基于代谢组学方法研究生半夏和姜半夏对BeWo细胞的毒性机制

目的通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析生半夏和姜半夏干预后细胞内代谢物改变,来评价生半夏和姜半夏潜在的发育毒性。方法采用胎盘组织来源的BeWo细胞系构建体外胎盘模型,运用GC-MS检测细胞经生半夏及姜半夏干预后细胞内所含代谢物及其相对含量的变化。结果细胞代谢物中共鉴定出甘氨酸、氨基丙二酸、脯氨酸、葡萄糖、半乳糖、硬脂酸在、肌醇等九种差异性代谢物。结论运用GC-MS代谢组学技术评价半夏及姜半夏的发育毒性具有可行性。

CXCL12在母胎界面的表达及其促进BeWo滋养细胞系的体外迁移作用

目的研究CXCL12在早孕期母胎界面的表达情况及其对BeWo细胞的体外迁移作用。方法免疫组织化学法检测早孕期绒毛及蜕膜组织中CXCL12的表达情况;用Transwell细胞侵入系统检测CXCL12对BeWo细胞迁移的影响。结果早孕期绒毛及蜕膜组织均有CXCL12的表达,分布于绒毛柱、滋养细胞及间质血管内;CXCL12对BeWo细胞具有趋化作用,浓度达10ng/ml时趋化效应最强。结论CXCL12可促进BeWo细胞的迁移,因此早孕期母胎界面产生的CXCL12可能参与滋养细胞的迁移,对于维系正常妊娠发挥了一定作用。

绒毛膜癌细胞的融合与侵袭和转移能力变化关系的研究

目的:观察人绒毛膜癌(绒癌)细胞系中BeWo细胞株在福斯考林(forskolin)诱导融合前后细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达变化,以探讨绒癌细胞融合与其浸润和转移能力变化的关系。方法:用BeWo细胞株进行培养传代,以100mmol/L浓度的forskolin作用于BeWo细胞,用逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法检测细胞中人类内源性逆转录病毒基因编码的膜糖蛋白(Syncytin mRNA)表达量的变化;免疫印迹技术(Western blot)方法检测细胞中表达MMP-2及E-cad蛋白表达量的变化。结果:以BeWo细胞作为靶细胞,根据RT-PCR和Western blot方法中条带的形状和亮暗程度可知Syncytin基因和E-cad及MMP-2蛋白的表达呈时间依赖性,随着forskolin作用时间的增加,Syncytin基因及E-cad蛋白的表达逐渐增加,而MMP-2蛋白表达量逐渐减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Syncytin高表达与融合后绒癌细胞的浸润转移能力的改变可能有一定关系,Syncytin的检测有望成为滋养细胞肿瘤患者判定预后的有价值的指标,并为滋养细胞肿瘤的治疗开辟了新的思路。

乙型肝炎病毒感染Bewo细胞模型的建立

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)感染人胎盘滋养层细胞系Bewo的细胞模型,为HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究提供体外细胞模型。方法:选择人胎盘滋养层细胞系Bewo进行体外培养,用高浓度HBV DNA阳性血清(5×106/拷贝.ml-1)与Bewo细胞共培养48 h后,采用选择性PCR技术检测培养细胞中HBVrcDNA和HBVcccDNA。结果:HBV DNA阳性血清与Bewo共培养48 h,Bewo细胞中HBV rcDNA和HBV cccDNA均呈现阳性结果(243 bp和373 bp)。HBVDNA阳性血清与Bewo共培养对细胞形态无明显影响。结论:HBV能够直接感染人胎盘滋养层细胞系Bewo,该细胞系可用于进行HBV母婴传播过程中胎盘细胞感染机制的研究。

RNAi沉默HIF-1α基因抑制滋养细胞TGF-3β表达的实验研究

目的构建缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因的短发夹状干扰RNA(short hair-pin RNA,shRNA)表达质粒,探讨其在低氧条件下对BeWo细胞转化生长因子3β(transforming growth factor3β,TGF-3β)基因表达的抑制作用。方法根据小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,针对HIF-1α基因设计并合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒,应用脂质体将重组质粒转染BeWo细胞。缺氧培养后,应用Western blot法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3β蛋白表达水平,应用real time PCR法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3βmRNA表达水平。结果成功构建HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染BeWo细胞。低氧条件下,细胞HIF-1α蛋白和mRNA表达下降;同时细胞TGF-3β蛋白和mRNA表达也降低。结论构建的HIF-1α基因shRNA表达质粒在低氧条件下明显抑制滋养细胞TGF-3β基因的表达。

胎盘滋养层细胞系应用的研究进展

胎盘滋养层细胞作为胎盘屏障的主要组成细胞,不仅介导运输母体中的营养物质和免疫球蛋白给胎儿,并分泌激素和蛋白质进入母胎循环。研究者采用percoll密度梯度离心法、组织块法等不同细胞培养分离方法培养出纯度高的原代滋养层细胞,从而研究妊娠期受体介导母婴传播乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)进入细胞的分子机制。目前,已有学者以正常组织或绒毛膜癌组织建立起不同的滋养层细胞系,作为受体、激素在胎盘屏障转运机制的研究模型。文章就滋养层细胞的原代培养方法及已建立的滋养层细胞系与其应用进行了综述。

人绒毛膜促性腺激素上调滋养层细胞整合素β3和骨桥蛋白表达促进胚胎体外着床

目的探讨人绒毛膜促性腺激素(hCG)影响胚胎体外着床的分子调控机制。方法选择人滋养层细胞株BeWo及人子宫内膜细胞株RL95-2为研究材料。将BeWo细胞与RL95-2细胞共培养,以制备体外胚胎着床模型。对该模型进行如下研究。①通过间接免疫荧光方法,观察整合素β3及其配体骨桥蛋白(OPN)在BeWo细胞的定位表达;②采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分析不同含量hCG作用于BeWo细胞后,对BeWo细胞整合素β3及OPN的mRNA相对表达量影响;③通过BeWo球状体黏附实验和铺展实验,观察hCG作用于BeWo细胞后,对BeWo球状体在RL95-2单层细胞上黏附和植入的影响。采用单因素方差分析或t检验,对不同含量hCG作用于BeWo细胞后的BeWo细胞整合素β3及骨桥蛋白mRNA相对表达量,以及hCG处理前、后BeWo球状体黏附率及铺展倍数进行统计学比较。结果①整合素β3及OPN均在BeWo细胞的细胞膜表面表达。②1 000 IU/mL hCG作用于BeWo细胞后,整合素β3及OPN的mRNA相对表达量分别为(2.07±0.57)、(1.95±0.48),均高于10 IU/mL hCG作用于BeWo细胞后的(1.12±0.31)、-(8.44±0.18);1 000 IU/mL hCG作用于BeWo细胞后,整合素β3的mRNA相对表达量,高于100 IU/mL hCG作用于BeWo细胞后的(1.24±0.19),并且上述差异均有统计学意义(P=0.007、0.009、0.014)。③采用1 000 IU/mL hCG处理BeWo细胞后,在BeWo球状体+RL95-2单层细胞共培养0.5 h时的BeWo球状体黏附率为(89.51±6.47)%,显著高于无hCG处理的(50.24±7.73)%,并且差异有统计学意义(t=90.900、P<0.001)。④采用1 000 IU/mL hCG处理BeWo球状体+RL95-2单层细胞,共培养24 h时BeWo球状体铺展倍数为(2.28±0.52),高于无hCG处理的铺展倍数(1.93±0.36),并且差异有统计学意义(t=6.864、P=0.012)。结论 hCG可能通过上调滋养层细胞表面整合素β3及OPN的表达水平,促进胚胎体外着床。