心脑舒通胶囊对高脂血症大鼠心肌梗死后心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察心脑舒通胶囊(主要起效成分为蒺藜总皂苷)对高脂血症大鼠心肌梗死(MI)后心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,探讨蒺藜皂苷抗高脂大鼠MI后心室重构的作用机制。方法利用高脂血症心肌梗死复合模型,采用TUNEL和免疫组化SP法,观察蒺藜总皂苷对MI后大鼠心肌细胞凋亡、以及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果(1)蒺藜总皂苷可减轻MI后心肌细胞损伤和心室重构的程度;(2)与高脂心梗组相比,蒺藜总皂苷大剂量、辛伐他汀均降低MI后心肌细胞凋亡指数,并能下调Bax蛋白表达(P<0．05),各治疗组之间作用比较,差异无显著性(P>0．05)。结论蒺藜总皂苷可通过调控Bax／Bcl-2蛋白表达比值,而抑制心肌细胞凋亡,可能是其抗MI后心室重构的作用机制之一。

胃癌癌旁组织中p53、p16和bcl-2蛋白表达及其关系的探讨

目的：研究胃癌癌旁组织中抑癌基因和抗凋亡基因蛋白的表达及其内在关系。方法：胃镜及外科手术中取４０例 胃癌患者的癌组织和癌旁组织各两块，石蜡包埋，切片ＨＥ染色作病理及免疫组织化学检查ｐ５３、ｐ１６和ｂｃｌ－２基因蛋 白表达。结果：ｐ５３在胃癌组织中阳性表达率４２．５％，癌旁组织１２．５％，有显著性差异（Ｐ＜０．０１），其表达强度也有显著 性差异（Ｐ＜０．０１）；ｐ１６在癌旁组织阳性表达率为６０％，显著高于胃癌组织３７．５％（Ｐ＜０．０５），其表达强度也有显著性差 异（Ｐ＜０．０５）；ｂｃｌ－２在胃癌组织和癌旁组织阳性表达率无显著性差异（６７．５％比４７．５％，Ｐ＞０．０５），其表达强度也无显 著性差异（ｐ＞０．０５）。ｐ５３与ｐ１６、ｐ１６与ｂｃｌ－２表达之间均无显著相关性（Ｐ＞０．０５），而ｐ５３与ｂｃｌ－２表达之间存在显著相 关性（Ｐ＜０．０５）。结论：在胃癌发生发展过程中，抑癌基因（ｐ５３、ｐ１６）４抗凋亡基因（ｂｃｌ－２）之间存在既独立又协同的作 用。

癫痫发作敏感大鼠T区Bcl-2蛋白表达变化

为探讨前深梨状皮层T区中Bcl- 2蛋白的表达变化在红藻氨酸诱导的癫痫发作敏感性长期增强中的作用,本研究以免疫组化方法检测癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区Bcl- 2蛋白表达变化,以硫堇染色观察神经元脱失情况,并与经蝎毒处理后癫痫发作敏感性明显降低的大鼠进行比较。结果显示:与对照组比较,癫痫发作敏感大鼠前深梨状皮层T区Bcl 2蛋白免疫反应阳性细胞数目明显减少,染色强度明显降低(P<0. 05),神经元数量明显减少;以剂量为100mg/ (kg·d)的蝎毒给予动物连续灌胃4周,可明显降低其癫痫发作敏感性(P<0. 05),脑内前深梨状皮层神经元脱失程度减轻,Bcl- 2蛋白免疫反应产物与对照组相比无明显变化。以上结果提示,前深梨状皮层T区Bcl- 2蛋白表达减少可能是癫痫发作敏感性长期增强的重要原因之一。

黄皮酰胺对高血压局灶性脑缺血-再灌注大鼠Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响

目的观察黄皮酰胺对肾性高血压大鼠(RHR)脑缺血-再灌注后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响,探讨其脑保护作用机制。方法75只RHR被随机分成假手术组、单纯缺血-再灌注组和黄皮酰胺组。采用线栓法制作局灶性脑缺血-再灌注模型,假手术组不造成缺血。用免疫组化法和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL法)分别观察缺血2h后再灌注6、12、24、48和72h脑细胞Bcl-2蛋白表达和凋亡细胞数。结果①再灌注6h即可见Bcl-2蛋白表达较多,24h达高峰,此后逐渐下降。与单纯缺血-再灌注组比较,黄皮酰胺组Bcl-2蛋白表达于再灌注后各时间点均明显增高,差异均有显著性(P均<0.01)。②再灌注6h后有较多凋亡细胞,于72h达高峰。与单纯缺血-再灌注组比较,再灌注6-24h黄皮酰胺组凋亡细胞均显著减少(P均<0.01),但再灌注48h后细胞凋亡的抑制作用不明显(P均>0.05)。假手术组及缺血-再灌注组的非缺血侧无Bcl-2阳性细胞,仅见0-2个凋亡细胞。结论局灶性脑缺血-再灌注后Bcl-2表达显著增高,细胞凋亡参与了脑缺血-再灌注损伤的过程。黄皮酰胺能显著上调Bcl-2表达,抑制细胞凋亡,并可能与Bcl-2协同抑制细胞凋亡,这可能是黄皮酰胺脑保护作用的机制。

浅刺针法对脑梗塞大鼠脑组织缺血半暗带Fas、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究浅刺针法对脑梗塞后大鼠脑组织缺血半暗带细胞Fas、Bcl-2的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为浅刺针法组(Ⅰ组)、常规针刺组(Ⅱ组)、模型对照组(Ⅲ组)、正常对照组(Ⅳ组)。每组再随机分为术后2、7、14天3个时间点,每个时间点各5只大鼠。从神经体征评分、采用免疫组化法测定脑组织Fas、Bcl-2蛋白表达的变化方面,观察经过2、7、14天治疗后的Ⅰ、Ⅱ组大鼠和相应时间未经治疗的III、IV组大鼠大脑神经细胞凋亡情况。结果:3个时间点的浅刺针法组大鼠脑组织缺血半暗带的Fas蛋白表达明显低于模型组和常规针刺组,而Bcl-2则明显高于模型组和常规针刺组(P<0.01),说明浅刺针法可有效改善脑梗塞大鼠的神经缺损体征。结论:Fas、Bcl-2对脑梗塞大鼠脑组织缺血细胞调亡有重要作用,浅刺针法通过下调Fas蛋白表达和上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡,发挥神经保护作用。并在分子水平证实经络在体表有其物质基础,浅刺可取得有效的刺激作用,使浅部组织的经络特异性能充分显示出来。

黄参方剂诱导胃癌癌前病变细胞凋亡和影响BCL-2蛋白表达的研究

目的 :探讨黄参方剂对胃癌癌前病变细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法 :将 72例胃癌癌前病变患者随机分为 2组 ,治疗组 37例 ,口服黄参方剂 6 0ml/d ;对照组 35例 ,口服维酶素片 12片 /天 ,疗程 2月。治疗后胃镜同一部位取材 ,检测治疗前后细胞凋亡指数和BCL 2蛋白的表达。采用原位末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡 ,采用免疫组化检测BCL 2蛋白的表达。结果 :黄参方剂组服药前后细胞凋亡指数分别为 (19 8± 9 6 ) %和 (32 8± 16 2 ) % ,服药后细胞凋亡指数高于服药前 (P <0 0 5 )。BCL 2蛋白阳性率治疗前后分别为 5 2 8%和 2 6 4% ,治疗前后比较具有显著性差异 (P <0 0 5 )。而对照组细胞凋亡指数和BCL 2蛋白阳性率在服药前后比较均无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :黄参方剂可诱导胃癌癌前病变细胞凋亡。

经静脉移植骨髓基质细胞治疗大鼠局灶性脑梗死Bcl-2蛋白表达的实验研究

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(MSCs)治疗大鼠局灶性脑梗死时bcl- 2蛋白的表达。方法 体外培养及扩增骨髓基质细胞后,将实验大鼠2 4只分为3组:第1组(n=8)单纯大脑中动脉闭塞(MCAO)组;第2组(n=8) ,MCAO后4 8h经尾静脉注射生理盐水1ml;第3组(n=8) ,MCAO后4 8h经尾静脉注射1×10 7个MSCs。神经功能严重程度评分日一次进行。所有动物均在MCAO后第8天处死。用免疫细胞化学方法体外鉴定骨髓基质细胞;免疫组织化学染色显示鼠脑内bcl- 2蛋白表达情况。结果 原代培养2 0 d后可分离得到骨髓基质细胞,在5代以前生长形态相对稳定。与对照组相比,实验组大鼠的神经功能严重程度评分有明显改善(P<0 .0 0 1) ,且脑内bcl-2表达增加(P<0 .0 0 1)。结论 经静脉移植骨髓基质细胞可明显改善大鼠局灶性脑梗死后神经功能恢复,并可上调脑内bcl- 2蛋白表达水平。

急性白血病及其细胞株bcl-2蛋白表达

目的 检测 60例急性白血病患者和 6种白血病细胞株的 bcl- 2蛋白表达水平。方法 应用抗 bcl- 2单抗 ,免疫细胞化学染色方法。结果 急性白血病患者有较高 bcl- 2蛋白阳性表达 ,与 FAB分型无一定关系。AL L初治组 bcl- 2蛋白阳性细胞平均百分率、平均染色强度及平均染色系数均高于复发 /难治组 ,AML 初治组与复发 /难治组 bcl- 2蛋白阳性细胞平均百分率、平均染色强度及平均染色系数之间无明显相关性。 6株白血病细胞对 bcl- 2蛋白的阳性表达亦较高。结论 bcl- 2蛋白检测作为判断 AL 临床化疗敏感性或药物耐受的指标有一定意义。

地塞米松对成年大鼠持续性局灶性脑缺血后凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨药理剂量地塞米松对成年大鼠持续性局灶脑缺血后凋亡及凋亡相关基因Bcl 2表达的影响。方法 将 10 5只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组 (7只 )、生理盐水组 (4 9只 )、地塞米松组 (4 9只 ) ,分别对应缺血 3、6、12、2 4、4 8、72、12 0h时间点 (每个时间点组 7只大鼠 )行左侧大脑中动脉近端电凝术 ,建立持续性局灶脑缺血模型。术后 1h生理盐水组静脉注射生理盐水 ,地塞米松组静脉注射地塞米松 (0 .5mg·kg-1·d-1)。行常规HE染色 ,原位末端TUNEL法标记凋亡细胞 ,免疫组织化学法检测Bcl 2蛋白表达。结果 持续性局灶脑缺血后细胞凋亡、Bcl 2蛋白表达主要分布在梗死灶的边缘区域 ,脑缺血 2d出现细胞凋亡并持续到缺血 5d。地塞米松组细胞凋亡出现时间提前到缺血 1d ,而且缺血 2d、5d凋亡细胞数量比生理盐水组增加。脑缺血 3h到 5d梗死灶边缘区域都有Bcl 2蛋白表达。地塞米松处理组 6h到 5dBcl 2蛋白表达细胞密度明显小于生理盐水组。结论 持续性局灶脑缺血早期给予地塞米松可能促进梗死灶边缘区的细胞凋亡 ,此作用与其下调Bcl 2的基因表达有关。

黄参膏对胃癌癌前病变细胞凋亡及BCL-2蛋白表达的影响

目的:探讨黄参膏对胃癌癌前病变细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:将46例胃癌癌前病变患者随机分为2组,治疗组28例,口服黄参膏60ml/天,对照组18例,口服维酶素片2.4g/天,疗程2月,治疗前后检测细胞凋亡指数和Bcl-2蛋白的表达。采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,采用免疫组化检测Bcl—2蛋白的表达。结果:黄参膏组服药前后细胞凋亡指数分别为19.8±9.6％和32.8±16.2％,服药后细胞凋亡指数显著高于服药前(P<0.05)。Bcl-2蛋白阳性率治疗前后分别为53.6％和28.6％,治疗前后比较具有显著性差异(P<0.05)。而对照组细胞凋亡指数和Bel-2蛋白阳性率在服药前后比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:黄参膏可诱导胃癌癌前病变细胞凋亡。

无t(14;18)染色体易位滤泡性淋巴瘤中BCL-2蛋白表达的变异

滤泡性淋巴瘤（FL）的遗传学特征为t（14；18）（q32；q21）染色体易位，导致肿瘤细胞BCL-2基因重排，BCL-2蛋白过表达。部分BCL-2蛋白阳性表达的FL中缺乏t（14；18）染色体易位，也有少数FL同时缺乏BCL-2蛋白表达及t（14；18）染色体易位。BCL-2是一种凋亡抑制基因，BCL-2蛋白抑制细胞的凋亡，对FL的发生起重要作用。关于无t（14；18）染色体易位FL中BCL-2蛋白的表达情况目前尚不清楚。

多次化学性缺氧对大鼠海马CA_1区神经元凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究不同间隔时间多次化学性缺氧对大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl2蛋白表达的影响。方法应用原位末端标记技术及免疫组化技术,观察分析对照组(A组)、3硝基丙酸(3NPA)连续给药组(B组)、3NPA间隔给药组(C组)大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl2蛋白表达情况。结果(1)大鼠海马CA1区神经元凋亡B组较A、C组有显著增加(均P<0.05),而A组与C组比较差异无显著性(P>0.05);(2)Bcl2蛋白免疫反应强度C组较A、B组增强非常显著(均P<0.001),而A组与B组比较差异无显著性(P>0.05)。结论连续多次应用小剂量3NPA可使大鼠海马CA1区神经元凋亡明显增加,间隔多次应用小剂量3NPA对神经元有保护作用。

卡维地洛、缬沙坦及其合用对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡、P53及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨卡维地洛(Carvedilol,Car)、缬沙坦(Valsartan,Val)及其合用对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡、心肌Bcl-2、P53蛋白表达的影响。方法6周龄雄性SHR24只,随机分为4组(n=6):一组为对照组,其他3组为干预组,分别予NS5ml、Cal(20mg·kg-1·d-1)、Val(40mg·kg-1·d-1)和Car+Val合用(剂量同上)干预8周后,予2%戊巴比妥钠40mg/kgIP麻醉、开胸取心脏,取左心室游离壁心肌于10%中性福尔马林中固定24小时,继之脱水,石蜡包埋及切片,采用TUNEL法、免疫组化法分别检测心肌细胞凋亡率(cardiacmyocyteapoptosisrate,CMAR),Bcl-2及P53蛋白表达率。结果与对照组比较,各干预组CMAR及P53蛋白表达率均明显降低,而Bcl-2蛋白表达率却明显增高,尤以合用组更明显(P<0.01)。与Car组、Val组比较,合用组CMAR及P53蛋白表达率均降低,而Bcl-2蛋白表达率均增高(P<0.01)。与Car组比较,Val组CMAR、Bcl-2及P53蛋白表达率,差异无显著性意义(P>0.05)。各组中P53蛋白表达率与CMAR呈正相关;而Bcl-2与CMAR呈负相关((P<0.05)。结论CarVal均可抑制SHR心肌细胞凋亡,二者合用效应更明显,可能与两药均能上调BCL-2蛋白表达和下调P53蛋白表达有关。

17-β-雌二醇对凝血酶诱导血管平滑肌细胞增生和c-fos、bcl-2蛋白表达影响

目的通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增生模型,观察17-β-雌二醇(E_2)对 T 诱导的VSMC 增生的影响,并进一步观察其对 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的表达有何作用,旨在认识 E_2作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪 DNA 含量测定,细胞周期分析的方法观察 T 及 E_2对 VSMC 增生和 DNA 合成的影响。免疫印迹法(Western blot)观察 T 及 E_2等各处理因素作用1小时及3天后,c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白的变化情况。结果 10^(-9)～10^(-7)M 的E_2呈浓度依赖性地抑制2u/ml T 诱导的细胞增生和 DNA 合成作用(P<0.01)。各处理因素作用1小时后,T 能显著促进 c-fos蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制 T 的促 c-fos 蛋白增加作用,作用3天后,c-fos 蛋白含量各组差异无显著性。各处理因素作用1小时后,bcl-2蛋白无显著变化,作用3天后,T 能显著促进 bcl-2蛋白的增加。各浓度的 E_2能显著抑制这种增加。上述各项指标中,雌激素受体(ER)拮抗剂 tamoxifen(TAM)(10^(-6)M)能部分阻断10^(-7)M E_2的作用,差异有显著性。结论 E_2能抑制 T 诱导的 VSMC 增生,这可能与其抑制 c-fos 蛋白和 bcl-2蛋白表达有关,且该作用至少部分通过 ER 介导。

Bax、Bcl—xL、Bcl-2蛋白表达与慢性丙型肝炎炎症纤维化分级分期的关系

采用免疫组化法评估了89例慢性丙型肝炎病人肝组织活检标本中Bax、Bcl—xL、Bcl-2蛋白的表达水平。结果，参照Scheuer评分标准，肝细胞Bax蛋白的表达水平与炎症分级（P〈0．001）和纤维化分期（P=0．011）呈显著负相关。虽然肝细胞Bcl—xL蛋白的表达水平在G3和S4时最高，但与炎症分级（P=0．106）和纤维化分期（P=0．078）无显著相关性。

神经保护剂的鸡尾酒疗法对大鼠局灶性脑缺血后梗死体积和神经元凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨不同类型神经保护剂联合应用 ,即鸡尾酒疗法 (cocktail)是否较单一神经保护剂对局灶性脑缺血有更好的保护作用。方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型 (MCAO) ,分为 1,6 二磷酸果糖 (FDP)组、MK 80 1组、N 乙酰半胱氨酸 (NAC)组、cocktail组和对照组 ,观察缺血后6h和 2 4h梗死体积、神经元凋亡和抗凋亡蛋白bcl 2表达的变化。结果 缺血后 6h和 2 4h ,cocktail组梗死体积减小 ,神经元凋亡减少 ,bcl 2表达增多 ,与单一用药各组相比有显著性差异。结论 神经保护剂cocktail疗法对鼠脑组织缺血的保护作用较单一用药明显增强。

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的 探讨Wortmannin抑制PI3K途径对K5 62、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL -2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K5 62、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL -2蛋白表达中的不同作用。方法 用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径 ,AraC诱导细胞凋亡 ,药物作用 2 4h后 ,细胞经DNA特异性荧光染色 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞DNA含量、BCL -2蛋白表达 ,MulticycleVerson 4 0 0软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL -2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果 K5 62、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara -C、Wortmannin +Ara -C作用 2 4h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰 (亚G1期细胞 )这一凋亡细胞的特征性改变 ,实验组细胞增殖指数 (PI)明显低于对照组 ,凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K5 62细胞阻滞于G1期。作用 2 4h后细胞实验组细胞BCL -2蛋白表达较对照组降低 ,说明Wortmannin可促进K5 62细胞的凋亡。结论 Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K5 62细胞的增殖。并可以通过抑制PI3K通路使K5 62细胞阻滞于G1期。Wortmannin可抑制K5 62细胞的BCL -2蛋白表达 ,促进K5 62细胞的凋亡。

Bcl-2蛋白 血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及其与预后相关性的研究

目的探讨凋亡抑制基因bcl-2蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)表达在乳腺癌中的意义,及其与影响乳腺癌预后因素的相关性,探讨二者在细胞癌变过程中的作用及意义。方法应用免疫组织化学的方法,对64例随访5年以上的乳腺癌、19例良性乳腺组织、12例乳腺不典型增生的bcl-2蛋白、VEGF、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及C-erbB-2进行检测。结果64例乳腺癌组织中,bcl-2蛋白表达的总阳性率为65.6%(42/64),bcl-2高表达的病例,组织学分级高,易出现腋淋巴结转移;VEGF在乳腺癌组织中总的阳性表达率为62.5%(40/64),与肿瘤体积大、TNM分期晚、高组织学分级、腋淋巴结转移、ER阴性、C-erbB-2阳性等预示预后差等因素有显著相关性;乳腺癌中bcl-2与VEGF表达呈正相关(r=0.4172,P=0.0001)。在正常乳腺组织、乳腺不典型增生组织中bcl-2蛋白、VEGF表达的阳性率均低于乳腺癌组织,差异有显著性(P<0.01)。结论Bcl-2表达失调可导致乳腺癌细胞凋亡调控紊乱,bcl-2基因影响肿瘤的生物学行为;VEGF参与了乳腺癌的侵袭与转移调节,VEGF高表达常提示预后差;bcl-2基因可能通过调节细胞的凋亡而参与乳腺癌的发生发展;VEGF与bcl-2的表达呈正相关,VEGF是否能上调bcl-2蛋白有待进一步研究证实。