鼠Caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路的调控作用机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为4组,空白组、模型组、中药组、西药组,每组各12只。除空白组外均采用复合造模法制作食管癌前病变大鼠模型,造模成功后,分别进行药物灌胃干预,空白组、模型组用生理盐水灌胃,中药组和西药组分别给予加味旋覆代赭汤、西药(雷贝拉唑+莫沙必利)灌胃,给药8周取材。利用光学显微镜观察食管上皮组织的形态学变化;分别应用蛋白质印迹法(Western-blot)及聚合酶链式反应(PCR)检测食管上皮组织Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠食管上皮病理积分升高(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组大鼠食管上皮病理积分均降低(P<0.01)。PCR及Western-blot检测结果显示,与空白组比较,模型组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均降低(P<0.01);与模型组比较,中药、西药组大鼠Caspase-3、Bax mRNA、蛋白表达均增高(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠食管组织中Bcl-2 m RNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论:加味旋覆代赭汤可能通过下调Bcl-2/Bax比值,增加线粒体外膜通透性,释放凋亡因子,激活Caspase-3,使病变组织发生凋亡,扭转食管上皮异型增生,从而起到治疗食管癌前病变的作用。

澳洲茄碱通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3信号通路促进非小细胞肺癌发生凋亡

目的 探讨龙葵活性成分澳洲茄碱对非小细胞肺癌细胞PC9增殖、凋亡的影响。方法 体外培养PC9细胞,设对照组(0μmol/L)及澳洲茄碱不同剂量组(0、2、5、10、15、20、25μmol/L),CCK-8试剂盒检测澳洲茄碱对PC9细胞的增殖抑制作用;TMRE检测线粒膜电位;caspase3/7活性试剂盒联合GreenNuc?Caspase-3/Annexin V-mCherry染色检测caspase-3活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;给药处理或者使用PTEN抑制剂后,Western blot检测细胞中相关蛋白的表达量。结果 与对照组相比,经澳洲茄碱干预24、48、72 h后,PC9细胞的活力均明显降低(P<0.05);经澳洲茄碱干预24 h后,细胞线粒体膜电位明显降低,而细胞凋亡比例明显升高(P<0.05);caspase-3/7活力、活细胞Caspase-3活性及cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.01);PI3K和Akt磷酸化水平降低(P<0.05);而PTEN、Bax蛋白表达上调(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05)。结论 澳洲茄碱可通过调控Bcl-2/Bax/caspase-3通路及其上游蛋白活性而抑制PC9细胞增殖,促进其凋亡。

黄芪多糖调控Bcl-2/Bax信号通路抑制卵巢腺癌Caov-3细胞生长的实验研究

目的研究黄芪多糖调控Bcl-2/Bax信号通路对卵巢腺癌Caov-3细胞生长的影响。方法将黄芪多糖分为低、中、高剂量组,分别加入10、50、100 mg/mL黄芪多糖,流式细胞术检测10、50、100 mg/mL黄芪多糖作用Caov-3细胞后对细胞周期的影响,显微镜下观察Caov-3细胞凋亡情况和形态变化,Western blot法检测3组药物作用Caov-3细胞后对Bcl-2、Bax蛋白表达水平及对Bcl/Bax的影响;同时,比较阿司匹林联合黄芪多糖与单用黄芪多糖对Caov-3细胞的抑制率。结果黄芪多糖低、中、高剂量组对Caov-3细胞的抑制率分别为40%、50%、65%,黄芪多糖的IC_(50)为50 mg/mL,与对照组比较,黄芪多糖高剂量组对Caov-3细胞的抑制效果最为明显,差异具有统计学意义(P<0.05);黄芪多糖联合阿司匹林的抑制效果优于单纯使用黄芪多糖(P<0.05)。与对照组比较,黄芪多糖高剂量组对Caov-3细胞周期的影响更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,黄芪多糖高剂量组Caov-3细胞凋亡的数目显著增加,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2/Bax降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪多糖能有效抑制Caov-3细胞的生长,联合阿司匹林效果更好。其机制可能与黄芪多糖调控Bcl-2/Bax信号通路,促进细胞凋亡有关。

桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax水平的影响

目的:探讨桂枝加龙骨牡蛎汤对魄不安于肺不寐大鼠脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响及其治疗魄不安于肺不寐可能的作用机制。方法:32只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组和西药组,每组8只。采用水环境小平台法干预9 d建立魄不安于肺不寐大鼠模型,造模成功后,中药组予以桂枝加龙骨牡蛎汤7.6 g·kg-1·d-1灌胃,西药组予以右佐匹克隆片0.1 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d,测量体质量。采用免疫组织化学法及蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠体质量减轻(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2的表达显著减少(P<0.01),Caspase-3、Bax表达显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比率显著减少(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织Bcl-2相对表达量显著减少(P<0.01),Bax、Caspase-3相对表达量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠体质量显著增加(P<0.01),免疫组化检测结果显示,大鼠脑组织Bcl-2表达增加(P<0.05),Caspase-3、Bax表达减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01);Western blot结果显示大鼠脑组织中Bcl-2相对表达量增加(P<0.05),Bax、Caspase-3相对表达量显著减少(P<0.01)。结论:桂枝加龙骨牡蛎汤改善魄不安于肺不寐大鼠的睡眠可能与增加其脑组织Bcl-2、降低Caspase-3、Bax表达水平有关。

基于caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响

目的基于caspase-3/Bcl2/Bax信号通路探究SMAC基因对肺腺癌细胞紫杉醇敏感度及细胞活性的影响。方法建立肺腺癌紫杉醇耐药细胞株A549/Taxol,将细胞分为pcDNANC组(转染pcDNA-NC空白载体)、pcDNA-SMAC组(转染pcDNA-SMAC载体)、siRNA-NC组(转染siRNANC空病毒载体)和siRNA-SMAC组(转染siRNA-SMAC慢病毒载体)。qRT-PCR法检测细胞中SMAC mRNA表达;MTT法检测细胞敏感度;克隆实验法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡能力;Western blot法检测细胞中caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果肺腺癌A549细胞较BEAS-2B正常细胞中SMAC mRNA表达明显降低(P<0.05)。pcDNA-SMAC组较pcDNA-NC组细胞中SMAC mRNA表达显著升高(P<0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞中SMAC mRNA表达显著降低(P<0.05)。和pcDNA-NC组相比,pcDNA-SMAC组细胞IC_(50)、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著降低,细胞耐药指数逆转倍数为2.51倍,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显高于pcDNA-NC组(P<0.05)。和siRNA-NC组相比,siRNA-SMAC组细胞IC_(50)、细胞克隆数、细胞侵袭能力及Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax比值均显著升高,细胞凋亡能力及caspase-3和Bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论高表达SMAC可增加肺腺癌细胞的紫杉醇敏感度、抑制细胞增长和侵袭、促进细胞凋亡,且对caspase-3/Bcl-2/Bax信号通路有一定调控作用。

miR-216a对重症急性胰腺炎腺泡损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1 通路的影响

目的探索miR-216a对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腺泡细胞损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1通路的影响.方法将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组、SAP组、anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组.Con组不做任何处理,其余各组采用雨蛙肽(10 nmol/L)联合脂多糖(lipo poly saccharide,LPS)(10 mg/L)处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建SAP细胞模型,anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组分别转染anti-miR-NC、anti-miR-216a、miR-NC、miR-216a mimics.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组细胞中miR-216a及P2X7、NLRP3、caspase-1 mRNA相对表达量;Western blot法检测各组细胞中P2X7、NLRP3、Caspase-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cellymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific protease-3,Cleaved caspase-3)蛋白表达情况.结果各组细胞中IL-6、TNF-α含量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞凋亡率和Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量比较,Con组<Sch+miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<anti-miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞Bcl-2蛋白相对表达量比较,anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组<Con组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞中miR-216a和P2X7、NLRP3、Caspase-1 mRNA及其蛋白相对表达量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-216a可通过抑制P2X7-NLRP3/caspase-1信号通路减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,从而减轻SAP腺泡损伤.

橙皮苷调控Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡

【目的】探析橙皮苷对奶牛乳腺上皮细胞凋亡的阻抑效果及其分子作用机制,为其在促进奶牛乳腺器官生长发育和维持泌乳功能领域的应用提供理论依据。【方法】以1000μmol/L H_(2)O_(2)处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型,再用120μg/mL橙皮苷处理24 h,然后采用CCK-8法测定奶牛乳腺上皮细胞活性,通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡情况,利用实时荧光定量PCR检测奶牛乳腺上皮细胞的Bcl-2、Bax和Caspase3基因表达水平,并以Western blotting检测Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白的表达变化。【结果】与空白对照组(CK)相比,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著下降(P<0.01,下同),发生凋亡的细胞比例极显著升高,且DNA片段呈梯状条带;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P<0.05,下同),且细胞凋亡程度低,发生凋亡的细胞数目较少。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著上升,细胞凋亡比例极显著降低,且DNA片段的梯状条带减少。在Bax、Bcl-2和Caspase3基因及其蛋白表达方面,H_(2)O_(2)组奶牛乳腺上皮细胞中的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著或极显著高于CK组,而Bcl-2基因及其蛋白表达水平较低;橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达水平显著低或极显著于CK组,Bcl-2基因及其蛋白表达水平则均高于CK组;与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞的Bax和Caspase3基因及其蛋白表达极显著下调,而Bcl-2基因及其蛋白表达极显著上调。【结论】橙皮苷通过Bcl-2/Bax-Caspase3信号通路阻抑H_(2)O_(2)诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡,有效提高细胞活性,故推测橙皮苷对促进乳腺器官发育和维持泌乳能力具有良好的正向效应。

黄芪甲苷通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究

目的观察黄芪甲苷(Astragaloside-IV,AS)抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导凋亡作用,并探讨其Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路作用机制。方法将MCF-7细胞分为空白对照组(AS,0μmol·L-1)和黄芪甲苷50、25、12.5μmol·L-1浓度组。采用CCK-8和台盼蓝计数法检测黄芪甲苷对MCF-7细胞增殖和生长曲线的影响;采用Hoechst 33258荧光染色法观察黄芪甲苷对MCF-7细胞凋亡形态学的影响;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot法分析黄芪甲苷对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,黄芪甲苷25、50μmol·L-1组MCF-7细胞增殖明显被抑制(P<0.01),生长曲线(2~7 d)显著减缓(P<0.05,P<0.01),细胞凋亡明显增多;RT-PCR和Western Blot试验结果发现黄芪甲苷25、50μmol·L-1组MCF-7细胞Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.01)。结论黄芪甲苷可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路有关。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3凋亡机制抑制小鼠气道平滑肌细胞的增殖

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的抗增殖及促凋亡作用,并分析其在Bcl-2/Bax/cleaved caspase-3凋亡机制发挥的调控作用。方法体外培养小鼠气道平滑肌细胞,再用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的H_(2)O_(2)刺激细胞增殖,作用不同时间(12、24、48、72 h),探索H_(2)O_(2)最佳作用浓度和时间。接着将ASMCs分为对照组、H_(2)O_(2)组、1,25(OH)_(2)D_(3)、H_(2)O_(2)+1,25(OH)_(2)D_(3)4组进行培养,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组ASMCs增殖活性的变化,并用流式细胞仪检测其凋亡情况。并用蛋白印迹法检测各组Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3蛋白的表达情况。结果H_(2)O_(2)刺激小鼠气道平滑肌细胞增殖的最佳作用浓度和时间分别为25μmol/L和24 h。1,25(OH)_(2)D_(3)干预能明显降低ASMCs增殖能力,并增加其凋亡率。H_(2)O_(2)+1,25(OH)_(2)D_(3)组细胞凋亡率为21.9%(对照组细胞凋亡率为7.1%,H_(2)O_(2)组细胞凋亡率为4.8%),差异具有统计学意义(P<0.01)。1,25(OH)_(2)D_(3)干预后,蛋白印迹法结果显示ASMCs的Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2表达水平下降。结论1,25(OH)_(2)D_(3)能抑制H_(2)O_(2)刺激ASMCs的增殖,并促进其凋亡,其机制与Bax/Bcl-2/ccleaved caspase-3凋亡通路有关。

鲜地黄中两个酰胺类化合物通过SIRT3/Bcl-2/Caspase-3信号通路减轻LPS诱导的NRK-52e细胞损伤

目的:探究鲜地黄中两个酰胺类化合物rehmagluamide(Reh)和rehmanalkaloid C(Reh C)对LPS诱导NRK-52e细胞损伤的干预作用及潜在机制。方法:建立LPS诱导的NRK-52e细胞损伤模型,加入SIRT3选择性抑制剂3-TYP,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α与IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧(ROS)与线粒体膜电位(JC-1)水平;细胞免疫荧光检测细胞中SIRT3蛋白及线粒体凋亡关键蛋白Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax、Bcl-2表达。结果:与模型组比较,Reh和Reh C可不同程度降低LPS作用下NRK-52e细胞凋亡及TNF-α、IL-6、ROS水平和Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达,升高线粒体膜电位、SIRT3蛋白表达及Bcl-2/Bax水平,但在加入3-TYP后Reh和Reh C的改善作用显著降低。结论:Reh和Reh C可能通过SIRT3/Bcl-2/Caspase-3信号通路减轻LPS诱导的NRK-52e细胞损伤。

参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾组织凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响

目的:探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾小球足细胞凋亡的影响。方法:制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA),复制膜性肾病小鼠模型。将40只模型小鼠随机分为模型组、参芪蛭龙汤高、低剂量组和雷公藤多苷片组,另取10只正常小鼠作为正常组。连续给药4周后,处死小鼠,HE、Masson、PAS染色观察肾组织病理变化;RT-PCR检测肾组织Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Bax(/BCL2-相关X蛋白)、Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3)mRNA表达变化;Western blot检测肾组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达变化。结果:HE染色发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组肾小球体积减小,仅有炎性细胞浸润减少;Masson染色可见,与模型组比较,各给药组可见肾小球体积减小,基底膜增厚及组织纤维化减轻;PAS染色可见,各给药组基底膜病变较模型组显著减轻,参芪蛭龙汤高剂量组并未出现明显基底膜增厚等改变。RT-PCR结果显示,与模型组比较,参芪蛭龙汤各组小鼠肾组织Bax、Caspase-3 mRNA表达减少(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达增加(P<0.01);Western blot结果发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组小鼠肾组织Bax、Caspase-3蛋白表达减少(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论:参芪蛭龙汤能够改善膜性肾病小鼠肾组织病变,抑制肾小球足细胞凋亡。

甲状腺穿刺物中Bcl-2、Caspase-3表达与乳头状甲状腺癌病理特征的关系分析

目的:分析甲状腺穿刺物中Bcl-2、Caspase-3表达与乳头状甲状腺癌病理特征的关系。方法:选取我院2021年1—12月收治的经超声引导细针穿刺细胞学检查的患者121例行甲状腺结节切除术后病理学检查,其中良性结节患者79例(良性组),乳头状甲状腺癌患者42例(恶性组),比较两组患者穿刺物中的B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨冬酶-3(Caspase-3)mRNA表达水平。采用Logistic回归分析Bcl-2、Caspase-3表达的影响因素与乳头状甲状腺癌病理特征的关系。结果:两组患者的甲状腺结节穿刺物中均有Bcl-2、Caspase-3的表达,恶性组的Bcl-2 mRNA相对表达量显著高于良性组,Caspase-3 mRNA的相对表达量显著低于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。乳头状甲状腺癌中Bcl-2 mRNA相对表达量在病灶直径、TNM分期、淋巴结是否转移之间差异有统计学意义(P<0.05),而在性别、年龄、病灶个数和位置之间数值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Caspase-3 mRNA相对表达量在TNM分期、淋巴结是否转移之间差异有统计学意义(P<0.05),而在病灶直径、性别、年龄、病灶个数与位置之间数值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,病灶直径、TNM分期、淋巴结转移是Bcl-2表达的影响因素,TNM分期、淋巴结转移是Caspase-3的影响因素。结论:Bcl-2、Caspase-3在乳头状甲状腺穿刺物中均有表达,Bcl-2表达与甲状腺癌的病灶直径、TNM分期、淋巴结转移有关,Caspase-3表达与TNM分期、淋巴结转移有关,可作为术前诊断乳头状甲状腺癌的参考指标。

益气活血化浊解毒方对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨益气活血化浊解毒方是否可通过调控Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。方法:72只SPF级雄性SD大鼠,按随机数字表法分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、益气活血化浊解毒方低剂量组(TCM-L)、中剂量组(TCM-M)、高剂量组(TCM-H)、尼莫地平组(Nim),每组12只大鼠。建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h后再灌注。造模24h后,各用药组分别予相应浓度的药物灌胃,其余各组等容积生理盐水灌胃,连续治疗3d。采用改良神经功能缺损评分评估大鼠神经功能损伤情况;盐酸2,3,5-三苯基四氮(TTC)染色观察脑梗死体积;TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况;Western blot检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的情况;荧光定量PCR法检测Caspase-3mRNA表达的情况。结果:(1)与Sham组比较,MCAO组的大鼠神经功能缺损症状显著加重(P<0.05);脑梗死体积占比增大(P<0.05);缺血区细胞凋亡率增加(P<0.05);Western blot检测显示大鼠脑组织Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05);PCR检测显示Caspase-3mRNA表达显著升高(P<0.05)。(2)与MCAO组比较,TCM组和Nim组的神经功能缺损评分均明显降低(P<0.05);脑梗死体积百分比减少(P<0.05);缺血区细胞凋亡率降低(P<0.05);Western blot检测显示大鼠脑组织Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);PCR检测显示Caspase-3mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:益气活血化浊解毒方可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax、Caspase-3蛋白及Caspase-3mRNA表达抑制神经细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,发挥神经保护作用。

制冰片介导Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路改善心肌细胞H/R损伤

目的研究天竺黄制冰片对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及潜在作用机制。方法通过给予H9C2心肌细胞不同的缺氧时间体外模拟缺血再灌注损伤,测定损伤后H9C2心肌细胞中超氧化物歧化酶(superioxide diamutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)水平,评估模型是否成功建立。MTT方法测定天竺黄、冰片及制冰片对H9C2细胞的安全浓度范围,并检测天竺黄、冰片及制冰片对H/R诱导后心肌细胞中MDA、SOD和LDH生成的影响。采用Real-time PCR和Western blot方法检测天竺黄制冰片对H/R诱导H9C2细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3基因和蛋白的表达。结果缺氧6 h,复氧4 h,心肌细胞存活率小于50%,细胞中MDA和LDH水平显著增加,SOD活性显著降低,成功模拟缺血再灌注模型。天竺黄、冰片及制冰片在12.5~100μg/mL浓度范围内,对心肌细胞活力均没有影响。天竺黄(6.25~100μg/mL)对H/R诱导的H9C2细胞活力没有显著影响;冰片(25~100μg/mL)显著增加H/R诱导的H9C2细胞活力(P<0.05),制冰片(25~100μg/mL)极显著增加了H/R诱导的H9C2细胞活力(P<0.01)。同时,与模型组相比,冰片和制冰片分别给药均降低了H/R诱导的心肌细胞中MDA和LDH的水平,提高了SOD的活性,且同浓度制冰片调节作用优于冰片。同时,天竺黄制冰片通过上调了Bcl-2基因和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3基因和蛋白表达,发挥抑制细胞凋亡的作用。结论天竺黄制冰片可通过调控Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路阻碍心肌细胞凋亡,进而达到保护心肌的作用。

黄夏白冬消癌汤对Lewis肺癌小鼠Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响

目的观察黄夏白冬消癌汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路的影响。方法选取40只雄性C57BL/6小鼠,于小鼠右侧腋窝皮下注射Lewis肺癌细胞悬液建立肺癌模型。将造模成功的Lewis肺癌小鼠随机分为4组,每组10只。模型组给予生理盐水灌胃(1次/d),顺铂组给予顺铂2 mg/kg腹腔注射(每2 d 1次),黄夏白冬消癌汤低、高剂量组分别给予2 g/mL和4 g/mL黄夏白冬消癌汤灌胃(1次/d),均连续干预14 d。测量各组干预2,4,6,8,10,12,14 d后肿瘤长径与短径,计算肿瘤体积;干预结束后脱颈椎处死小鼠,称瘤重,计算抑瘤率;取各组小鼠瘤组织,采用Western blot法检测瘤组织中NF-κBp65、p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleved-Caspase-3蛋白表达情况,采用qPCR法检测瘤组织中NF-κB p65、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA相对表达量。结果黄夏白冬消癌汤低剂量组干预6~14 d期间各时间点肿瘤体积及干预结束后瘤重与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);顺铂组及黄夏白冬消癌汤高剂量组肿瘤生长延缓,各时间点肿瘤体积及干预结束后瘤重均明显低于模型组(P均<0.05),抑瘤率均明显高于黄夏白冬消癌汤低剂量组(P均<0.05),顺铂组与黄夏白冬消癌汤高剂量组各时间点肿瘤体积、干预结束后瘤重、抑瘤率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。顺铂组及黄夏白冬消癌汤低、高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65及NF-κB p65、Bcl-2 mRNA相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),Cleved-Caspase-3/Caspase-3均明显高于模型组(P均<0.05);顺铂组及黄夏白冬消癌汤高剂量组Bax/Bcl-2及Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05),黄夏白冬消癌汤低剂量组与模型组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);黄夏白冬消癌汤低、高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65及Bcl-2 mRNA相对表达量均明显高于顺铂组(P均<0.05),Cleved-Caspase-3/Caspase-3及Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显低于顺铂组(P均<0.05),NF-κB p65 mRNA相对表达量与顺铂组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);黄夏白冬消癌汤高剂量组Bax/Bcl-2与顺铂组比较差异无统计学意义(P>0.05),黄夏白冬消癌汤低剂量组明显低于顺铂组(P<0.05)。结论黄夏白冬消癌汤可以通过上调Bax、Caspase-3和下调Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65的表达以促进肺癌细胞凋亡,发挥抗肿瘤作用。

低氧预适应小鼠皮层Bcl-2和Caspase-3的表达变化

本文旨在探讨小鼠皮层Bcl-2和Caspase-3在低氧预适应脑保护中的作用。将Blb/c近交系小鼠随机分为对照组、低氧组和低氧预适应组,用免疫荧光和激光共聚焦显微镜等技术测定皮层顶叶Bcl-2和Caspase-3表达荧光强度和阳性细胞计数。结果显示,低氧组和低氧预适应组Bcl-2表达均显著高于对照组,低氧预适应组又显著高于低氧组。低氧组和低氧预适应组Caspase-3表达均显著高于对照组,但低氧预适应组显著低于低氧组。结果表明,低氧预适应过程中,小鼠皮层脑区通过Bcl-2高表达和Caspase-3低表达抵御皮层细胞凋亡,从而参与脑保护机制。

丹参酮ⅡA对鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2和caspase-3表达的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Tan ⅡA低剂量治疗组和Tan ⅡA高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Tan ⅡA高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给予高、低剂量Tan ⅡA3d,每天1次。用免疫组化法观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部皮质Bcl-2和caspase-3蛋白表达,并进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化。结果:脑缺血再灌注24h,缺血再灌注组Bcl-2和caspase-3表达增加,与假手术组比较,差异具有显著性意义(P<0.05);与缺血再灌注组比较,Tan ⅡA高、低剂量治疗组均显著增加Bcl-2表达,减少caspase-3表达,高、低剂量组之间差异亦具有显著性意义(P<0.05)。Tan ⅡA高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有显著性意义(P<0.05)。Tan ⅡA高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,TanⅡA高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组。结论:Tan ⅡA对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低caspase-3蛋白表达有关。

芹菜素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的探讨黄酮类化合物芹菜素对大鼠实验性心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)时心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响,并分析心肌组织病理学损伤程度。方法采用结扎左冠状动脉前降支,心肌缺血45 min,再灌注2 h制作缺血/再灌注模型。将大鼠随机分为8组,即正常组(normal group,Normal)、假手术组(sham oper-ation group,Sham)、生理盐水缺血/再灌注组(saline ischemi-a-reperfusion group,NS)、溶剂对照组(solvent control group,Sol)、美托洛尔对照组(metoprolol control group,Meto)、芹菜素低、中、高剂量(1、2、4 mg.kg-1)用药组(apigenin low,medium and high dose treatment group,Api1,Api2,Api4)。再灌注2 h后迅速取出心脏,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞;免疫组化法测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达;做病理组织切片检查心肌损伤情况。结果芹菜素各剂量组心肌细胞凋亡率明显低于NS组(P<0.05),Api1,Api2,Api4能剂量依赖性地降低大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡率;芹菜素各剂量组剂量依赖性地提高大鼠心肌缺血/再灌注的Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低大鼠心肌缺血/再灌注的Bax、Caspase-3蛋白表达量(P<0.05);芹菜素各剂量组与NS组比较,心肌组织损伤的病理学变化明显减轻(P<0.05)。结论芹菜素对缺血/再灌注心肌的保护效应可能与其抑制缺血/再灌注心肌细胞凋亡有关;芹菜素抗心肌凋亡作用的机制可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax、Caspase-3蛋白表达有关;芹菜素能明显减轻心肌组织损伤。

轻中度亚低温对大鼠心肺复苏后脑细胞caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究不同程度亚低温对大鼠心肺复苏(CPR)后脑组织凋亡的影响。方法利用窒息法制作心肺复苏模型,SD大鼠15只,随机分为对照组(正常体温)、34℃低温组、32℃低温组,每组各5只。对照组在CPR后置于室温25℃下常规治疗;34℃低温组(34+/-0.2℃)和32℃低温组(32+/-0.2℃)在CPR 0.5 h后分别给予亚低温治疗。各组大鼠均于CPR后12 h取脑组织,免疫组化法测定大脑皮层caspase-3蛋白表达,Western blotting测定Bcl-2、Bax表达,同时观察各组脑组织病理变化。结果与常温组相比,低温组神经元caspase-3表达均明显减弱(P<0.05),其中32℃低温组caspase-3表达减弱更加明显(P<0.05);低温组Bcl-2表达明显增强(P<0.05),32℃低温组的Bcl-2蛋白表达比34℃低温组表达更强;3组大鼠神经元凋亡蛋白bax的表达无明显差异。结论亚低温可能通过降低caspase-3蛋白的表达、增强Bcl-2的表达,从而抑制脑细胞凋亡减轻脑损伤,32℃亚低温治疗比34℃更能起到脑保护的作用。