缺氧诱导因子1α、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3在儿童创伤性脑损伤中的表达及意义

目的动态观察缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19kDa-interacting protein 3,BNIP3)在儿童创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)中的变化,并评估其预测儿童TBI病情轻重及预后的临床价值。方法前瞻性纳入2021年1月—2023年7月47例中重度TBI患儿为研究对象,根据格拉斯哥昏迷评分分为中度亚组(9~12分)和重度亚组(3~8分);以同期因腹股沟斜疝诊治且无基础疾病的30例患儿为对照组。比较各组HIF-1α、BNIP3、自噬相关蛋白Beclin-1及S100B水平的差异,采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B对TBI病情轻重及预后的预测价值。结果TBI组患儿血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于对照组(P<0.05);TBI患儿中,重度亚组HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于中度亚组(P<0.05)。相关性分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平与格拉斯哥昏迷评分呈负相关(P<0.05)。治疗7 d后,非手术TBI和手术TBI患儿的血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B水平均较治疗前下降(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平预测重度TBI的曲线下面积分别为0.782、0.835、0.872、0.880(P<0.05),预测TBI预后不良的曲线下面积分别为0.749、0.775、0.814、0.751(P<0.05)。结论TBI患儿血清HIF-1α、BNIP3及Beclin-1水平显著升高,检测其水平有助于临床判断TBI患儿的病情轻重及预后。

电针对继发性脊髓损伤后大鼠神经元自噬及相关蛋白轻链3Ⅱ和bcl-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白3表达的影响

目的观察电针治疗对大鼠继发性脊髓损伤(SCI)后神经元自噬及相关蛋白表达的影响。方法健康SD大鼠随机分为对照组、模型组、西药组(甲泼尼龙治疗)及电针组(电针大椎、命门穴治疗)4组;除对照组外,其他3组均采用改良的Allen打击装置(50 g/cm)复制大鼠T10~11中度SCI模型。分别于SCI后6 h、1 d、7 d取损伤局部脊髓组织,经透射电子显微镜及Western印迹法,观察各组SCI后神经元自噬的病理变化及轻链(LC)3Ⅱ、bcl-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白(BNIP)3的表达。结果 1SCI后1 d脊髓组织中LC3Ⅱ、BNIP3表达明显升高(P<0.01);电针组和西药组SCI后脊髓组织中LC3Ⅱ、BNIP3的表达显著降低,与模型组差异显著(P<0.01);西药组与电针组差异不显著(P>0.05)。2在透射电镜观察下,对照组脊髓组织神经元细胞核膜完整,胞质中线粒体形态分布及数目正常,未发现自噬小体,溶酶体数目也未见增多;模型组脊髓组织可见线粒体肿胀明显、空泡化,溶酶体数量增多,细胞核形不规则,可发现自噬小体;西药组和电针组可见脊髓组织神经元细胞肿胀,线粒体也略肿胀,核形规则,核内染色质欠均匀,溶酶体数目未见明显增多。结论电针可降低SCI大鼠脊髓组织中LC3Ⅱ和BNIP3的表达,抑制细胞自噬,减缓脊髓损伤后的病理损害,其作用与甲泼尼龙相仿。

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

Bcl-2腺病毒/E1B 19kD相互作用蛋白3对弥漫性轴索损伤后少突胶质细胞凋亡的调控作用

目的探讨Bcl-2腺病毒/E1B 19kD相互作用蛋白3(BNIP3)对大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)后少突胶质细胞凋亡的调控作用。方法 77只SD雄性成年大鼠随机分为假手术组(11只)、DAI组(33只)及干预组(33只)。参照Marmarou方法制做DAI模型,干预组大鼠在打击后立即给予脑室注射BNIP3抑制剂necrostatin-1 (Nec-1,30 g/L,2μl),检测Nec-1干预前后DAI大鼠BNIP3蛋白表达,少突胶质细胞凋亡以及髓鞘的组织病理学变化。结果与假手术组相比,大鼠DAI损伤后脑干组织BNIP3表达上调,且与细胞凋亡成正相关;Nec-1干预有效降低DAI大鼠少突胶质细胞BNIP3蛋白表达,显著减少DAI大鼠少突胶质细胞凋亡的数目,提高DAI大鼠脑干髓鞘劳克坚牢蓝(LFB)染色平均吸光度和髓鞘碱性蛋白(MBP)表达,改善DAI大鼠脑干髓鞘的超微结构。结论 BNIP3参与DAI诱导的少突胶质细胞凋亡,抑制BNIP3可保护DAI大鼠少突胶质细胞和髓鞘。

Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相关蛋白3在手足口病中表达的临床意义

目的探讨重症手足口病(HFMD)患儿血清及脑脊液Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相关蛋白3(BNIP3)的表达水平及其临床意义。方法90例HFMD患儿分为危重型组(临床分期3期)、重型组(临床分期2期)和经脑脊液等检查排除中枢神经系统感染的普通型组(临床分期1期),每组30例;另选取同期健康体检的30例儿童作为对照组。测定HFMD患儿治疗前后血清及脑脊液BNIP3水平,并同时测定患儿血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100B蛋白水平,分析其与BNIP3相关性。采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价BNIP3对HFMD病情严重程度的预测效能。结果危重型组患儿血清BNIP3及S100B蛋白、NSE水平均显著高于其他3组(P<0.01),危重型组患儿脑脊液BNIP3水平显著高于其他2组HFMD患儿(P<0.01);重型组患儿血清BNIP3及S100B蛋白、NSE水平均较普通型和对照组明显升高(P<0.01),重型组脑脊液BNIP3水平亦较普通型组明显升高(P<0.01)。与治疗前相比较,危重型组和重型组治疗后血清和脑脊液BNIP3水平及血清S100B蛋白、NSE水平明显下降(P<0.01)。血清及脑脊液BNIP3水平与S100B蛋白、NSE水平呈正相关(P<0.01)。当血清BNIP3在3.015μg/L时其Youden值最大,对重型HFMD预测的灵敏度为83.33%,特异度为90.00%,脑脊液BNIP3在1.735μg/L时其Youden值最大,对重型HFMD预测的灵敏度为73.33%,特异度为93.33%。结论BNIP3与重症HFMD脑损伤的病理过程相关,检测BNIP3水平有助于判断HFMD病情严重程度及预后。

DNA甲基化和缺氧对食管癌细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B19000相互作用蛋白3基因表达的影响

目的 观察DNA甲基化及缺氧与沉默缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对食管癌细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3（BNIP3）基因表达的影响.方法 收集食管癌细胞株KE4、Kyse-140、Caes-17和TE-7,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot分别检测BNIP3 mRNA和蛋白表达水平,甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测BNIP3启动子区甲基化状态.MIC-101乏氧培养系统模拟肿瘤缺氧微环境,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和Western blot检测缺氧（1％O2）、常氧及小干扰RNA（siRNA）沉默HIF-1α后Caes-17细胞中BNIP3mRNA和蛋白表达水平.结果 BNIP3在KE4和Caes-17细胞中表达水平均较高,而在TE-7和Kyse-140细胞中表达较低;同时MSP结果显示,在TE-7和Kyse-140细胞中BNIP3启动子区发生了明显的甲基化,经5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理2个细胞株后,BNIP3启动子区甲基化状态得到了逆转,同时其表达水平显著升高.缺氧条件下,Caes-17细胞中BNIP3 mRNA （4.35±0.20）和蛋白（1.23±0.04）的表达水平较常氧时（BNIP3 mRNA：1.07 ±0.12,BNIP3蛋白：0.28 ±0.03）显著升高（P＜0.05）,siRNA转染Caes-17细胞后能显著下调HIF-1α的表达（抑制率为90％）,并导致BNIP3基因的表达（BNIP3 mRNA：1.12 ±0.14,BNIP3蛋白：0.34±0.03）受到明显的抑制.结论 BNIP3基因启动子区甲基化是导致其在食管癌细胞中表达较弱的重要原因之一,甲基化酶抑制剂可逆转BNIP3的甲基化状态重新恢复其表达;缺氧能使HIF-1α蛋白的表达升高,同时上调BNIP3的表达水平.

B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19kDa相互作用蛋白3介导的线粒体自噬机制及其调控肌源性挛缩发生的研究进展

线粒体自噬是一种自噬的形式,是目前已知的选择性清除线粒体的途径。近年来,B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)因其在线粒体自噬中的潜在作用而备受关注。尽管对BNIP3在线粒体自噬中的调控机制认识不断增加,但在肌源性挛缩的发生过程中,BNIP3介导的线粒体自噬的作用及其机制仍知之甚少。在肌源性挛缩发生过程中,典型的病理特征表现为骨骼肌萎缩和纤维化。因此,本文对BNIP3及其在线粒体自噬中的调控机制进行了系统回顾,并对BNIP3介导的线粒体自噬影响骨骼肌萎缩和纤维化的研究进行了综述,以期为肌源性挛缩的治疗提供新的思路。

miR-27b靶向BNIP3对缺氧复氧心肌细胞Wnt/β-catenin通路及自噬的影响

目的探讨微小RNA-27b(miR-27b)靶向B淋巴细胞瘤(Bcl)-2/腺病毒E1B 19-kD相互作用蛋白(BNIP)3对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞Wnt/β-catenin通路及自噬的影响。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,设置正常对照组(H9c2细胞正常培养)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+NC组(H9c2细胞转染无序siRNA后经H/R处理)和H/R+miR-27b siRNA组(H9c2细胞转染miR-27b siRNA后经H/R处理)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达情况;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组H9c2细胞凋亡情况;Western印迹法检测各组H9c2细胞中BNIP3、轴抑制因子(Axin)1、β-连环蛋白(catenin)、微管相关蛋白1轻链(LC)3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,H/R组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达水平、细胞凋亡率、BNIP3、Axin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),细胞吸光度(OD)值、β-catenin、LC3Ⅰ蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);H/R组与H/R+NC组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达水平、细胞OD值、细胞凋亡率、BNIP3、Axin1、β-catenin、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与H/R组、H/R+NC组相比,H/R+miR-27b siRNA组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达水平、细胞凋亡率、BNIP3、Axin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),细胞OD值、β-catenin、LC3Ⅰ蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论沉默miR-27b表达后可抑制BNIP3水平,激活Wnt/β-catenin信号转导通路,并抑制自噬过程。

miR-27b靶向BNIP3对缺氧/复氧心肌细胞β-catenin通路的影响

目的探讨微小RNA-27b(miR-27b)靶向Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞β-catenin通路的影响。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞,设置正常对照组(H9c2细胞正常培养)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+NC组(H9c2细胞转染无序siRNA后经H/R处理)和H/R+miR-27b siRNA组(H9c2细胞转染miR-27b siRNA后经H/R处理)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达情况;蛋白印迹(WB)法检测各组H9c2细胞中BNIP3、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达情况。结果H/R组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达水平、BNIP3表达水平均高于正常对照组(P<0.05),β-catenin蛋白表达水平均低于正常对照组(P<0.05);H/R组与H/R+NC组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达水平、BNIP3、β-catenin蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与H/R组、H/R+NC组相比,H/R+miR-27b siRNA组H9c2细胞中miR-27b、BNIP3 mRNA表达水平、BNIP3蛋白表达水平较低(P<0.05),β-catenin蛋白表达水平较高(P<0.05)。结论沉默miR-27b表达后可抑制BNIP3水平,激活β-catenin信号转导通路。

Bcl-2/腺病E1B 19kD蛋白相互作用蛋白3类似物对PC12细胞线粒体自噬的作用

目的探讨Bcl-2腺病E1B 19kD蛋白相互作用蛋白3类似物(也称NIX)介导PC12细胞线粒体自噬的可能机制。方法PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)放置于含体积分数1%O2的缺氧培养箱中培养,建立细胞缺氧损伤模型。分为常氧组和不同时相点缺氧损伤组(缺氧6,12,24,48 h组)。Western blot检测缺氧不同时相点NIX、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、线粒体外膜转位酶20(TOMM20)和细胞色素C氧化酶4(COX4)的表达水平。电镜观察PC12细胞缺氧24 h后细胞中自噬体的形成。激光共聚焦显微镜观察NIX过表达48 h后细胞中线粒体-NIX-LC3-自噬体膜复合体的形成。免疫共沉淀(CoIP)检测NIX与LC3之间的相互作用。激光共聚焦显微镜观察抑制NIX对线粒体形态的影响。PC12细胞分为常氧组、常氧+NIX抑制组、缺氧组、缺氧+NIX抑制组Western blot检测抑制NIX后各组NIX、LC3、TOMM20、COX4蛋白的表达变化。结果PC12细胞缺氧24 h后NIX和LC3的表达量与常氧组相比明显升高[(0.44±0.03)∶(0.21±0.01)、(1.04±0.03)∶(0.32±0.01)](P均<0.05);TOMM20和COX4的表达量在缺氧24 h后较常氧组明显降低[(0.78±0.07)∶(1.46±0.08)、(0.52±0.04)∶(0.98±0.06)](P均<0.05)。电镜观察发现,缺氧24 h后细胞中有包含线粒体的自噬体形成。激光共聚焦检测发现,NIX过表达48 h后细胞中线粒体-NIX-LC3-自噬体膜复合体的形成。CoIP检测发现,NIX与LC3之间存在相互作用。激光共聚焦显微镜观察发现,与缺氧组相比,抑制NIX能保存缺氧条件下线粒体的完整性。Western blot检测发现,与缺氧组相比,缺氧+NIX抑制组中NIX和LC3-II的表达[(0.80±0.02)∶(1.18±0.06)、(0.68±0.05)∶(0.97±0.13)](P均<0.05),使TOMM20和COX4的表达量升高[(0.78±0.06)∶(0.69±0.08)、(0.81±0.07)∶(0.81±0.07)](P均<0.05)。结论在PC12细胞中NIX与LC3相互作用介导线粒体自噬的发生,抑制NIX能保存缺氧条件下线粒体的完整性、降低自噬水平,为线粒体提供保护作用。

BNIP3 HIF-1α在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义＊

目的:初步探讨BCL-2/腺病毒E1B 19 kDa相关蛋白3(BCL2/adenovirus E1B19 kd-interacting protein3,BNIP3)和乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌(ESCC)中表达及其与临床病理之间的关系和意义。方法:采用免疫组织化学S-P方法分别测定食管鳞癌组织和切端正常食管黏膜组织芯片的BNIP3、HIF-1α的表达水平。运用统计学方法对比分析BNIP3和HIF-1α在食管鳞癌组织和切端正常黏膜组织中的表达以及BNIP3和HIF-1α与肿瘤原发病灶部位、肿瘤浸润深度(T分期)、TNM分期、淋巴结转移(含淋巴侵犯)、肿瘤组织分化程度(分级)等临床病理特征之间的关系。结果:BNIP3表达在细胞质中,HIF-1α表达在细胞核和细胞质中。食管鳞癌组织中BNIP3蛋白表达阳性率37.5%(27/72),明显低于正常切端组织的60%(18/30)(P=0.037);HIF-1α蛋白表达阳性率52.7%(38/72),明显高于正常切端组织的13.3%(4/30)(P<0.001)。BNIP3蛋白表达与食管癌的肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关(P=0.035、P=0.048、P=0.033)。HIF-1α蛋白表达亦与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关(P=0.023、P=0.004、P=0.002)。并且,BNIP3表达与HIF-α表达呈负相关(r=-0.274,P=0.020)。结论:在食管鳞癌中,BNIP3与HIF-1α的表达密切相关,且均与肿瘤的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关。因此,联合检测BNIP3和HIF-1α,有助于食管鳞癌的辅助诊断、病期评价及预后判断。

胃癌组织中BNIP3基因甲基化及其与DNMT1表达的关系

目的探讨人胃癌组织DNMT1表达及其与BNIP3基因甲基化状态的关系。方法收集120例手术切除并经病理学证实的胃癌组织及其相应的癌旁正常组织,采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测胃癌组织及其相应癌旁组织BNIP3基因甲基化状态,采用免疫组化SP法检测BNIP3基因及DNMT1基因的蛋白表达水平。结果 120例胃癌组织中有72例发生了BNIP3基因甲基化,甲基化阳性率为60.0%,其相应癌旁正常组织有5例发生了BNIP3甲基化,甲基化阳性率为4.2%,差异有统计学意义（χ~2=85.839,P〈0.01）,胃癌组织中BNIP3基因甲基化状态与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分期无相关性（P〉0.05）,而与分化程度及淋巴结转移情况有相关性（P〈0.05）,胃癌组织中BNIP3蛋白的表达率为17.5%（21/120）,显著低于其癌旁正常组织（80.0%,96/120）,差异有统计学意义（χ~2=93.809,P〈0.01）,胃癌组织中DNMT1蛋白的表达率为75.0%（90/120）,显著高于其癌旁正常组织（5.8%,7/120）,差异有统计学意义（χ~2=119.195,P〈0.01）。胃癌组织中BNIP3蛋白与DNMT1蛋白的表达呈负相关（r=-0.542,P〈0.01）。结论 DNMT1高表达可能导致BNIP3蛋白表达减少,从而参与了胃癌的发生。

丁苯酞氯化钠注射液后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区凋亡相关因子表达的影响

目的丁苯酞氯化钠注射液后处理对X连锁凋亡抑制蛋白(X-inhibitor of apoptosis,XIAP)、Bcl-2/腺病毒E1B19k Da相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19k Da interacting protein 3,BNIP3)的作用研究甚少。文中旨在观察丁苯酞氯化钠注射液后处理对局灶性脑缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion,IR)大鼠缺血侧海马CA1区XIAP、BNIP3表达的影响,探讨丁苯酞氯化钠注射液的脑保护机制。方法将清洁级雄性SD大鼠65只按随机数字表法分为假手术组(n=13)、IR组(n=13)、丁苯酞组(n=39),丁苯酞组按照剂量不同分为低剂量、中剂量和高剂量亚组,每组13只。IR组:采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉IR模型(缺血2 h,再灌注24 h)。低、中、高剂量亚组在大鼠缺血2 h后,予腹腔内分别注射2、4、6 mg/kg丁苯酞氯化钠注射液,余步骤同IR组。假手术组:栓线插入深度<10 mm,余步骤同IR组。各组于再灌注24 h处死大鼠,分别通过Zealonga法、TTC染色、TUNEL法观察各组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死体积、缺血侧海马CA1区凋亡阳性细胞数,通过免疫组化染色及RT-PCR法观察XIAP和BNIP3阳性细胞数及其mRNA的表达。结果丁苯酞低、中、高剂量亚组神经功能缺损评分均小于IR组(P<0.05),且各亚组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。低剂量亚组脑梗死体积大于中剂量亚组和高剂量亚组(P<0.05)。丁苯酞低、中、高剂量亚组海马CA1区凋亡细胞数逐渐减小,且均小于IR组(P<0.05)。IR组XIAP、BNIP3阳性细胞表达[(22.31±0.94)、(60.13±2.59)个/HP]较假手术组[(3.07±1.43)、(5.78±0.44)个/HP]明显增多(P<0.05);与IR组比较,丁苯酞低、中、高剂量亚组XIAP阳性细胞数[(28.70±1.18)、(32.79±0.88)、(37.01±1.24)个/HP]逐渐增加(P<0.05),BNIP3阳性细胞数[(52.07±1.02)、(40.30±2.00)、(31.04±0.43)个/HP]逐渐减少(P<0.05)。与IR组比较,丁苯酞低、中、高剂量亚组XIAP mRNA逐渐增加、BNIP3 mRNA逐渐减少(P<0.05)。结论丁苯酞氯化钠注射液后处理对大鼠IR具有神经保护作用,其机制与影响XIAP、BNIP3的表达有关,且XIAP、BNIP3阳性表达量与丁苯酞氯化钠注射液存在剂量依赖关系。

HIF-1α/BNIP3信号通路在IL-4减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系

目的:探究低氧诱导因子-1α/Bcl-2/腺病毒E1B-19k Da相互作用蛋白3(HIF-1α/BNIP3)在IL-4减轻小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)中的作用及其与自噬的关系。方法:将SPF级BALB/c小鼠采用随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组(CIRI组)、IL-4组、HIF-1α抑制剂2ME2组(2ME2组)和IL-4+HIF-1α抑制剂2ME2组(IL-4+2ME2组)。采用线栓法构建CIRI组、IL-4组、2ME2组和IL-4+2ME2组大脑中动脉栓塞(MACO)模型,闭塞缺血60 min后再灌注24 h,假手术组除不阻断小鼠大脑中动脉外,其余操作同上。IL-4组、2ME2组、IL-4+2ME2组建模前30 min分别腹腔注射对应的IL-4C复合体溶液及尾静脉注射2ME2溶液。再灌注24 h后进行神经行为学评分,然后处死小鼠取脑组织。采用TTC染色检测脑梗死体积;干湿重法测定脑组织含水量;TUNEL染色检测细胞凋亡;透射电镜计数自噬小体;比色法测定SOD、MDA和ROS水平;Western blot检测HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1表达。结果:与假手术组相比,CIRI组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑含水量、细胞凋亡率、自噬小体数量、MDA、ROS、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1水平升高,SOD水平降低(P<0.05);与CIRI组相比,IL-4组神经行为学评分、脑梗死体积、脑含水量、细胞凋亡率、MDA、ROS水平降低,自噬小体数量、SOD、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1水平升高(P<0.05);与IL-4组相比,2ME2组、IL-4+2ME2组神经行为学评分、脑梗死体积、脑含水量、细胞凋亡率、自噬小体数量、MDA、ROS、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1水平降低,SOD水平升高(P<0.05)。结论:IL-4可通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路,激活细胞自噬,减少细胞凋亡和氧化应激,从而减轻小鼠CIRI。

三七总皂苷预处理通过激活HIF-1α/BNIP3线粒体自噬信号通路减少心肌细胞H/R损伤的机制研究

目的探索三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)预处理心肌细胞减少缺氧/复氧(hypoxiareoxygenation,H/R)损伤的作用机制。方法设置对照组(常规培养H9c2细胞)、模型组(H/R损伤的H9c2细胞)、PNS组(加入PNS处理的H/R损伤的H9c2细胞)、二甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME2)组(加入2-ME2处理的H/R损伤的H9c2细胞)和PNS+2-ME2组心肌细胞(同时加入PNS和2-ME2处理的H/R损伤的H9c2细胞),采用酶联免疫吸附法检测心肌细胞损伤,蛋白质印迹法检测线粒体自噬信号通路表达,免疫荧光法检测心肌细胞自噬活性。结果模型组高于对照组的指标有肌酸激酶(creatine kinase,CK)(0.37±0.05 vs.2.41±0.66)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)(2.20±0.69 vs.4.05±1.08)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)(38.17±9.02 vs.107.83±20.89)、细胞自噬标志物LC3(0.17±0.05 vs.0.63±0.66)、低氧诱导因子-1α(hypoxic inducible factor-1α,HIF-1α)(0.22±0.09 vs.0.66±0.08)和B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B 19kDa相互作用蛋白3(B lymphocytoma-2/adenovirus E1B 19kDa interacting protein 3,BNIP3)(0.15±0.02 vs.0.59±0.13),差异均有统计学意义(P<0.05)。PNS组低于模型组的指标有CK(2.41±0.66 vs.1.55±0.39)、LDH(4.05±1.08 vs.3.19±0.88)、AST(107.83±20.89 vs.66.52±11.43),差异均有统计学意义(P<0.05);PNS组高于模型组的指标有LC3(0.63±0.66 vs.0.85±0.23)、HIF-1α(0.66±0.08 vs.0.91±0.22)和BNIP3(0.59±0.13 vs.0.82±0.17),差异均有统计学意义(P<0.05)。2-ME2+PNS组低于模型组的指标有CK(2.41±0.66 vs.2.08±0.54)、LDH(4.05±1.08 vs.3.51±0.92)、AST(107.83±20.89 vs.83.49±19.53);2-ME2+PNS组高于模型组的指标有LC3(0.63±0.66 vs.0.70±0.54)、HIF-1α(0.66±0.08 vs.0.72±0.10)和BNIP3(0.59±0.13 vs.0.64±0.12),差异均有统计学意义(P<0.05)。2-ME2组高于模型组的指标有CK(2.41±0.66 vs.3.62±0.98)、LDH(4.05±1.08 vs.5.67±1.39)、AST(107.83±20.89 vs.192.13±28.97),差异均有统计学意义(P<0.05);2-ME2组低于模型组的指标有HIF-1α(0.66±0.08 vs.0.27±0.03)和BNIP3(0.59±0.13 vs.0.25±0.07),差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,模型组心肌细胞LC3荧光斑点数明显增加(P<0.05);与模型组相比,PNS组和2-ME2+PNS组心肌细胞LC3荧光斑点数明显增加,2-ME2组LC3荧光斑点数明显减少(P<0.05)。结论PNS能够通过激活HIF-1α/BNIP3线粒体自噬信号通路,减少心肌细胞H/R损伤。

二甲双胍对创伤性脑损伤后神经元凋亡的影响及机制

目的探讨二甲双胍(MET)对创伤性脑损伤(TBI)后神经元凋亡的影响及可能机制。方法选择小鼠海马神经元(HT22)细胞进行实验,将HT22细胞随机分为对照组、TBI组、MET1、MET2组,除对照组外,其余组通过机械划痕构建TBI体外模型。Westem blotting法测定Bcl-2腺病毒E1B-19 kD相互作用蛋白3(BNIP3)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、线粒体外模转位酶20(TOMM20)、细胞色素C氧化酶4(COXⅣ)表达,免疫荧光双染观察线粒体和溶酶体共定位情况,TUNEL染色法检测细胞凋亡率,LDH试剂盒检测细胞上清液LDH活性。应用小干扰RNA(siRNA)抑制BNIP3表达,并随机分为对照siRNA组、BNIP3-siRNA组、对照siRNA+TBI组、BNIP3-siRNA+TBI组,实验终点观察上述指标变化。结果TBI组神经元凋亡率高于对照组(P<0.05)。TBI组BNIP3表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ值均高于对照组(P均<0.05),而p62、TOMM20、COXⅣ表达均低于对照组(P均<0.05)。激光共聚焦显微镜观察发现,TBI组细胞线粒体溶酶体共定位较对照组增加。MET 1组和2组神经元凋亡率均低于TBI组(P均<0.05),且MET 2组细胞凋亡率较MET 1组进一步降低(P<0.05)。MET 1组BNIP3表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ值均较TBI组降低(P均<0.05);MET 2组BNIP3表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ值较MET 1组进一步降低(P均<0.05)。MET 1组p62、TOMM20、COXⅣ表达均较TBI组升高(P均<0.05);MET 2组p62、TOMM20、COXⅣ表达较MET 1组进一步升高(P均<0.05)。激光共聚焦显微镜观察发现,MET 1组细胞线粒体溶酶体共定位较TBI组减少,MET 2组细胞线粒体溶酶体共定位较MET 1组进一步减少。对照siRNA+TBI组及BNIP3-siRNA+TBI组细胞凋亡率分别为(32.57±2.68)%、(16.59±1.80)%,差异有统计学意义(P<0.05)。对照siRNA+TBI组BNIP3表达水平及LC3-Ⅱ/Ⅰ值分别为0.66±0.01、1.46±0.02,高于BNIP3-siRNA+TBI组(P均<0.05);而对照siRNA+TBI组p62、TOMM20、COXⅣ相对表达量分别为0.06±0.01、0.14±0.01、0.09±0.01,低于BNIP3-siRNA+TBI组(P均<0.05)。激光共聚焦显微镜观察发现,对照siRNA+TBI组线粒体溶酶体共定位较BNIP3-siRNA+TBI组增加。结论MET可抑制TBI后神经元凋亡,其机制可能与抑制BNIP3介导的线粒体自噬有关。

石榴花水提物调节AHR/BNIP3改善糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号

目的:探讨石榴花水提物(pomegranate flower water extract,PFW)对2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号传导的影响及机制。方法:将C57BL/6J随机分为正常组、模型组、二甲双胍组(Met)、石榴花水提物低剂量组(PFWL)和石榴花水提物高剂量组(PFWH)。连续给药11周后,称小鼠体质量,检测空腹血糖(FBG)、胰岛素(INS)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化;Western blot法检测肝组织中胰岛素受体底物1(IRS1)、p-IRS1(Ser307)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT(Ser473)、糖原合成酶激酶-3β(Gsk3β)、p-Gsk3β(S9)、芳香烃受体(AhR)、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)、Bcl-2/腺病毒E1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)蛋白表达。结果:与模型组比较,PFWH组FBG、INS、HOMA-IR、TG和TC含量极显著降低(P<0.01);PFWH组小鼠肝细胞内脂肪滴明显减少;PFWH组极显著升高肝脏中IRS1、p-AKT(Ser473)/AKT、p-Gsk3β(S9)/Gsk3β、BNIP3蛋白表达(P<0.01),极显著降低p-IRS1(Ser307)/IRS1、AHR、PEMT蛋白表达(P<0.01)。结论:PFW可能通过调节AHR/BNIP3抑制肝脏脂质沉积,改善p-IRS1(Ser307)/p-AKT(Ser473)/p-GSK3β(S9)胰岛素信号通路转导。

血清TGR5 mRNA和BNIP3 mRNA在急性心肌梗死患者中的表达水平及临床意义

目的 探究血清G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)mRNA与Bcl-2/腺病毒QE1B-19kDa相互作用蛋白3(BNIP3)mRNA在急性心肌梗死(AMI)患者中的表达水平情况,以及二者对于术后心脏不良事件(MACE)发生的预测价值。方法 选取首都医科大学门头沟教学医院2018年1月至2020年1月收治的98例进行经皮冠状动脉介入术(PCI)的AMI患者[AMI患者包括急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)46例与急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)52例]为研究组,另选取同期90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清TGR5 mRNA和BNIP3 mRNA表达水平,根据PCI术后随访结果将研究组分为MACE组(46例)和非MACE组(52例)。收集两组患者临床资料,采用Pearson法分析术后MACE组血清TGR5 mRNA与BNIP3 mRNA表达水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TGR5 mRNA和BNIP3 mRNA对于术后AMI患者MACE发生的预测价值,采用Logistic回归分析AMI患者术后MACE发生的影响因素。结果 研究组血清TGR5 mRNA表达水平显著低于对照组,血清BNIP3 mRNA表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后MACE组左心室射血分数(LVEF)、TGR5 mRNA表达水平显著低于非MACE组,血清肌酐(SCr)、红细胞分布宽度(RDW)、Killip分级Ⅲ+Ⅳ级比例、BNIP3 mRNA表达水平显著高于非MACE组,差异有统计学意(P<0.05);经Pearson相关性分析,血清TGR5 mRNA与BNIP3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.543,P<0.05);ROC曲线分析显示,血清TGR5 mRNA预测AMI患者MACE发生的曲线下面积(AUC)为0.704(95%CI:0.601~0.808),血清BNIP3 mRNA预测AMI患者MACE发生的AUC为0.762(95%CI:0.696~0.883),血清TGR5 mRNA与BNIP3 mRNA联合预测AMI患者术后MACE发生的AUC为0.867(95%CI:0.783~0.932),优于二者单独预测(Z_(二者联合-TGR5)=2.346,Z二者联合-BNIP3=1.715,P=0.019、0.043);Logistic回归分析结果显示,TGR5 mRNA、BNIP3 mRNA、RDW是AMI患者术后MACE发生的影响因素(P<0.05)。结论 TGR5 mRNA在AMI患者血清中呈低表达水平,BNIP3 mRNA在AMI患者血清中呈高表达表达,二者对于预测术后MACE发生具有重要意义。

BNIP3在胰腺癌中的表达及其与术后吉西他滨化疗敏感性的关系

目的 探究胰腺癌Bcl-2/腺病毒E1B-19k相关蛋白3(Bcl-2/E1B-19k-interacting protein 3,BNIP3)的蛋白表达水平及其与术后吉西他滨化疗敏感性的关系。方法 回顾性分析2016年7月至2021年8月内蒙古医科大学附属医院58例胰腺癌根治术,并在术后规律应用吉西他滨辅助化疗或以吉西他滨为主的联合化疗患者的临床资料,选取胰腺癌术后组织切片,对其进行BNIP3免疫组织化学检测,通过实验染色强度及范围进行评分,并分析其与胰腺癌患者预后的关系。结果 与BNIP3低表达组比较,BNIP3高表达组的总生存时间(OS)[13(95%CI 11.378~14.622)个月 vs 18(95%CI 16.592~19.408)个月]和无病生存时间(DFS)[7(95%CI 4.082~9.938)个月 vs 14(95%CI 12.936~15.064)个月]均降低(P<0.05)。BNIP3的蛋白表达水平及淋巴转移情况是OS的独立预后因素,而BNIP3的蛋白表达水平及分化程度是DFS的独立预后因素。结论 胰腺癌组织中BNIP3的蛋白表达水平可能与应用吉西他滨化疗敏感性相关,BNIP3低表达患者行术后吉西他滨化疗的OS与DFS较高表达者更长。

microRNA-182-5p靶向BNIP3抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的研究

目的探讨microRNA-182-5p(miR-182-5p)对卵巢癌SKOV3细胞增殖和迁移的抑制作用及其作用机制。方法将对数生长期SKOV3细胞随机分为空白组、对照组和实验组,并分别转染空白试剂、miR-182-5p拟似物、miR-182-5p+LV-BNIP3。转染后24 h,用噻唑蓝法检测细胞的增殖活性,用逆转录聚合酶链反应法检测miR-182-5p的表达水平,用Western Blotting法检测BNIP3蛋白的表达水平,用Transwell小室法检测细胞的迁移能力。结果转染后24 h,实验组、对照组和空白组的增殖活性(OD值)分别为(0.38±0.04),(0.17±0.03)和(0.39±0.02),miR-182-5p表达水平分别为(2.55±0.11),(2.52±0.13)和(0.98±0.11),BNIP3蛋白表达水平分别为(0.99±0.12),(0.42±0.11)和(0.96±0.09),穿膜细胞数分别为(138±29),(64±18)和(132±23)个,对照组的上述指标与实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-182-5p对卵巢癌SKOV3细胞具有抑制作用,BNIP3可能是miR-182-5p调节卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的作用靶点。