医学实验用Beagle犬SPF化研究初探

用Beagle犬进行医学实验,具有良好的均一性,重复性和可比性。目前,已被国际上公认用医学实验用犬。然而用普通Beagle犬做实验,由于本身的健康状态,往往干扰实验结果的正确判断和科学研究的顺利进行。在血清学、放射生物学、微生物学及免疫学等方面的研究上,更是迫切需要SPF Beagle犬。鉴于此,确立了本项研究。

医学实验用Beagle犬SPF化研究初探

用Beagle犬进行医学实验,具有良好的均一性,重复性和可比性。目前,已被国际上公认为医学实验用犬。然而用普通Beagle犬做实验,由于本身的健康状态。

SPF级Beagle犬的人工饲育

本文报告在中型聚氯乙烯薄膜隔离器内,经剖腹产和人工哺乳共育成6条(2胎)SPF级Beagle犬。人工乳是在参考他人工作结果的基础上,采用市售奶粉及宝宝乐乳儿粉以一定比例配制而成的,经50万rad钴-60γ射线灭菌消毒后,再结合仔犬的营养需要,添加适当的维生素。经过5周人工哺乳,仔犬离乳时体重与普通饲养仔犬接近,离乳后生长良好。经微生物学检测,仔犬均已达到SPF级。

高效液相色谱-质谱联用法测定Beagle犬血浆中黄体酮的浓度

目的 建立灵敏的高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS),测定Beagle犬血浆中的黄体酮浓度。方法 选用Thermo Accucore C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm),以0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,采用梯度洗脱进行分离,流速为0.4 ml/min,进样量10μl。样品采用乙腈进行蛋白沉淀,通过电喷雾电离源,以多重反应监测(MRM)方式进行正离子检测,用于定量分析的离子对为m/z 315.1→109.2(黄体酮)和m/z 271.4→171.9(内标,甲苯磺丁脲)。结果 黄体酮的线性范围为0.5~100 ng/ml,定量下限(LLOQ)可达0.5 ng/ml,提取回收率(n=6)分别为95.97%,105.20%,108.09%,日内、日间精密度试验RSD均小于15%。结论 该方法操作简单,灵敏度高,准确,重现性好,适用于Beagle犬血浆样品中黄体酮的测定和药动学研究。

无特殊病原体(SPF)级BEAGLE犬培育研究成功

上海医科大学实验动物部(卫生部实验用大中心)的科技人员,经过二年多的努力,克服一个个技术难题,成功地研究培育了SPF级实验用BEAGLE犬。该项研究于1991年10月31日通过了卫生部级鉴定,与会专家给予很高评价。认为这是继小鼠、大鼠、沙鼠、金黄白鼠及豚鼠SPF化后的又一突破。为我国生物医学科学又提供了一种高级实验工具。

葛根素及其磷脂复合物在Beagle犬体内的药动学比较

目的研究葛根素及其磷脂复合物中葛根素在B eag le犬体内药动学。方法采用HPLC法测定犬血中葛根素,以同组犬(3只,雄性)交叉口服葛根素及其磷脂复合物,药-时曲线数据经3P 97药动学计算程序处理。结果分别以葛根素及其磷脂复合物给B eag le犬口服(剂量为葛根素52.5 m g/kg),葛根素的药-时过程符合开放型双室一级动力学模型,葛根素口服的AUC、Cm ax、tm ax分别为(10.91±4.83)m g.h/L、(3.00±1.13)m g/L、(1.62±0.30)h,而葛根素磷脂复合物的AUC、Cm ax、tm ax分别为(13.67±2.72)m g.h/L、(1.91±0.51)m g/L、(2.38±1.27)h,统计结果表明AUC之间差异有显著性。结论形成磷脂复合物可提高葛根素在B eag le犬体内的吸收。

实验动物比格(Beagle)犬自发性病变的研究

对46只实验比格犬（10～12月龄），进行一般临床检查，并随机选用18．只犬进行组织病理学观察。实验结果为部分犬的肝功能各丙转氨酶和谷草转氨酶偏高；肝、肺、肾和大脑等重要脏器有自发性病理改变；肺的间质性肺炎和大脑室管膜炎及血管围管性浸润发生率较高，部分肝细胞和肾小管上皮细胞呈现浊肿或空泡变等。提示对实验动物宜加强饲养管理，并需增加某些非传染疾病监测，尽可能减少实验动物的自发性病变对研究结果的干扰。

聚山梨酯80及其配制的鱼腥草注射液致Beagle犬类过敏反应实验研究

目的评价多种聚山梨酯80及其配制的鱼腥草注射液静脉给药对Beagle犬的致敏性。方法 Beagle犬是类过敏反应的敏感动物,以动物反应症状与血浆组胺升高为判断标准,综合判定类过敏反应。Beagle犬随机分为18组,每组3只,分别静脉注射不同厂家0.25%、0.10%、0.05%浓度的聚山梨酯80灭菌水溶液,或分别含0.25%、0.30%不同厂家聚山梨酯80的鱼腥草注射液。给药体积10mL/kg,前肢静脉恒速注射(速度5mL/min)。观察给药前至给药后24h每只犬的变化,记录症状出现、消失时间,并根据反应症状的轻重判定级别。给药前及停药后10min取血,ELISA方法检测血浆组胺含量,并结合反应症状级别,综合判定致敏性。结果各厂家、各浓度(0.05%、0.10%、0.25%)聚山梨酯80灭菌液以及各组鱼腥草注射液,均未导致Beagle犬出现典型的类过敏反应症状及血浆组胺升高1倍以上。综合判定,各组受试液均未诱发Beagle犬出现典型的类过敏反应。结论控制聚山梨酯80质量,并将使用浓度限定在0.30%或0.25%以下,可以在保证药物增溶效果的同时避免类过敏反应的发生。

去势Beagle犬前列腺增生模型的建立

目的 :利用Beagle犬建立前列腺增生模型。 方法 :2年龄雄性Beagle犬 2 4只 ,随机分成对照组和 3个剂量的实验组共 4组 ,每组 6只 ,去势 2个月后 ,肌注给药。实验组分别给予丙酸睾酮 (TP) 0 .8、2 .5、7.5mg/kg ,对照组给予等体积溶剂。 2个月后 ,处死 12只动物 ,取前列腺组织 ,称重测量体积 ,放免法测定血清及前列腺组织中双氢睾酮 (DHT)水平 ,组织切片观察前列腺腺腔面积及腺上皮细胞高度。B超测量去势前、后 2个月及给予TP 2个月时犬前列腺体积。 结果 :B超结果显示 ,去势 2个月后 ,各组犬前列腺体积较去势前均明显缩小 (P均 <0 .0 1) ;给予TP 2个月后 ,各实验组犬前列腺体积明显大于对照组 (P均 <0 .0 1)。各实验组犬前列腺湿重及实际体积与对照组相比 ,均明显增重增大 (P均 <0 .0 5 ) ,并存在剂量依赖关系。犬血清及前列腺中DHT含量随TP剂量的增大而增加。显微图像分析结果显示 ,犬前列腺腺腔面积随TP剂量增大而增加 ,腺上皮细胞高度也随TP剂量增大而增高。 结论 :给予去势Beagle犬TP 2个月后 ,可成功建立前列腺增生模型。

Beagle犬的生物学特性及在药理毒理试验中的应用

对国内Bealge (比格 )犬的体长、体重、血液学、血液生化学、心血管系统和呼吸系统的生物学特性进行了评价 。

抗EB病毒口服液对Beagle犬的长期毒性研究

目的评价抗EB病毒口服液的长期毒性作用,为临床实验提供安全性依据。方法将Beagle犬分为抗EB病毒口服液76.41、25.47、8.49g生药/kg3个剂量组及空白对照组,每组6只,♀♂各半,每天灌胃给药1次,每周连续给药6d,共26wk,检查各指标并进行恢复性观察。结果给药期间高剂量组犬出现明显呕吐症状,中剂量组犬也出现相同胃肠道刺激症状,但反应较轻。恢复期高剂量组1只犬出现尿蛋白强阳性,中剂量组1只犬出现尿潜血强阳性。各剂量组犬的体重、体温、食量和心电图、血液学、血液生化学、眼科、骨髓、尿常规、病理组织学检查等均未见与药物有关的明显毒性反应。结论抗EB病毒口服液对Beagle犬的无毒反应剂量为8.49g生药/kg。

电针刺激对Beagle犬展神经损伤修复的研究

目的建立展神经损伤电针刺激的动物模型,研究电针刺激对展神经损伤修复的疗效。方法 24只Beagle犬随机均分为单纯损伤组（对照组）及损伤后电针刺激组（实验组）。行展神经脑池段压榨损伤,展神经刺激电极及外直肌记录电极植入。于术后1-12周,测量2组瞳孔中心至外眦内侧缘距离。结果所有Beagle犬均能耐受手术,颅内刺激电极和外直肌记录电极成功植入;术后1-2周,2组Beagle犬瞳孔中心至外眦内侧缘距离比较差异无统计学意义,术后4-12周,实验组Beagle犬瞳孔中心至外眦内侧缘距离小于对照组（P〈0.01）。结论成功建立应用于展神经损伤电针刺激的动物模型,电针刺激可以明显促进损伤的展神经恢复。

HPLC-MS法测定Beagle犬血浆中氧化苦参碱及其药代动力学

目的 :建立Beagle犬血浆中氧化苦参碱的LC MS测定法 ,测定它的绝对生物利用度。方法 :Beagle犬 6只 ,随机分为 2组 ,采用单剂量双周期自身交叉设计 ,分别给犬单剂量静脉注射或灌胃氧化苦参碱 ,用LC MS法测定给药后的血浆中药物浓度。结果 :氧化苦参碱在 2～ 5 0 0 0 μg·L-1的范围内呈良好的线性关系 (r =0 .9990 ) ,最低检出限达0 .6 μg·L-1,日内和日间误差均小于 4 .2 % ,方法回收率大于 96 .7% ;氧化苦参碱的药 时数据符合二室模型 ,Cmax为 2 .4 2± 0 .97μg·L-1,Tmax为 1.0± 0 .3h ,T1 2 β为 5 .5 4± 1.5 8h ,AUC0→∝ 为 6 .12± 1.0 8μg·L-1·h-1,绝对生物利用度为 (19.4± 9.0 1) %。结论 :该法灵敏、简单 ,专属性强 ;

丙酸睾酮对去势beagle犬前列腺上皮细胞的影响

目的 探讨丙酸睾酮与犬前列腺上皮细胞生长的关系。方法 去势beagle犬经丙酸睾酮处理后 ,获取前列腺组织 ,利用放射免疫分析法 (RIA)测定前列腺组织中双氢睾酮 (DHT)含量。组织经石蜡包埋切片 ,HE染色 ,显微镜下观察前列腺的组织学变化 ,并借助显微图像分析技术测定前列腺腺腔大小及腺上皮细胞高度。免疫组织化学技术检测前列腺上皮细胞前列腺特异抗原 (PSA)及酸性磷酸酶(PAP)的表达。结果 去势犬经丙酸睾酮处理后 ,前列腺中DHT水平明显升高。光镜下前列腺腺腔增大 ,腺上皮细胞增高。图像分析结果显示前列腺腺腔面积明显增大 (P <0 .0 1) ,增大后面积分别为对照组的 4 .5～ 7倍 ,腺上皮细胞高度明显增高(P <0 .0 1) ,细胞增高幅度分别为对照组的 4～ 8倍。免疫组化结果显示丙酸睾酮处理组前列腺上皮细胞PSA表达高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,PAP的表达也高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 去势犬前列腺上皮细胞生长及功能正常发挥依赖于雄激素 。

Beagle犬经口给予六神丸急性毒性研究

目的六神丸全方单次给药毒性的再评价;六神丸配方对蟾酥组分的配伍毒性关系研究。方法分为六神丸全方组、六神丸去蟾酥组和蟾酥组。给Beagle犬经口灌胃给予药物,间隔2d提高剂量给药一次。结果在1.8-48.6mg/kg剂量范围内,六神丸去蟾酥组动物均未见明显异常;在5.4mg/kg以上剂量蟾酥配方组动物出现呕吐、稀便、活动减少等症状。在〉1.8mg/kg剂量时,六神丸全方组动物出现呕吐、活动减少等症状,一只雌性动物出现进食量减少和体重下降的情况,并且在48.6mg/kg剂量时,一只雄性动物死亡。心电图：六神丸全方组和蟾酥配方组出现剂量依赖性心率减慢、S-T振幅降低和T波倒置等,但在16.2和48.6mg/kg剂量时,去蟾酥配方的Q波振幅增加。血液学：在毒性剂量（16.2和48.6mg/kg）时,出现红细胞数升高、血红蛋白浓度升高、红细胞比容升高、血小板数升高、淋巴细胞比例下降。血清生化学：在毒性剂量（16.2和48.6mg/kg）时,血清丙氨酸氨基转换酶、白蛋白及胆固醇水平均升高。结论六神丸配方对蟾酥组分未见明显减毒影响;Beagle犬灌胃给予六神丸的最大耐受剂量为1.8mg/kg,最小致死剂量为48.6mg/kg。

Beagle犬牙龈成纤维细胞的体外分离培养

背景:Beagle犬性情温和、遗传背景明确,且牙周结构与人类相似,是研究牙周疾病的常见大型动物模型。目的:体外分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞。设计、时间及地点:观察对比实验,于2006-09/2007-02在福建医科大学附属口腔医院中心实验室和解放军南京军区福州总院比较医学科完成。材料:Beagle犬5只,12月龄,体质量10～13kg,雄性。方法:基础麻醉下,切取Beagle犬游离龈。使用半消化+改良组织块法分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞;手术及组织学观察确定组织块来源。以经成骨诱导的骨髓基质干细胞作为阳性对照组,试剂盒内标准品作为标准组,蒸馏水作为空白组。主要观察指标:免疫细胞化学及碱性磷酸酶检测明确细胞来源;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖状况。结果:未经胰酶处理的组织块边缘锐利,组织致密;上皮细胞迅速增殖,呈鹅卵石样占满组织块周边。经胰酶处理过的组织块疏松,其周围上皮细胞少,成纤维样细胞游出迅速。波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性。结果证实所取组织块为Beagle犬游离龈;免疫细胞化学证实细胞源于中胚层。此成纤维样细胞基本不表达碱性磷酸酶,细胞增殖状况良好。结论:使用半消化+改良组织块法能够分离、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞。

低强度脉冲超声波对Beagle犬Ⅱ度根分叉病变的辅助效应

背景:低强度脉冲超声波主要用于促进骨折愈合及提高新生骨组织密度,尚未见其对Ⅱ度根分叉病变组织学修复效应的报道。目的:观察低强度脉冲超声波对Ⅱ度根分叉病变的组织学修复效应。方法:5只Beagle犬各取2颗下颌第4前磨牙颊侧作为实验区,建立Ⅱ度根分叉病变模型,分别分为超声组和对照组并在颊侧缺损龈方根面制备切迹作为参照点,高糖饲养8周。超声组行根面平整术,术后1周行低强度脉冲超声波(90mW/cm21.5MHz,200μs,1kHz)处理20min/d,对照组行根面平整术和假处理。6周后取实验区域组织制备脱钙切片,苏木精伊红染色、Masson染色行根分叉区域组织测量分析。结果与结论:超声组根分叉区新生牙槽骨沿根面生长,根分叉区可见牙龈上皮;对照组根分叉区以结缔组织生长为主,可见大量牙龈上皮和少量新生骨组织。超声组新生牙槽骨胶原呈"红-蓝"相间,以红染为主;对照组呈现蓝染,即超声组的新生牙槽骨胶原较对照组成熟。超声组牙槽骨、牙骨质、牙周膜新生量均大于对照组(P<0.05)。提示90mW/cm2低强度脉冲超声波可促进根分叉病变新生牙槽骨胶原成熟和改建。

UPLC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中S-奥拉西坦浓度(英文)

目的:建立灵敏、准确的Beagle犬血浆中S-奥拉西坦浓度的UPLC-MS/MS检测方法,并用于该药在Beagle犬体内的药动学研究。方法:血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以甲醇-水溶液(85∶15,V/V,内加10mmoL乙酸铵和0.1%甲酸)为流动相,用HP Amide LC-MS/MS Column(100mm×3mm ID,5μm)分离,采用电喷雾离子源,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测,定量分析的离子反应分别为m/z 159.0/114.1(S-奥拉西坦)和m/z 143.0/126.1(内标,吡拉西坦)。结果:S-奥拉西坦线性范围为0.05～50μg/mL,定量下限为0.05μg/mL,日内、日间精密度(RSD)均小于15%。S-奥拉西坦大鼠血浆样品在储存、预处理、分析期间均显示良好的稳定性。应用此法研究了6只Beagle犬单剂量口服S-奥拉西坦50mg/kg后的药动学特点。结论:该方法快速、专属、灵敏、适用性强,可应用于S-奥拉西坦的临床前药动学研究。

龙胆苦苷在Beagle犬体内药代动力学研究

目的建立龙胆苦苷在Beagle犬血清中的含量测定方法,研究龙胆苦苷在Beagle犬体内的动力学规律。方法建立快速敏感的高效液相色谱检测方法,使用外标法,以龙胆苦苷静脉注射给药,Beagle犬含药血清样品经液-液萃取后在C18反相色谱柱上进行分离测定。结果龙胆苦苷血药浓度在0.1343～687.375μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r2=0.99993)。方法回收率为81.15%～97.99%,最低检测限为0.1343μg·mL-1。结论龙胆苦苷在Beagle犬体内的药动学过程表现为静脉内给药一房室模型,其中平均半衰期t1/2=1.1324h,消除速率常数Ke=0.5811h-1,表观分布容V=0.5316L·kg-1,消除率CL=0.3274L·kg-1·h-1。提示龙胆苦苷在体内经历了迅速分布、消除过程,在体内不易蓄积。

化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响

目的研究化州柚提取物对Beagle犬心血管系统和呼吸系统的影响。方法采用生理记录仪观察灌胃给药前后Beagle犬血压、呼吸频率、呼吸幅度、Ⅱ导联P、R、T、QRS波、PR、QT间期等指标的变化。结果给药后各时间点的指标与给药前相比,无显著性差异(P>0.05)。结论单次经口给予化州柚提取物5、50、300mg/kg,对Beagle犬心血管系统和呼吸系统无不良影响。