Bcl-2结合抗凋亡基因沉默对缺氧状态下人神经母细胞瘤细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响

目的探讨Bcl-2结合抗凋亡基因（BAG-1）对缺氧／再复氧损伤后人神经母细胞瘤细胞（SH—SY5Y）的保护作用，以及对热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。方法取对数生长期的SH—SY5Y细胞，采用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术抑制BAG-1表达。将筛选好的细胞分为细胞对照组、慢病毒对照组（仅含荧光蛋白的慢病毒感染组）、BAG-1小干扰RNA（siRNA）组（即BAG-1基因沉默组，感染含BAG-1基因干扰序列及荧光蛋白的慢病毒），根据沉默序列不同分为BAG-1 siRNA—α组、BAG-1 siRNA-β组。感染重组慢病毒后72h采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测SH—SY5Y细胞中BAG-1和HSP70蛋白表达；缺氧处理后采用CCK-8测定各组细胞活性；用流式细胞仪检测细胞凋亡情况；用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT—qPCR）检测各组细胞HSP70转录水平。结果慢病毒感染后72h，Western Blot检测结果表明BAG-1 siRNA—β组干扰效果优于BAG-1 siRNA-α组。各组细胞活性均随缺氧时间延长而呈先增强后减弱的趋势，且于8h时达峰值。经缺氧处理8h后，BAG—1 siRNA—β组细胞活性[吸光度（A）值]明显低于细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组（0．59±0．09比0．94±0．12、0．90±0．11、0．91±0．14，均P〈0．01）；BAG—1 siRNA-β组凋亡细胞率明显高于细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组[（34．63±3．46）％比（14．83±3．75）％、（19．93±6．49）％、（16．40±1．18）％，均P〈0．01]。BAG-1 siRNA—β组HSP70蛋白及mRNA转录水平与细胞对照组、慢病毒对照组及BAG-1 siRNA-α组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论BAG-1基因在缺氧神经细胞中能够发挥保护作用，减少细胞凋亡，其保护作用可以独立于HSP70基因。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

胶质瘤组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3表达及其对U87细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)表达及其对U87细胞增殖和侵袭能力的影响。方法选取2011年4月至2017年4月于新乡市中心医院手术切除的胶质瘤组织及癌旁组织(距瘤旁边缘>2 cm)标本各73例,采用免疫组织化学法检测胶质瘤组织和癌旁组织中BAG3蛋白表达;培养人胶质瘤U87细胞,待细胞融合度达70%以上时随机分为siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组,siRNA-BAG3组细胞转染BAG3干扰序列,siRNA-对照序列组细胞转染阴性对照序列,空白对照组细胞不作任何处理,转染后继续培养48 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测U87细胞中BAG3 mRNA表达,Western blot法检测U87细胞中BAG3蛋白表达,细胞计数试剂盒-8检测U87细胞增殖情况,克隆形成实验检测U87细胞克隆能力,流式细胞仪检测U87细胞凋亡情况,Transwell小室检测U87细胞侵袭能力。结果胶质瘤组织中BAG3蛋白高表达率为73.97%(54/73),低表达率为26.03%(19/73);癌旁组织中BAG3蛋白高表达率为36.99%(27/73),低表达率为63.01%(46/73);胶质瘤组织中BAG3蛋白高表达率显著高于癌旁组织(χ~2=20.215,P<0.05)。胶质瘤组织中BAG3蛋白表达与患者的年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤直径及Karnofsky评分无关(P>0.05),而与肿瘤分级有关(P<0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞中BAG3 mRNA相对表达量分别为1.42±0.11、2.17±0.12和2.31±0.18;siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞中BAG3蛋白相对表达量分别为0.20±0.12、0.84±0.13和0.92±0.12;siRNABAG3组U87细胞中BAG3 mRNA及蛋白相对表达量显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞中BAG3 mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72、96 h时,siRNA-BAG3组U87细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组U87细胞克隆形成数分别为30.76±6.19、81.32±3.55、85.07±3.05;siRNA-BAG3组U87细胞克隆形成数显著少于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组U87细胞克隆形成数比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组细胞凋亡率分别为(21.43±6.89)%、(5.50±2.95)%、(7.37±3.31)%;siRNA-BAG3组细胞凋亡率显著高于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);siRNA-对照序列组与空白对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-BAG3组、siRNA-对照序列组和空白对照组侵袭细胞数分别为116.92±8.82、179.00±11.64、172.48±18.16,siRNA-BAG3组侵袭细胞数显著少于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05),siRNA-对照序列组与空白对照组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BAG3蛋白在胶质瘤组织中呈高表达,且与肿瘤恶性程度有关,特异性沉默人胶质瘤U87细胞中BAG3基因可有效抑制细胞增殖及侵袭能力。

胆管癌中抗凋亡基因 bcl-2的表达及意义

采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法检测抗凋亡基因ｂｃｌ－２在７２例胆管癌中的表达，２５例肝细胞肝癌的癌旁肝组织汇管区胆管上皮作为对照。结果ｂｃｌ－２在５３例高、中分化胆管癌中的表达强于在１９例低分化胆管癌的表达（Ｐ＜０．０１），在３７例肝内胆管癌的表达强于在３５例肝外胆管癌的表达（Ｐ＜０．０５），在全部胆管癌中的表达与对照组无显著差异（Ｐ＞０．０５），提示ｂｃｌ－２在胆管癌中表达与其分化有关，且其抗凋亡作用在肝内、外胆管癌中可能存在差异。

抗凋亡基因bcl-2在大肠癌中的表达及意义

本研究采用免疫组织化学ＳＡＢＣ法对７７例大肠癌ｂｃｌ－２进行了检测。结果表明，在７７例大肠癌中，ｂｃｌ－２阳性６７例（８７．０１％）；在作为对照的５７例癌周组织中，ｂｃｌ－２阳性占４７例（８２．４５％）；在４６例高分化的大肠癌中，比１５例低分化腺癌表达要强（Ｐ＜０．０１）。结论：ｂｃｌ－２在绝大部分大肠癌中都有表达，这表明其参与了大肠癌的凋亡调控，其表达与大肠癌的分化有关。

抗凋亡基因Bcl-2在肺癌组织中的表达及意义

目的：探讨抗凋亡基因Bcl－2与肺癌发生、发展的关系。方法：应用免疫组化SABC法检测Bcl－2蛋白在75例肺癌组织中的表达情况，并与癌旁组织和正常肺组织进行对比，结合肺癌的病理特征及预后进行分析。结果：正常肺组织、癌旁组织和肺癌组织中Bcl－2蛋白的阳性表达率分别为8．3％、83．3％和48．0％；Bcl-2蛋白表达与肺癌组织学类型和分化程度无关（P＞0．05），而与肺癌临床分期呈负相关（P＜0．05），与患者生存时间里正相关（P＜0．05）。结论：Bcl－2基因表达与肺癌发生密切相关，Bcl－2基因在肺癌中具有普遍意义，Bcl－2蛋白过度表达是肺癌的早期表现，可作为判断肺癌生物学行为和预后的一个重要参考指标。

重组人血管内皮抑素联合紫杉醇化疗对人乳腺癌MDA-MB-435细胞抗凋亡基因Bcl-2的影响

目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)联合紫杉醇对人乳腺癌MDA-MB-435细胞抗凋亡基因Bcl-2的影响。方法将BALB/c裸鼠32只进行细胞培养,随机分为4组,其中3个化疗组(恩度组、紫杉醇组及恩度联合紫杉醇组)和1个对照组,每组8只。化疗组为腹腔注射给药,第1、8天各给药1次,给药剂量:恩度10 mg/kg、紫杉醇注射液10 mg/kg。对照组腹腔注射生理盐水,第1、8天各注射1次。给药15 d后处死小鼠并取出瘤体,将瘤体组织行HE染色和免疫组化SP法染色。原位末端标记法检测细胞凋亡,并计算癌细胞凋亡指数(AI)。结果恩度组、紫杉醇组及恩度联合紫杉醇组Bcl-2表达均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。恩度联合紫杉醇组Bcl-2表达分别显著低于恩度组、紫杉醇组,差异有统计学意义(P<0.05)。恩度组、紫杉醇组及恩度联合紫杉醇组AI均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。恩度联合紫杉醇组AI分别显著高于恩度组、紫杉醇组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗凋亡基因Bcl-2可能参与了乳腺癌的发生、发展过程,恩度联合紫杉醇化疗可降低Bcl-2表达,促进乳腺癌细胞凋亡,因此,Bcl-2水平检测在恩度联合紫杉醇治疗乳腺癌效果及预后评估中有重要的参考价值。

红花注射液对大鼠心脏能荷值及抗凋亡基因bcl-2的影响

目的 探讨红花注射液的心脏保护作用及其对心肌组织能荷值、抗细胞凋亡基因bcl-2的影响。方法 采用大鼠Langendorff离体心脏灌注模型,在改良的Euro-Collins心脏保存液(mEC液)中添加红花注射液与单纯mEC液作对照,观察其对保存心脏的心功能、能荷值及bcl-2表达的影响。结果 与对照组比较红花注射液可改善大鼠心脏的收缩和舒张功能,增加冠脉流量,增强bcl-2的蛋白表达。结论 红花注射液具有很好的心脏保护作用。

抗细胞凋亡基因BcL-2和Bax与卵巢肿瘤的关系

目的研究抗凋亡基因ＢｃＬ－２和凋亡基因Ｂａｘ与卵巢肿瘤发生及预后的关系。方法通过免疫组化方法，用抗ＢｃＬ－２和Ｂａｘ的抗体检测７２份卵巢肿瘤标本ＢｃＬ－２和Ｂａｘ的表达产物，并以正常卵巢１２份做对照。结果正常卵巢组织中ＢｃＬ－２和Ｂａｘ的阳性检出率为零。在良性及恶性肿瘤组织中ＢｃＬ－２的阳性检出率分别为１８／３０、６／４２，良恶性之间差异有显著性；Ｂａｘ的阳性检出率分别为５／３０、２２／４２，良恶性之间差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ＢｃＬ－２在恶性肿瘤ＷＨＯ分级Ⅰ－－Ⅲ级间差异无显著性，Ｂａｘ在病理分级ＷＨＯⅠ－Ⅲ级间差异有显著性。结论 抗凋亡基因ＢｃＬ－２和凋亡基因Ｂａｘ的过度表达可能与卵巢肿瘤的发生有关，但是其细胞凋亡的机制及调控方式与非肿瘤组织和其它部位的肿瘤有所不同。推测Ｂａｘ不仅参与细胞凋亡的调控，而且可能与肿瘤分化及预后有关。

职业接触抗肿瘤药物对护士外周血淋巴细胞凋亡及Fas bcl-2基因表达的影响

目的探讨职业接触抗肿瘤药物对护士外周血淋巴细胞凋亡及Fas、bcl-2基因表达的影响。方法选择接触抗肿瘤药物5年以上,每日接触5人次以上的护士为接触组;无抗肿瘤药物接触史的健康志愿者为对照组。抽取接触组及正常对照组外周静脉血各2ml,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,利用流式细胞仪技术观察外周血淋巴细胞凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达。结果接触组外周血淋巴细胞凋亡率明显增高(P<0.05);接触组Fas基因的表达明显增高(P<0.01);而bcl-2基因表达差异无统计学意义。结论抗肿瘤药物能促进职业接触护士外周血淋巴细胞的凋亡和Fas基因的表达。

含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定

目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。

B淋巴细胞瘤-2结合抗凋亡基因1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)结合抗凋亡基因1(Bcl-2-associated athanogene 1,BAG-1)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化SP二步法,检测2009年9月至2021年9月年安徽医科大学第二附属医院的212例人脑胶质瘤标本以及10例正常脑组织标本中的BAG-1的表达,分析其与临床病理及预后的关系。结果检测到BAG-1总体的阳性表达率为61.3%,BAG-1在低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ级)阳性表达率分别为48.4%和71.1%(P=0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的病人的中位生存时间分别为60个月和17个月(P<0.001)。BAG-1表达阴性和阳性的高级别胶质瘤病人中位生存时间分别为31个月和11个月(P<0.001)。BAG-1阴性和阳性表达的病人无进展中位生存时间分别为26个月和8个月(P=0.001)。结论BAG-1在人脑胶质瘤中高表达,与肿瘤的病理分级呈正相关,与病人生存时间呈负相关,BAG-1可能成为预测胶质瘤预后及化疗疗效的重要分子标志物。

凋亡相关基因产物Fas抗原及bcl-2蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达

目的：了解Ｆａｓ 抗原及ｂｃｌ２ 蛋白在甲状腺肿瘤组织中表达的意义。方法：用流式细胞技术对１４ 例乳头状甲状腺癌，１６例甲状腺腺瘤及３２ 例结节性甲状腺肿组织中Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白的表达进行检测。结果：上述３ 组织中均测到Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白。３ 种组织中Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白表达没有统计学差异（Ｆ＝２．７８，Ｐ＞０．０５；Ｆ＝２．５６，Ｐ＞０．０５）。乳头状甲状腺癌组织Ｆａｓ 抗原表达与ｂｃｌ２ 蛋白表达有明显相关性（ｒ＝０．６４６，Ｐ＜０．０５），其他两种组织中Ｆａｓ 抗原与ｂｃｌ２ 表达均无相关性（ Ｐ＞０－０５）。结论：上述３ 种组织中均有Ｆａｓ 抗原和ｂｃｌ２ 蛋白的表达，均参与了甲状腺肿瘤组织中细胞凋亡的调节。细胞凋亡异常与乳头状甲状腺癌的发生有密切关系。

宫颈癌组织中Bcl-2相关抗凋亡基因3表达及意义

目的探讨Bcl-2相关抗凋亡基因3(BAG3)在宫颈癌组织中的表达情况及临床意义。方法分别采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR技术,检测103例宫颈癌(宫颈癌组)、50例子宫颈上皮内瘤变(CIN组)和40例正常宫颈(对照组)组织中BAG3蛋白和BAG3基因的表达情况。利用Kaplan-Meier生存曲线分析BAG3蛋白表达对宫颈癌病人生存时间的影响。结果宫颈癌组BAG3蛋白阳性率均高于CIN组和对照组,差异有统计学意义(χ2=27.167、28.514,P<0.01);宫颈癌组BAG3mRNA相对表达量均高于CIN组和对照组,差异有统计学意义(t=30.453、26.295,P<0.01);宫颈癌组BAG3蛋白和mRNA表达量均与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移和肌层浸润有关(χ~2=4.691~7.530,P<0.05;t=28.825~35.696,P<0.01);Kaplan-Meier生存分析显示,BAG3蛋白阳性表达组平均生存时间为37.96个月,BAG3蛋白阴性表达组则为53.70个月,Log-Rank检验差异有统计学意义(χ2=4.555,P<0.05)。结论 BAG3在宫颈癌组织中呈高表达,可能参与了宫颈癌的发生发展和侵袭转移过程,并与病人的预后密切相关。因此,BAG3有望成为宫颈癌诊断及预后判断的潜在生物学标志物。

抗凋亡基因bcl-2在肺癌组织中的表达及意义

ｂｃｌ－２基因是近年发现的第三类肿瘤基因，是一种调控细胞死亡的“存活基因”，可抑制编程性细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ），又称细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ），故称之为抗凋亡基因。细胞凋亡发生障碍，可导致细胞堆积，而形成肿瘤。本...

大鼠输精管阻断及复通后抗凋亡基因Bcl-2转录水平的研究

目的 :为研究大鼠输精管阻断和阻断解除复通前后生精细胞凋亡变化中 ,Bcl-2基因转录水平的变化 ,进一步探讨 Bcl-2基因转录水平变化与生精细胞凋亡间的关系。方法 :采用高敏感性的 Bcl-2单链 RNA探针行原位杂交 ,分析了输精管阻断和复通前后大鼠睾丸生精细胞 Bcl-2 m RNA水平的变化。结果 :大鼠输精管阻断后睾丸生精细胞 Bcl-2m RNA的表达被显著抑制 ( P<0 .0 5) ,在复通后 Bcl-2 m RNA的表达可以恢复 ,与假手术对照组的表达无显著差异。结论 :Bcl-2基因在大鼠输精管复通后减轻生精细胞凋亡中发挥了抗凋亡作用 ;在大鼠输精管阻断及复通过程中存在着 Bcl-2基因转录水平的调节。

凋亡抑制基因Bcl-2和增殖细胞核抗原在乳腺导管浸润癌中的表达及意义

目的 :探讨凋亡抑制基因 Bcl- 2和增殖细胞核抗原 ( PCNA)在乳腺导管浸润癌中的表达及与各临床参数的关系。方法 :免疫组织化学染色法对 35例乳腺导管浸润癌患者进行检测。结果 :Bcl- 2和 PCNA蛋白表达均为 68.6% ;Bcl- 2表达与癌组织分级及有无淋巴结转移呈负相关( P<0 .0 1 ) ,与雌激素 ( ER)水平及 5年生存期呈正相关 ( P<0 .0 1 ) ,与肿物大小无关 ;PCNA表达与癌组织分级及肿物大小呈正相关 ( P<0 .0 5 ) ,与 ER水平及 5年生存期呈负相关 ( P<0 .0 5 ) ,与淋巴结有无转移无关 ;Bcl- 2与 PCNA表达呈负相关。结论 :Bcl- 2高表达、ER水平高、PCNA表达低者生存期长、预后好 ,Bcl- 2和

细胞程序性死亡及抗凋亡基因bcl-2在C57BL6N系小鼠腭裂形成中的意义

目的通过观察细胞程序性死亡ProgrammedcelldeathPCD在腭突发育及腭裂形成中的差异相关基因bcl-2的表达探讨两者在腭裂发生中的意义方法利用建立的腭裂模型用原位末端转移酶标记、原位杂交技术检测PCD的发生和bcl-2基因表达变化结果实验组小鼠在腭突垂直生长期、上抬期中PCD明显多于对照组p<0.01且bcl-2的表达相应增高两者之间具有密切的相关性p<0.