α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平

目的观察α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)Z型突变体(α1-antitrypsin Z variant,ATZ)表达对细胞自噬水平的影响,探讨ATZ细胞毒作用的可能机制。方法体外培养人胚肾细胞株HEK 293T并转染ATZ真核表达质粒,利用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,免疫荧光染色观察LC3的细胞定位,real-time PCR法检测自噬相关基因Atg5、Atg12和Beclin1的变化,DAB染色观察ATZ过表达对细胞形态的影响。结果与转染空质粒对照组相比,ATZ过表达促进细胞自噬的标志分子LC3由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62水平降低;而经自噬抑制剂氯化铵处理后,ATZ过表达细胞中出现LC3点状聚集,p62水平增加;同时,ATZ过表达明显增加自噬相关基因Atg5、Atg12的mRNA水平,而对Beclin1无明显影响;少量表达ATZ的细胞形态基本正常,细胞中LC3形成点状聚集;反之,过度表达ATZ的细胞核变小、固缩甚至消失,无LC3-Ⅱ表达。结论过表达ATZ通过增加Atg5和Atg12表达激活自噬,这可能与其细胞毒性有一定相关性。