Hepatitis B virus reactivation during immunosuppressive therapy: Appropriate risk stratification

Our understanding of hepatitis B virus(HBV) reactivation during immunosuppresive therapy has increased remarkably during recent years. HBV reactivation in hepatitis B surface antigen(HBs Ag)-positive individuals has been well-described in certain immunosuppressive regimens, including therapies containing corticosteroids, anthracyclines, rituximab, antibody to tumor necrosisfactor(anti-TNF) and hematopoietic stem cell transplantation(HSCT). HBV reactivation could also occur in HBs Ag-negative, antibody to hepatitis B core antigen(anti-HBc) positive individuals during therapies containing rituximab, anti-TNF or HSCT.For HBs Ag-positive patients, prophylactic antiviral therapy is proven to the effective in preventing HBV reactivation. Recent evidence also demonstrated entecavir to be more effective than lamivudine in this aspect. For HBs Ag-negative, antiHBc positive individuals, the risk of reactivations differs with the type of immunosuppression. For rituximab, a prospective study demonstrated the 2-year cumulative risk of reactivation to be 41.5%, but prospective data is still lacking for other immunosupressive regimes. The optimal management in preventing HBV reactivation would involve appropriate risk stratification for different immunosuppressive regimes in both HBs Ag-positive and HBs Ag-negative, anti-HBc positive individuals.

C基因型HBV转基因小鼠的制备

目的:建立C型HBV转基因小鼠,为乙肝防治研究提供实验动物模型.方法:采用受精卵显微注射法,制备HBV转基因小鼠,用PCR,ELISA,荧光定量PCR和免疫组化的方法研究HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况.结果:注射受精卵2840枚,筛选注射后成活的受精卵共2256枚,注射成活率79.4%.注射后受精卵共移植假孕雌鼠85只,其中有42只怀孕,假孕雌鼠妊娠率49%,共产下F0代小鼠168只,PCR检测共有14只小鼠阳性,其中ELISA检测血清HBsAg阳性5只,HBeAg均阴性.荧光定量PCR血清HBV DNA显示,2只小鼠的拷贝数分别为3.12×105copies/L,1.98×105copies/L,经传代产下F1代小鼠61只,PCR检测HBV DNA阳性5只,ELISA检测HBsAg阳性4只,其中肝脏HBsAg免疫组化阳性2只,HBcAg均阴性,且肝组织表达HB-sAg为胞浆型.结论:构建的C型HBV基因不但可以在转基因小鼠体内进行复制表达,而且可以遗传给下一代小鼠.

回顾性分析慢性乙型肝炎患者血清HBsAg与HBV DNA水平的关联性

目的回顾性分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)定量与HBV DNA水平的相关性,并确定最佳的用于确定高HBV DNA水平的HBsAg定量值的诊断临界点。方法收集2013年7月至2014年5月期间柳州市中医院确诊为CHB的患者239例,检测受试者HBV DNA、HBsAg、HBeAg及ALT水平,对检测结果进行统计学分析。结果 HBeAg阳性组CHB患者HBsAg定量和HBV DNA检测水平均高于HBeAg阴性组,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。所有CHB患者中HBsAg定量与HBV DNA水平之间呈正相关性(r=0.603,P<0.01)。HBeAg阳性组HBsAg定量与HBV DNA水平之间呈正相关性(r=0.555,P=0.000),HBeAg阴性组HBsAg定量与HBVDNA水平之间无相关性(r=0.076,P=0.426)。在抗病毒治疗前组和治疗后组中,HBsAg定量与HBV DNA水平均有较好的正相关性(r=0.622,r=0.603,P均=0.000)。在ALT高水平组与ALT低水平组中,HBsAg定量和HBV DNA水平之间都存在正相关性(r=0.586,r=0.578,P均=0.000)。高DNA组(>2000 copies/L)患者的HBsAg定量和HBVDNA水平之间呈正相关性(r=-0.637,P=0.000),低DNA组(<2000 copies/L)患者的HBsAg定量和HBV DNA水平之间无相关性(r=0.226,P=0.057)。当HBsAg定量以5.03x103 IU/mL为临界点时,判定HBV DNA高水平的受试者工作特征曲线下面积最大,为0.727。结论 CHB患者血清HBsAg定量值与HBV DNA水平呈正相关。血清HBsAg定量值可以较好地预测高HBV DNA水平。

脐血乙型肝炎病毒血清学标记物诊断宫内感染的局限性

目的探讨脐血乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）血清学标记物在诊断HBV宫内感染中的应用价值。方法2011年10月8日至2013年5月31日，在南京大学医学院附属鼓楼医院、江苏省泰兴市人民医院和镇江市妇幼保健院分娩的孕妇中，纳入278例乙型肝炎表面抗原（hepatitisBsurfaceantigen，HBsAg）阳性、妊娠期未接受抗病毒治疗、无丙型肝炎病毒或人类免疫缺陷病毒感染的孕妇（其中3例双胎）。281例新生儿生后12h内均进行被动免疫及主动免疫。孕妇分娩后立即采集脐血，分娩后2d内采集外周血，婴儿7～12月龄随访时采集外周血。采用荧光定量聚合酶链反应技术检测血清HBVDNA，检测下限为10^2U／ml。采用酶联免疫吸附试验定性检测HBsAg、乙型肝炎表面抗体（hepatitis Bsurfaceantibody，抗HBs）、乙型肝炎e抗原（hepatitis Beantigen，HBeAg）、乙型肝炎e抗体（hepatitis Beantibody，抗HBe）和乙型肝炎核心抗体（hepatitisBcoreantibody，抗-HBc），以及抗HBcIgM。分析7-12月龄时的婴儿随访率，母血、脐血及婴儿的HBV血清标记物水平，婴儿慢性HBV感染率，以及脐血HBVDNA、抗-HBcIgM水平与HBV宫内感染的关系。结果7～12月龄时婴儿随访率为76．2％（214／281）。71例HBeAg阴性孕妇分娩新生儿71例，其中8例（11．3％，8／71）脐血HBVDNA阳性；随访到56例，其中7例（12．5％，7／56）脐血HBVDNA阳性，但7～12月龄时，54例（96．4％，54／56）抗-HBs阳性，HBsAg和抗-HBc均为阴性，无一例HBV感染。207例HBeAg阳性孕妇分娩新生儿210例，其中86例（41．0％，86／210）HBVDNA阳性；随访到158例，其中38例（24．1％，38／158）脐血HBVDNA和HBsAg同时阳性；但7～12月龄时仅6例（3-8％，6／158）HBsAg、HBeAg和抗-HBc同时阳性，HBVDNA为1．55×1071．51×10^9U／ml，诊断慢性HBV感染。脐血HBVDNA≥10^5U／ml者中随访到7例，其中4例7～12月龄时未感染且有保护力；3例确诊HBV感染。另外3例HBV感染婴儿的脐血HBVDNA，1例为9．18×10^3U／ml，2例低于检测下限。281例脐血标本的抗-HBcIgM均阴性。结论脐IfILHBVDNA阳性不能诊断HBV宫内感染，HBVDNA阴性不能排除HBV母婴传播；脐血抗HBcIgM阳性率极低，阴性不能排除HBV宫内感染。

慢性乙型肝炎患者单核细胞来源树突状细胞Toll样受体的表达特征分析

目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者单核细胞来源树突状细胞(moDC)Toll样受体(TLR)的表达,并分析抗病毒相关TLR(TLR3、TLR4、TLR7、TLR8、TLR9)在CHB患者moDC的表达特征及意义。方法用羟乙基淀粉(HES)分离10例CHB患者及15例健康对照外周血单个核细胞(PBMC),经重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhlL-4)诱导培养树突状细胞(DC),经流式细胞仪用特异性单克隆抗体检测不同成熟阶段DC的TLR表达,并以HBcAg负载未成熟DC,应用FACS分析HBcAg的负载效率及细胞内IFN-γ、IL-4表达水平。结果moDC不同成熟阶段TLR的表达水平不同;CHB患者的未成熟moDC(imDC)表达的TLR7、TLR8低于健康对照(75.9%、1.0%比98.4%、15.4%,P<0.05),CHB患者成熟moDC(mDC)表达TLR3、TLR7低于健康对照(9.5%、79.7%比11.5%、90.7%,P<0.05);应用HBcAg分别于细胞培养第3天和第5天冲击DC,第1次冲击后48 h HBcAg的膜内、膜外负载率分别为53.0%和7.5%,第2次冲击后分别为80.2%和19.0%;HBcAg负载或未负载的moDC,均刺激淋巴细胞高表达IFN-γ,较少表达或不表达IL-4,呈现显著的Th1免疫应答。结论CHB患者moDe的抗病毒相关TLR表达低下,且可能是其DC功能低下的重要原因之一;应用HBcAg冲击imDC,可使其有效负载HBcAg,负载后DC的成熟过程及功能不受影响,仍以诱导Th1免疫应答反应为主。