基于LC-MS分析白僵菌侵染家蚕过程中主要代谢物的变化

利用LC-MS分析方法,从代谢组学角度分析白僵菌Beauveria bassiveria侵染家蚕Bombyx mori幼虫过程中的代谢物种类变化,基于KEGG Pathway数据库对差异代谢物进行富集分析。结果表明:在白僵菌孢子萌发前期,主要产生荜茇酰胺、地奥司明、juglalin等40种代谢物,以黄酮类、生物碱为主;在白僵菌芽管期形成I期,主要产生苦杏仁苷、isorhamnetin-3-glucoside、生物素、烟酸等39种代谢物,以有机酸、糖苷类、维生素类为主;在白僵菌芽管期形成II期,主要产生myristoleic acid、ephedrine、verruculogen、阿霉素、D-glycero-D-galacto-heptitol等100种代谢物,以有机酸、生物碱、抗生素类为主;在白僵菌附着胞形成期,主要产生neoglucobrassicin、2-aminoisobutyric acid等21种代谢物,以糖苷类、氨基酸类为主。与孢子萌发前期相比,白僵菌到芽管期形成I期,有138种代谢物显著上调,主要是有机酸类、氨基酸类、酯类,97种代谢物显著下调,主要是有机酸类、醇类、胺类;与芽管期形成I期相比,到芽管期形成II期,有136种代谢物显著上调,主要是有机酸类、胺类、核苷类,60种代谢物显著下调,主要是有机酸类、酯类、氨基酸类;与芽管期形成II期相比,到附着胞形成期,有52种代谢物显著上调,主要是有机酸类、氨基酸类、酰胺类、酚类、糖类,242种代谢物显著下调,主要是有机酸类、酯类、酚类、氨基酸类、酰胺类、核苷类。在白僵菌侵染过程中,差异代谢物主要参与的代谢通路有FoxO signaling pathway、mTOR signaling pathway、local analgesics等,且到芽管期形成期,差异代谢物参与的代谢通路较多。该研究可为揭示白僵菌对寄主昆虫的侵染机制提供理论参考。

金龟子绿僵菌和球孢白僵菌对大黑鳃金龟二龄幼虫的致病力

为了筛选生物防治大黑鳃金龟(Holotrichia diomphalia Batesa)的高毒力生防虫生真菌,室内生物测定和比较了金龟子绿僵菌[Metarhizium anisopliae Metschnikoff(Sorokin)]KMa0107菌株、球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]菌株Bb070610和Bb070917对大黑鳃金龟2龄幼虫的致病力。结果表明:接种后5~12 d,KMa0107,Bb070610和Bb070917菌株对大黑鳃金龟2龄幼虫的致死剂量对数值间差异显著(F=19.45,P<0.01),分别为(9.45±1.71)^(4.73±0.37)、(9.76±1.87)^(5.20±0.79)、(10.48±1.24)^(5.99±0.43)。用密度为1.15×108~1.15×105个/m L的孢子悬浮液接种后,对大黑鳃金龟2龄幼虫侵染致病的LT50估计值范围为5.7~8.7 d,6.4~9.2 d,6.3~8.6 d。接种孢子悬浮液后,随着病原菌的侵染及其在虫体内的繁殖,大黑鳃金龟2龄幼虫血淋巴中蛋白质质量浓度逐渐减少。接种后第4天,幼虫血淋巴中蛋白质质量浓度均明显下降,接种KMa0107及Bb070610的大黑鳃金龟2龄幼虫血淋巴蛋白质质量浓度下降速度显著大于Bb070917菌株处理。接种后第10天,菌株KMa0107及Bb070610处理的大黑鳃金龟2龄幼虫血淋巴蛋白质质量浓度显著低于对照及Bb070917菌株处理(F=17.36,P<0.01)。综合以上结果,金龟子绿僵菌KMa0107及球孢白僵菌Bb070610菌株对大黑鳃金龟2龄幼虫具有较强的致病力,具有良好的生防制剂开发潜力。

球孢白僵菌原生质体制备和再生条件

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin]经液体培养后,采用酶解方法制备其菌丝原生质体,并采取单因素实验对再生条件进行了研究。结果表明,经纤维素酶制备球孢白僵菌原生质体后,再生的最佳条件是:用L-broth培养基培养球孢白僵菌78h,KCl 0.8mol/L(再生用蔗糖0.6mol/L),柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为缓冲系统,纤维素酶:蜗牛酶:溶菌酶=5:2.5:2.5(mg/mL),在32℃水浴中酶解3h(pH自然)。

球孢白僵菌和金龟子绿僵菌对红火蚁工蚁的致病力测定

为了评价白僵菌和绿僵菌对红火蚁的致病力,寻找其生物防治菌株资源,采用浸液法测定了11株球孢白僵菌(Beauveria bassiana Balsamo)和9株金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae Metschnikoff)菌株对红火蚁工蚁的致病力。结果表明:以浓度1×10^7个孢子·mL-1接菌红火蚁工蚁,10 d后,白僵菌和绿僵菌对其校正死亡率范围分别为(6.47±0.98)%^(67.14±0.22)%和(35.13±1.25)%^(81.93±0.94)%;白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株对红火蚁的致病力较强,致死速度较快,致死中时(LT50)分别为(5.64±0.52)d和(4.78±0.46)d。测定不同浓度对红火蚁的致病力,白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株以浓度1×10^8个孢子·mL^-1接菌后10 d,其校正死亡率分别为(79.59±0.5)%和(99.20±0.80)%,僵虫率为(63.24±0.51)%和(81.92±1.39)%,两菌株对红火蚁6 d的致死中浓度(LC50)分别为1.01×10^6和2.42×10^5个孢子·mL^-1。通过时间-剂量-死亡率模型分析,两个菌株致死效应最强的时间均是接菌后3~5 d。综合分析,白僵菌BSX-PC和绿僵菌MaWys-01菌株在红火蚁生物防治中有较大应用潜力。

白僵菌防治银杏大蚕蛾初报

调查结果表明:白僵菌在温湿度达到要求的条件下,喷撒在林木、林地上或银杏大蚕蛾幼虫虫体上,其孢子接触虫体后产生芽管,通过体表侵入其体内长成菌丝,并不断繁殖,使幼虫新陈代谢紊乱致病僵冻死亡,效果显著。