hVEGF165腺相关病毒通过Bax和Bcl-2途径抑制细胞凋亡

目的:探讨直接心肌注射基因重组hVEGF165腺相关病毒(rAAV-hVEGF165)对急性心肌梗死大鼠心功能、心肌梗死面积、微血管数量、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响。方法:81只SD大鼠根据注射药物的不同随机分成4组:假手术组15只,心肌梗死组(MI组)25只,生理盐水组(NS组)25只,血管内皮生长因子(VEGF)组16只。于注射4周后测定超声心动图参数、梗死面积、微血管数量、心肌细胞凋亡指数、心肌组织Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:VEGF组心肌梗死面积较MI组和NS组明显减小(P<0.05)。超声心动图提示VEGF组的射血分数要高于MI组和NS组(P<0.01)。血管计数显示VEGF组有更多的新生血管形成(P<0.01)。结论:直接心肌注射rAAV-hVEGF165能明显改善急性心肌梗死大鼠的心功能,缩小梗死面积,促进心肌内新血管的形成,减少心肌细胞凋亡,抑制Bax的表达,促进Bcl-2的表达。

^(188)Re诱导乳腺癌ER-75-30细胞凋亡及其与bcl-2、bax基因表达的研究

目的 研究放射性核素188铼 (188Re)诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞凋亡及其与bcl 2和bax基因表达的关系。方法 应用光镜、电镜、流式细胞仪和免疫组化图像分析技术 ,检测不同浓度188Re作用于体外培养的乳腺癌ER 75 3 0细胞后 ,不同时间点诱导细胞凋亡情况及其与bcl 2和bax基因表达情况。结果 188Re能诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞发生凋亡形态学变化 ,并且随着188Re浓度增大和作用时间延长 ,凋亡率增加 ,bcl 2表达减弱 ,bax表达增强。结论 188Re能诱导乳腺癌ER 75 3 0细胞凋亡且具有浓度、时间和周期依赖性 ,bcl

大肠癌中胃泌素、生长抑素mRNA的表达与细胞凋亡及Bcl-2、Bax的关系

目的:探讨大肠癌组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS) mRNA及蛋白的表达与大肠癌细胞凋亡指数(AI)和 Bcl-2、Bax的相关性．方法:采用巢式RT-PCR方法检测62例大肠癌组织中 GAS、SS的基因表达,用TUNEL法检测细胞凋亡情况, 大肠癌组织中GAS、SS、Bcl-2、Bax的蛋白表达采用免疫组织化学S-P法. 结果:大肠癌组织中GAS、SS mRNA的表达与其蛋白表达基本一致．在大肠癌组织SS高表达组、中表达组的AI明显高于SS低表达组(q=5．06,q=3．95, 均P<0．01);而在GAS各表达组中的AI变化与此相反 (q=:6．66,q=6．33,均P<0．01)．Bax、Bcl-2阳性表达率在SS和GAS低表达组、中表达组、高表达组三组间相比较存在着明显差别(x2=9．24,x2=6．91; x2=7．17,x2=13．83,均P<0．05),其中Bax在SS高表达组(80％,8／10)、中表达组(76．5％,13／17)的阳性表达率明显高于低表达组(40．0％,14／35)(x2=5．24,x2= 6．09,均P<0．05);Bcl-2与其相反(x2=4．71,x2=4．70,均 P<0．05)．Bcl-2在GAS高表达组(90．9％,10／11)、中表达组(86．7％,13／15)的阳性表达率明显高于低表达组 (44．4％,16／36)(x2=5．60,x2=7．69,均P<0．05);Bax 在GAS高表达组(27．3％,3／8)的阳性表达率明显低于低表达组(69．4％,25／36)(x2=4．59,P<0．05);而Bax 在GAS中表达组(46．7％,7／15)的阳性表达率低于低表达组,但其无明显差别．GAS／SS积分比值变化与 Bcl-2呈正相关(r=0．34,P<0．01),与AI、Bax呈负相关 (r=-0.546,P<0．01;r=-0．299,P<0．05)．结论:GAS、SS对大肠癌细胞凋亡的调控可能与 Bcl-2、Bax的异常表达有关．

抑制EZH2表达对宫颈癌细胞凋亡的影响及机制

目的观察抑制人类Zest同源增强子(EZH2)表达对宫颈癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法选择人宫颈癌细胞系Siha和C33A细胞,采用MTT法确定EZH2抑制剂3-去氮腺嘌呤(DZNep)在两种细胞中的半数抑制浓度(IC_(50))。将两种细胞分为DMSO组、1/2 IC_(50)组和IC_(50)组,分别以DZNep终浓度0、3、6μmol/L处理Siha细胞各组,以0、2、4μmol/L处理C33A细胞各组。培养48 h后收集各组细胞,采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,采用Western blotting法检测EZH2蛋白、抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-X基因长片段(Bcl-xL)、促凋亡蛋白Bcl-2家族细胞凋亡相互作用因子(Bim)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果在Siha、C33A细胞中,1/2 IC_(50)组、IC_(50)组早期凋亡率均高于DMSO组,IC_(50)组早期凋亡率均高于1/2 IC_(50)组(P均<0. 05)。IC_(50)组EZH2蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05); IC_(50)组Bcl-xL蛋白表达均低于1/2 IC_(50)组、DMSO组,Bim和Caspase-3蛋白表达均高于1/2 IC_(50)组、DMSO组(P均<0. 05)。结论利用DZNep抑制宫颈癌细胞EZH2的表达后,能够诱导宫颈癌细胞早期凋亡,其机制可能与下调Bcl-xL蛋白表达并上调Bim和Caspase-3蛋白表达有关。

参附强心丸对心肾综合征大鼠心肾Bcl-2/Bax抗凋亡作用机制研究

目的:基于大鼠心肾综合征(cardiorenal syndrome,CRS)模型,探讨参附强心丸对CRS大鼠心肾部位Bcl-2/Bax蛋白表达及抗凋亡的作用机制。方法:采用腹主动脉缩窄合并肾脏急性缺血再灌注致大鼠心肾综合征模型,大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、参附强心丸高、中、低剂量组、卡托普利对照组6组,给药4周后测定血液中脑钠肽、醛固酮、肌酐等,计算左肾、心室脏器指数,TUNEL法测定心、肾凋亡,免疫组化测定心、肾Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:模型组大鼠血浆脑钠肽、醛固酮、肌酐、心室指数明显高于假手术组,肾素活性、左肾指数明显降低,组织凋亡明显。参附强心丸中剂量组脑钠肽、肌酐降低明显;高剂量组醛固酮明显降低,可明显改善心肌肥厚及左肾坏死萎缩状态,上调大鼠心肾组织Bcl-2表达,抑制Bax表达,降低心、肾细胞凋亡率。结论:参附强心丸高、中剂量组可以改善CRS大鼠肾功能、水钠潴留状态,通过上调Bcl-2表达,抑制Bax表达,降低心肾组织凋亡,起到对心肾的保护作用。

外源性H_2S预处理对大鼠RIRI细胞凋亡的影响

目的:探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)过程中细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体。将54只SD大鼠随机分成正常组、视网膜缺血再灌注损伤组(RIRI组)及硫氢化钠(NaHS)干预组,后两组进一步分为再灌注后6,24,48,72h组。采用前房灌注加压的方法建立RIRI模型,TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测视网膜组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:细胞凋亡出现于缺血灌注后6h,并逐渐递增,24h达到高峰,48h开始下降。与RIRI组比,NaHS组Bcl-2蛋白表达增多,Bax蛋白表达减少(均P<0.05)。结论:H2S预处理可通过上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值从而调控细胞凋亡,对大鼠RIRI进行保护作用。

姜黄素对CD34^+CD38^-KG1a细胞增殖和凋亡的影响及其与白消安的协同效应

目的探讨姜黄素对CD34+CD38-KG1a细胞增殖和凋亡的影响以及姜黄素联合白消安对CD34+CD38-KG1a细胞的协同效应。方法流式细胞术检测细胞CD34、CD38表面抗原的表达情况、姜黄素诱导CD34+CD38-KG1a细胞的凋亡情况及其对CD34+CD38-KG1a细胞周期的影响。MTT法检测姜黄素对CD34+CD38-KG1a的增殖抑制作用及其与白消安联合作用的效应。甲基纤维素克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。倒置光学显微镜观察细胞凋亡形态。Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果 KG1a细胞株中CD34+CD38-KG1a细胞占(98.2±3.2)%。姜黄素对CD34+CD38-KG1a细胞具有增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖性,并能降低CD34+CD38-KG1a细胞的克隆形成能力。姜黄素与白消安相互作用系数(CDI)<1。CD34+CD38-KG1a细胞被姜黄素阻滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,并能诱导CD34+CD38-KG1a细胞凋亡。凋亡细胞体积变大,细胞结构不清,胞膜边缘粗糙。姜黄素能下调CD34+CD38-KG1a细胞Bcl-2蛋白表达水平。结论姜黄素通过降低细胞克隆形成能力、阻滞细胞于G0/G1期和诱导细胞凋亡,抑制CD34+CD38-KG1a细胞的增殖,姜黄素与白消安具有协同作用。Bcl-2蛋白表达水平下调可能促使姜黄素诱导CD34+CD38-KG1a细胞凋亡。

大骨节病儿童及成人关节软骨细胞凋亡特征的比较

目的探讨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax在大骨节病(KDB)儿童和成人关节软骨中的表达及分布的异同。方法收集15例大骨节病儿童和12例大骨节病成人,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)法染色,比较正常儿童和成人与大骨节病儿童和成人关节软骨中软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2和Bax的表达。结果KDB儿童关节软骨中层凋亡阳性细胞数较正常关节软骨显著增多(P<0.01);成人KDB关节软骨凋亡阳性细胞分布以表、中层显著(P<0.05)。②KDB儿童关节软骨表、中层Bcl-2、Bax的表达显著高于正常关节软骨中的表达(P<0.01),其中表层最高。③KDB成人关节软骨各层Bcl-2、Bax的表达显著高于正常关节软骨中的表达(P<0.05),其中表层最高。④KBD成人关节软骨各层凋亡细胞、Bcl-2、Bax阳性表达率均较KBD儿童显著增高,且Bax的表达较Bcl-2表达增多。结论KBD成人关节软骨凋亡细胞、Bcl-2、Bax阳性表达率均较KBD儿童显著增高,且Bax的表达较Bcl-2表达增多。

绞股蓝总皂甙对肝细胞瘤细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨绞股蓝总皂甙(Gp)对人肝细胞瘤细胞(Huh-7)细胞凋亡的影响及作用机制。方法:采用流式细胞术检测Gp对人Huh-7细胞凋亡的影响,Western blot分析Gp作用Huh-7细胞后表达的Bcl-2,Bcl-XL,Bax和Bad蛋白水平。结果:20mg/ml Gp作用于细胞24h后,64％的Huh-7细胞发生凋亡,而人纤维细胞凋亡率为12％。Westem blot结果显示Gp作用后Huh-7细胞中Bcl-2表达明显降低,而Bax表达显著上调。结论:Gp可诱导人Huh-7细胞凋亡,其作用机制是通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而发挥作用。

十全大补配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓细胞细胞周期和细胞凋亡的影响

目的观察十全大补配方颗粒对骨髓抑制小鼠骨髓有核细胞的细胞周期、细胞凋亡及细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用60Co照射、环磷酰胺、氯霉素注射复合处理建立小鼠骨髓抑制模型后,给予十全大补配方颗粒进行治疗,采用流式细胞术(FCM),检测其对骨髓有核细胞的细胞周期和细胞凋亡率的影响;采用免疫组织化学的方法检测骨髓有核细胞凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax的表达情况。结果十全大补配方颗粒可促进骨髓细胞从G0/G1期向S期以及S期向G2/M期转化,升高其增殖指数;抑制骨髓细胞凋亡;上调骨髓Bc l-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达下调。结论十全大补配方颗粒可通过上调Bc l-2蛋白和下调Bax蛋白的表达,抑制骨髓细胞凋亡,提高骨髓细胞增殖指数,从而促进造血功能的恢复。

庆大霉素作用下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2及Bax的表达

目的探讨bcl-2蛋白家族与庆大霉素诱导耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的关系。方法对豚鼠进行庆大霉素连续肌肉注射,150mg/kg×10d,分别于停药后1、3、7、14d各处死豚鼠8只,取耳蜗,做平行蜗轴的石蜡切片,用免疫组织化学方法检测连续用药后不同时间耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2及Bax的表达变化情况。结果耳蜗螺旋神经节细胞bcl-2表达增强,3d时表达达到高峰,7d时有所下降,14d时bcl-2表达明显减弱;Bax的表达在3d时达到高峰,7d时表达较3d时下降,14d时Bax表达减弱。结论庆大霉素作用下,bcl-2和Bax表达发生变化,bcl-2蛋白家族参与了庆大霉素诱导的耳蜗螺旋神经节细胞凋亡。

Bcl-2、Bax、Cyt-C和Bid在原发性肝细胞癌中的表达及意义

目的观察Bc l-2、Bax、细胞色素C(Cyt-C)和B id在原发性肝细胞癌(PHC)组织中的表达并分析其与病理分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移间的关系。方法应用免疫组织化学法检测Bax以及应用原位分子杂交方法检测Bc l-2、Cyt-C和B id在50例PHC组织及30例正常肝脏组织(对照组)中的表达。结果 PHC组Bc l-2、Bax和B id的阳性表达率较对照组均明显下降(P<0.05或0.01),但Cyt-C阳性表达率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。高及中分化PHC组Cyt-C阳性表达率均明显高于低分化组(P<0.05和P<0.01),但不同病理分级和有无淋巴结转移组间差异未见统计学意义(P>0.05)。PHC不同病理分级、分化程度和有无淋巴结转移组间Bc l-2、Bax和B id表达比较均未见统计学意义(P>0.05)。结论 PHC促凋亡基因B id表达下调,同时Cyt-C随着PHC分化程度的降低而表达下调。

米非司酮对子宫肌层异位内膜组织细胞凋亡的影响

目的 :通过观察米非司酮对子宫肌层异位内膜组织细胞凋亡的影响 ,探讨子宫腺肌病的发病机制。方法 :确诊后的 5 0例患者 ,分成两组 ,实验组 2 5例 ,用药前行卵功、肝肾功能检查 ,结果回报正常后 ,给予口服 RU4 86 2 5 mg/ d,每日一次 ,连服 2 w。另外 2 5例为对照组。 5 0例患者均选择在月经增生期 ,月经后 3～ 7d,实验组开始服药 ,停药后立即手术 ;对照组住院后立即手术 ,手术切除子宫 ,取少许子宫异位内膜组织蜡块包埋待检。切除的子宫全部送病理。将 5 0块包埋的蜡块经处理后 ,采用原位末端酶标记技术检测细胞凋亡数 ,计算出凋亡指数 ,免疫组化法检测抗凋亡基因 Bcl- 2及促凋亡基因 Fas的表达水平。结果 :服米非司酮的实验组细胞凋亡指数平均为 11%± 9% ,而对照组细胞凋亡指数平均为 0± 0 .4 % ,两组比较有显著差异 ,P<0 .0 1。RU4 86可以下调 Bcl- 2基因 ,使其在子宫腺肌病患者子宫肌层的内膜中表达减低 ,Fas基因表达增强。结论 :米非司酮使子宫肌层异位内膜组织细胞凋亡指数增加 ,Bcl- 2表达降低 ,Fas表达增强。从而证实 ,米非司酮可诱导异位内膜组织细胞凋亡 ,抑制异位细胞生长 ,控制子宫腺肌病的发展 。

雷米芬太尼对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后期细胞凋亡因子的影响

目的:探讨雷米芬太尼对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后期细胞凋亡因子Bax和bcl-2蛋白及其mRNA表达的影响。方法:将90只雄性Wistar大鼠分为I、R、NR、N和C组。采用70%肝脏缺血再灌注损伤模型。在大鼠肝脏缺血前分别给予生理盐水(I组)、雷米芬太尼(R组和NR组)和纳络酮(NR组和N组)。测定肝脏缺血再灌注1h和12h时的血浆丙氨酸氨基转氨酶(ALT)活性、血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)水平以及再灌注12h时肝脏组织Bax和bcl-2蛋白及其mRNA的表达情况。结果:再灌注1h后R组的ALT活性和TNF-α水平以及再灌注12h后R组的Bax和bcl-2蛋白及其mRNA表达的比值均明显低于I组和NR组(P<0.05)。结论:雷米芬太尼可减少肝脏缺血再灌注后期阶段细胞凋亡因子Bax和bcl-2蛋白及其mRNA的表达比值。纳络酮仅能阻断部分雷米芬太尼的肝保护作用。

促红细胞生成素对急性心肌缺血再灌注后大鼠心肌凋亡基因表达影响的实验研究

目的观察促红细胞生成素(EPO)对急性心肌缺血再灌注心肌凋亡基因表达的影响,探讨EPO的心脏保护机制。方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型36只大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注对照组(IR组)和EPO组(EPO 3 000 U·kg-1·d-1,共3 d),每组12只。3组48 h、2周缺血边缘区心肌组织Bcl-2、Bax蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达(免疫组化法),以及相关基因mRNA的变化(RT-PCR法)。结果与IR组比较,EPO组Bcl-2蛋白表达在48 h、2周、分别增高27.7%、31.4%(P<0.01);Bax蛋白表达在48 h、2周均降低,分别降低20.9%、18.0%(P<0.01);Bcl-2/Bax比值在各时间点均显著增高(P<0.05);EPO组VEGF蛋白表达在48 h、2周均增高,分别增高22.1%、21.4%(P<0.05或<0.01)。与IR组比较,EPO组Bcl-2/BaxmRNA比值在各时间点均显著增高(P<0.05)。结论 EPO可能通过调节Bcl-2、Bax的表达而减少细胞凋亡,抑制缺血而灌注损伤,产生对心脏的保护作用。

肝肽、脾肽对荷瘤裸鼠肿瘤细胞中Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察两种抗癌生物活性肽对荷瘤裸鼠肿瘤细胞中Bcl-2、Bax表达的影响。方法:建立人胃癌裸鼠模型,裸鼠随机分为三组:对照组11只、脾肽实验组12只,肝肽实验组11只;分别尾静脉注射生理盐水0.2mL、脾肽0.2mL,肝肽0.2mL,隔日给药2wk后处死裸鼠,剥取肿瘤,以4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,4μm切片。应用免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白在实验组与对照组中的表达情况。结果:Bcl-2蛋白在对照组肿瘤中阳性表达较强,肝肽、脾肽组裸鼠肿瘤中Bcl-2蛋白的表达均比对照组表达弱,且有显著性差异(P<0.001);Bax蛋白在对照组肿瘤中阳性表达较弱,在肝肽组、脾肽组裸鼠肿瘤中Bax蛋白的表达均比对照组的表达强,有显著性差异(P<0.001)。结论:肝肽、脾肽具有较好的抑制荷胃癌裸鼠肿瘤生长的作用,其作用机制与影响Bcl-2及Bax的表达相关。

前列舒通对前列腺增生模型大鼠bcl-2表达的影响

目的:探讨前列舒通对前列腺增生模型大鼠bcl-2表达的影响,观察其对良性前列腺增生的治疗效果。方法:观察前列舒通对由丙酸睾酮诱导的去势大鼠前列腺增生模型后的前列腺指数、bcl-2(抑制细胞凋亡因子)表达以及前列腺组织病理学改变。结果:前列舒通各浓度组前列腺指数、bcl-2表达均明显低于模型组。结论:前列舒通能显著降低良性前列腺增生模型大鼠的bcl-2表达,从而抑制前列腺细胞增殖和促进凋亡而实现抑制良性前列腺增生。

Regulation of Bcl-2 Family in TIP30-Induced Apoptosis in Hepatoblastoma Cells

Objective: To investigate the role of TIP30 in the apoptotic signal pathwayin HepG2, and Hep3B and Hu-7 hepatoblastoma cell lines. Methods: In order to confirm whether TIP30conducted Bcl-2 family was involved in apoptosis signal pathway, MTT assay, in situ 3' end labellingof DNA assay and Western blot were carried out to detect the diverse apoptotic function of TIP30and the regulation of Bcl-2 family. Results: TIP30 induced apoptosis as evidenced by morphologicalchanges in hepatoblastoma cells, which was accompanied by up-regulating Bax and Bad proteins andstimulating them from cytoplasm to mitochondria, and down-regulating Bcl-xl, while it had no effecton the level of Bak protein. Conclusion: TIP30 induced apoptosis partly by modulating the proteinlevels of members of Bcl-2 family in hepatoblastoma cells. Elucidating the mechanism by which TIP30induces cell death might establish it as an anticancer factor.

临产前后胎盘组织bcl-2、Fasl的表达与母血、羊水EGF变化的关系

目的探讨临产前后bc l-2、Fasl在胎盘滋养层细胞的蛋白表达变化及其与母血、羊水中表皮生长因子(EGF)的浓度之间的关系。方法53例足月妊娠妇女分成两组,其中临产组28例,未临产组25例。用免疫组化法测定胎盘滋养层细胞bc l-2、Fasl的蛋白表达,用放射免疫法测定孕妇母血、羊水中EGF的浓度。结果(1)临产组bc l-2、Fasl的表达明显低于未临产组(P<0.05)。(2)临产组母血、羊水EGF水平高于未临产组(P<0.05)。(3)母血、羊水中EGF的变化与bc l-2的表达呈负相关,而与Fasl的表达不相关。结论bc l-2、Fasl介导的胎盘滋养层细胞凋亡在启动分娩发动过程中具有重要作用;EGF可能对bc l-2的表达存在下调作用。