结球白菜反义BcpLH基因转化株幼苗对生长激素的反应

4种浓度的植物生长素处理苗期的结球白菜反义BcpLH基因转化株后发现, IAA处理的转化株叶色变淡,叶片外卷。激素浓度在0 ~ 0 01mmol·L-1和1 0~10 0mmol·L-1两个区域时,转化株和非转化株的叶形指数略有增加,而在0 01~1 0mmol·L-1范围内,两者的叶形指数均呈下降趋势,表明IAA在此浓度范围内,叶肉细胞沿主叶脉方向的纵向生长受到的抑制强于横向生长所受到的抑制。虽然0 1mmol·L-1以上浓度的IAA对转化株和非转化株的叶柄生长都具有抑制作用,但与非转化株相比,转化株的反应较为迟钝。对非转化株的下胚轴生长有不同作用的IAA拐点浓度是0 01mmol·L-1,而转化株的拐点浓度是1 0mmol·L-1。IAA对转化株和非转化株的主根生长都有促进作用,但转化株对IAA的敏感性弱于非转化株。

大白菜BcpLH基因的原核表达及其蛋白产物的Western分析

BcpLH基因是大白菜包叶组织特异的新基因,含有双链RNA结合域。在含有His标记序列的原核表达载体pET28-a(+)上插入Bc-pLH基因的cDNA,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出了特异性蛋白,并免疫大白兔制备出高效价的抗血清;同时,将BcpLH基因插入到含有超级助溶剂的pMAL-c2载体上,并在大肠杆菌DH5α中诱导表达,结果获得了可溶的蛋白。Western斑点印迹分析的结果证明了BcpLH的特异性。BcpLH活性蛋白及其抗血清的产生为研究BcpLH基因的RNA结合活性及其在植物发育上的调节机制创造了条件。

甘蓝中BcpLH同源基因的克隆及其表达分析

根据大白菜BcpLH基因设计引物 ,用PCR方法从甘蓝结球期的茎尖组织中克隆到了大白菜BcpLH基因的同源基因BoLH1。序列分析表明 ,BoLH1基因含有 3个内含子 ,cDNA编码 2 45个氨基酸 ,编码的蛋白中存在两个双链RNA结合蛋白结构域 ;Southern杂交结果显示在甘蓝基因组有 1个以上的BoLH1基因拷贝。PCR表达分析表明 ,甘蓝BoLH1同源基因主要在结球期的茎尖组织、球叶和包叶中表达。