人体乳腺癌细胞系BGaP-37和MGF-7的细胞遗传学研究

本文应用普通染色体G一显带技术和高分辨染色体显带技术对两个人体乳癌细胞系进厅了详尽的细胞遗传学研究。结果显示两个细胞系均具有较复,桀的染色体结构和数目_}辛常。Bcap一3 7细胞系染色体众数为62～63,具有23个可识别其结构的标记染色体。MCF一7细胞系染色体众效为55—56,具有l9个可识别其结构的标记染色体,进一步分析认为,第1、3、5、7、11、13和17号染色体的数目和结构改变,可能与乳腺癌的发生和演进有一定联系;染色体断点1p^(11)(1q^(11))、1p^(13)、3p^(21)、3q^(11)、5q^(11)、7p^(13)、7q^(22)及导致11p^-、17p^-6q^-、13q^-的断裂点可能通过癌基因的激活和抗癌基因的丢失而起一定怍用。

Cyclopamine对人乳腺癌细胞Bcap-37生长和增殖的影响

目的：研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人乳腺癌细胞Bcap-37生长和增殖的影响。方法：培养Bcap-37细胞系，加入Hedgehog（Hh）信号通路特异性抑制剂Cyelopamine作用72h，观察光镜下细胞形态学的变化；采用单四唑（Mar）和溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入的方法，检测Cyclopamine对Beap-37细胞系生长和DNA合成的影响；再用流式细胞仪检测Cyclopamine对Bcap-37细胞周期的影响。结果：与对照组相比，加入5×10^-6mol／L的Cyclopamine后在倒置显微镜下可见细胞立体感消失，细胞内空泡增多；5×10^-6mol／L的Cyelo-pamine使Bcap-37细胞的生长曲线下移，10^-7-10^-5mol／L的Cyelopamine可剂量依赖性地抑制Bcap-37细胞的生长；Bcap-37细胞系的DNA合成被Cyelopamine明显抑制，S期细胞比例降低，并出现了明显的G2期阻滞。结论：Cyclopamine可以有效地抑制Bcap-37细胞的生长和增殖，提示Hh信号通路可能在乳腺癌中被异常激活，抑制Hh信号通路的活性可能对乳腺癌的治疗起到一定的作用。

抗菌肽LL-37在巨噬细胞促卵巢癌细胞增殖中的作用

目的研究抗菌肽LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌细胞增殖中的重要作用。方法采用Transwell插入式细胞培养皿共培养人巨噬细胞和卵巢癌细胞株SKOV3、3AO和HO-8910。采用溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）-酶联免疫吸附试验（ELISA）法和细胞计数法检测巨噬细胞对卵巢癌细胞增殖能力的影响。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot法检测巨噬细胞和SKOV3细胞中LL．37mRNA和蛋白的表达。应用LL-37中和抗体抑制LL-37的功能活性，观察LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌细胞增殖中的作用e结果细胞计数法检测结果显示，SKOV3细胞与巨噬细胞以1：0．5的比例共培养4d后，SKOV3细胞的数量从（6．0±0．5）×10^4个增加为（11．8±1．3）×10^4个，差异有统计学意义（P〈0．05），并且随着共培养的巨噬细胞比例的增加，SKOV3细胞的数量也随之升高（P〈0．05）。与巨噬细胞共培养后，3AO和HO-8910细胞的数量变化趋势与SKOV3细胞相似。BrdU—ELISA法检测的结果与细胞计数法一致。RT-PCR和Westem blot法检测结果显示，在与卵巢癌SKOV3细胞共培养后，巨噬细胞中LL-37 mRNA和蛋白的表达均上调，且随着时间的延长其表达增加，但其在SKOV3细胞中的表达并未增强。BrdU—ELISA法检测的结果显示，经LL-37处理后，HO-8910和3AO细胞的增殖能力明显增加；但加入LL-37中和抗体后，可明显抑制巨噬细胞对SKOV3、3AO和HO-8910细胞的增殖促进作用，这3株细胞的吸光度分别从2．95±0．11降至1．45±0．04，3．39±0．36降至1．32±0．09，3．93±0．17降至1．68±0．23（均P〈0．05）。结论在与卵巢癌细胞相互作用的条件下，巨噬细胞通过增强抗菌肽LL-37的表达和分泌促进了卵巢癌细胞的增殖。LL-37在巨噬细胞促进卵巢癌的发展中扮演重要角色。

体外评估多烯紫杉醇与顺铂给药顺序依赖性的相互作用(英文)

目的 :将多烯紫杉醇与顺铂以不同给药顺序处理人乳腺癌细胞研究两者细胞毒性的相互作用。方法 :应用一系列体外实验如DNA片段分析、MTT测定、流式细胞仪分析和蛋白印迹法分析两者以不同给药顺序的实验结果。结果 :显示当同时给药或顺铂在多烯紫杉醇前给药则发生拮抗作用 ;多烯紫杉醇在顺铂前给药则不发生拮抗作用。结论 :顺铂干扰多烯紫杉醇对癌细胞的捕获和细胞凋亡 ,并影响多烯紫杉醇诱导的bcl 2磷酸化 ;

白细胞介素-37在人HepG2细胞中的表达

[目的]研究白细胞介素-37(interleukin-37,IL-37)在人肝肿瘤细胞系(HepG2)细胞中的表达,及在炎症因子刺激下,HepG2细胞中IL-37表达水平的改变。[方法]在37℃、5%CO2条件下培养人HepG2细胞,以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞,分别于刺激24h、48h、72h后提取细胞,分别提取细胞总RNA、总蛋白,利用逆转录酶聚合链反应技术(RT-PCR)检测细胞中IL-37-mRNA的表达,利用Western blot技术检测细胞中IL-37蛋白的表达水平。并且在LPS刺激细胞72h后,运用免疫荧光和激光共聚焦技术检测IL-37在细胞中的表达定位。[结果]RT-PCR结果证明HepG2中存在IL-37-mRNA的表达,且随着LPS刺激时间的延长IL-37-mRNA表达增多,0h(无刺激)、24h、48h、72h灰度值分别为0.10±0.008、0.14±0.014、0.22±0.010、0.28±0.014;Western blot结果显示细胞中存在IL-37蛋白的表达,且其表达趋势与IL-37mRNA表达趋势相同,即随着刺激时间延长,HepG2中IL-37蛋白表达增多,由24h、48h、72h分别为0.54±0.16、0.87±0.04、1.51±0.18;免疫荧光共聚焦结果显示IL-37在细胞核和细胞质中均有表达,以细胞核周围表达最为丰富。[结论]人HepG2细胞中存在IL-37表达,炎症因子刺激后,IL-37mRNA及IL-37蛋白表达水平均呈升高,趋势相同;IL-37在HepG2细胞质内和细胞核内均表达,以细胞核周围表达最为丰富。

HBV感染HepG2细胞早期过程研究

目的 探讨HBV吸附穿入HepG2细胞的方式,明确HBV难以自然感染细胞系的受限因素,为建立HBV自然感染细胞模型奠定基础。方法 在4℃和37℃条件下,HBV吸附HepG2细胞,用PCR方法检测胰酶消化液和细胞内的病毒DNA。另一部分HepG2细胞经过低温同步化处理,接种HBV后,于不同时相分别收集细胞和培养上清液,其中部分细胞进行核浆分离,通过间接免疫荧光、ELISA和PCR方法分别检测其中的病毒抗原和DNA,并且通过选择性PCR检测HepG2 细胞HBVcccDNA。结果 在4℃条件下,HBV只是吸附于HepG2细胞膜表面。37℃条件下,部分吸附于HepG2细胞表面的病毒颗粒发生穿入,进入细胞浆,HepG2细胞和胰酶溶液中均可检出HBV DNA。接种病毒后4 h、8 h、24 h HepG2细胞HBV DNA均呈阳性,至48 h转为弱阳性,而96 h为阴性。各时相上清液HBV DNA和病毒抗原均为阴性。HBV穿入HepG2细胞后,首先主要分布于胞浆中,随后出现胞核聚集性,胞浆中的病毒逐渐减少直至消失(感染后24 h),而胞核中的病毒数量早期逐渐增加,从48 h开始呈下降趋势,至96 h消失。病毒接种后8 h核膜与核浆中均可检出病毒DNA。各时相cccDNA检测始终阴性。结论 HBV可能以“共受体”模式感染靶细胞。病毒脱衣壳过程受阻可能是HepG2细胞不支持HBV复制型感染的主要受限因素。