IL-35、Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义

目的探讨白细胞介素(IL)-35、自噬相关蛋白Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义。方法选取2022年5-10月在上海市嘉定区妇幼保健院诊治的原发性乳腺癌女性患者44例(乳腺癌组)、乳腺良性肿瘤女性患者40例(乳腺良性肿瘤组)及体检的健康者40例(健康对照组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测并比较各组外周血中IL-35和Beclin-1水平,同时检测乳腺癌患者糖类抗原15-3(CA15-3),比较不同临床病理特征的乳腺癌患者IL-35、Beclin-1、CA15-3水平;分析乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1、CA15-3水平之间的相关性。结果乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组外周血IL-35水平均高于健康对照组(P<0.05),Beclin-1水平均低于健康对照组(P<0.05)。乳腺癌组外周血IL-35水平高于乳腺良性肿瘤组(P<0.05),Beclin-1水平低于乳腺良性肿瘤组(P<0.05)。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同雌激素受体(ER)检测结果的乳腺癌患者外周血IL-35水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而Beclin-1水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关(r=-0.484,P<0.05);IL-35、Beclin-1水平与CA15-3水平均无相关性(均P>0.05)。结论乳腺癌患者外周血IL-35水平升高、Beclin-1水平降低。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平有明显差异。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关,而IL-35、Beclin-1水平与肿瘤标志物CA15-3水平均无关。

痛风性关节炎患者血清RETN、Beclin-1的表达及其临床意义

目的探讨痛风性关节炎(GA)患者血清抵抗素(RETN)、Beclin-1的表达特点,分析其与GA临床特征及临床疗效的关系。方法将2019年1月至2022年12月东莞市人民医院收治的82例GA患者(GA组)和60例健康志愿者(对照组)纳入研究。GA患者治疗前后(对照组体检当日)检测血清RETN、Beclin-1的表达,比较不同临床特征和疗效GA患者血清RETN、Beclin-1表达差异。Pearson相关性分析GA患者血清RETN、Beclin-1表达与尿酸(UA)水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清RETN、Beclin-1对GA的诊断价值。结果GA组血清RETN水平高于对照组,Beclin-1相对表达水平低于对照组(P<0.05)。急性期、病程≥5年、受累关节≥5个、年发作频率≥3次GA患者血清RETN水平高于慢性期和间歇期、病程<5年、受累关节<5个、年发作频率<3次GA患者(P<0.05),Beclin-1相对表达水平低于慢性期和间歇期、病程<5年、受累关节<5个、年发作频率<3次GA患者(P<0.05)。GA患者血清UA水平与RETN水平呈正相关(r=0.674,P<0.05),与Beclin-1相对表达水平呈负相关(r=-0.568,P<0.05)。有效组治疗后血清RETN水平低于无效组,Beclin-1相对表达水平高于无效组(P<0.05)。联合RETN、Beclin-1诊断GA的曲线下面积为0.921,高于单独诊断(Z=3.752、3.154,P<0.05)。结论GA患者血清RETN水平增高,Beclin-1相对表达水平降低,且与UA水平增高、GA急性期、病程延长、受累关节数量和年发作频率增加及治疗无效有关。RETN、Beclin-1可作为GA诊断的标志物。

有氧运动通过AMPK/ULK1/Beclin1通路调节模拟失重导致的心脏功能变化的研究

目的探讨模拟航天飞行失重引起心肌损伤以及有氧运动干预促进大鼠心肌恢复的可能机制。方法8周龄雄性SD大鼠40只,体重180~210 g,随机分为对照组和实验组,对照组随机分为对照组C1和对照组C2,实验组随机分为悬吊组T1、有氧运动组A和自然恢复组R,每组8只;采用电子天平称量大鼠体重相关指标;采用超声心动图和离体心脏灌流检测各组大鼠心脏功能指标;采用Western Blot法检测各组大鼠心肌组织中AMPK/ULK1/Beclin1通路相关蛋白的表达。结果(1)相较于对照组C1,悬吊组T1体重无显著性差异(P>0.05),比目鱼肌的湿重、比目鱼肌湿重体重比和心脏重量均显著下降(P<0.01)。(2)尾部悬吊4周和有氧运动4周后,心脏功能相关指标发生显著性变化,悬吊组T1AMPK和p-ULK1的表达水平显著上升(P<0.01),p-AMPK的表达量显著上升(P<0.05)。有氧运动4周后,相较于对照组C2,自然恢复组R的AMPK和ULK1的表达量显著上升(P<0.05);有氧运动组A的p-AMPK的表达量显著下降(P<0.05),p-ULK1的表达量显著下降(P<0.01)。相较于自然恢复组R,对照组C2的心肌蛋白AMPK的表达量显著下降(P<0.05),ULK1的表达量显著下降(P<0.01);有氧运动组A的AMPK、ULK1的表达量显著下降(P<0.01);p-ULK1的表达量显著下降(P<0.05)。结论(1)尾部悬吊4周后,发现大鼠的比目鱼肌湿重、以及湿重体重比显著降低,心脏的重量和心脏功能相关指标也显著降低,AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1、Beclin1表达量上升;(2)有氧运动4周后,发现尾部悬吊大鼠的心肌形态,心肌超微结构和心脏功能相关指标上升,心脏功能得到一定的改善,AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1、Beclin1表达量下降;(3)心脏功能的损伤和改善与通过AMPK/ULK1/Beclin1通路调控相关蛋白AMPK、p-AMPK、ULK1、p-ULK1、Beclin1表达有关。

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的观察艾灸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠炎症因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及滑膜细胞中自噬相关因子Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达的影响,探索艾灸治疗RA的作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、艾灸组,每组9只。采用弗氏完全佐剂造模法制备RA大鼠模型。造模成功后艾灸组予艾灸足三里、关元,每次20 min,每天1次;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0.35 mg/kg灌胃,每周2次。空白组、模型组、甲氨蝶呤组每天给予艾灸组大鼠同样时长及强度的捆绑。每组均干预3周。观察大鼠一般情况,采用足趾容积测量仪检测大鼠左后肢足趾容积,ELISA法检测血清中IL-2含量,Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果与模型组比较,甲氨蝶呤组及艾灸组精神一般,反应尚可,体质量恢复,较活跃,摄食、饮水尚可,足部肿胀、红肿缓解,其局部炎症及全身多发性关节炎情况均轻于模型组。与空白组比较,模型组大鼠于造模后第3、10、17、24天足趾容积明显增大(P<0.01),结合一般情况,提示模型制备成功;甲氨蝶呤组、艾灸组足趾容积于第24天增大(P<0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组造模后第17、24天足趾容积降低(P<0.05,P<0.01),艾灸组第10、17、24天足趾容积明显降低(P<0.01)。干预3周后,与空白组比较,模型组血清中IL-2含量明显升高(P<0.01),滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显上升(P<0.01);与模型组比较,甲氨蝶呤组、艾灸组血清中IL-2含量降低(P<0.05),艾灸组滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.05)。结论艾灸能改善RA大鼠关节肿胀,降低IL-2含量,其作用机制可能是通过调节自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量有关。

Beclin-1与P62在骨质疏松症中的研究进展

骨质疏松症(OP)是一种以全身性骨量丢失、骨微结构破坏为特征的骨骼疾病,根本病因在于由成骨细胞和破骨细胞介导的骨形成与骨吸收动态平衡失调,骨吸收大于骨形成。而自噬对OP的发生、发展起着重要作用,自噬水平的变化是影响骨平衡的关键因素。研究证实,自噬相关分子Beclin-1、P62通过不同层面直接调控自噬小体的形成,从而影响OP的发生与发展。该文对Beclin-1、P62在OP中的表达机制、作用特点及靶向治疗作一概述,为今后OP的防治以及进一步研究提供理论基础。

自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在胸腔积液中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在良恶性胸腔积液中的表达,分析其临床意义。方法:通过液基薄层细胞学检查及免疫组化检查并结合患者临床资料纳入300例胸腔积液标本作为研究对象,分为group165例(漏出性胸腔积液组)、group2142例(非肿瘤炎性胸腔积液组)及group393例(非小细胞肺癌性胸腔积液组),通过RT-PCR方法及Western blot方法分别检测各组胸腔积液中mTOR、Beclin-1及LC3在基因及蛋白水平的表达。结果:在基因和蛋白表达水平,group1及group2相较于group3在Beclin-1和LC3的表达水平均升高,而mTOR的表达则显著减低,差异均有统计学意义;同时,group2较group1在Beclin-1和LC3表达中均降低,mTOR的表达则升高,差异均有统计学意义;此外在良、恶性胸腔积液相关性分析中发现,在蛋白水平Beclin-1相对表达值与LC3表达值呈正相关,而mTOR相对表达值与Beclin-1、LC3表达值呈负相关。结论:自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在不同性质胸腔积液中表达存在差异,可能与炎性及非小细胞肺癌引起的肿瘤性胸腔积液的发病机制有关,可为胸腔积液性质鉴定提供新的分子学依据。

美洲大蠊研粉干预脊髓半横断大鼠运动功能和自噬蛋白Beclin-1的表达

背景:脊髓损伤有氧化应激、炎症、凋亡、自噬等机制参与其中,激活自噬可改善脊髓损伤后的神经运动功能,对脊髓起保护作用。目的:探讨美洲大蠊研粉对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和损伤区域自噬蛋白Beclin-1的影响。方法:取30只6-8周龄SD大鼠,采用随机数字表法分为3组,每组10只:假手术组仅打开椎板,暴露脊髓后缝合;生理盐水组与美洲大蠊组均建立左侧脊髓半横断损伤模型,术后第1天开始分别灌胃给予生理盐水与美洲大蠊研粉,连续给药14 d。术后6 h及1,3,7,14 d行BBB评分,观察后肢运动功能的情况;给药14 d后处死大鼠,采用免疫组化染色、Western Blot检测、免疫荧光染色检测脊髓半横断损伤区域自噬蛋白Beclin-1的表达情况。结果与结论:①随着术后时间的延长,生理盐水组、美洲大蠊组大鼠BBB评分逐渐升高;与假手术组比较,生理盐水组、美洲大蠊组术后6 h及1,3,7,14 d的BBB评分均降低(P<0.05);美洲大蠊组术后7,14 d的BBB评分高于生理盐水组(P<0.05);②免疫组化染色显示,假手术组Beclin-1呈弱阳性表达,主要位于胞浆;生理盐水组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;美洲大蠊组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于生理盐水组(P<0.05);③Western Blot检测与免疫荧光染色显示,生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于生理盐水组(P<0.05);④结果表明,美洲大蠊研粉能够改善脊髓半横断损伤大鼠的后肢运动功能,机制可能是美洲大蠊研粉中的多糖类物质增加了自噬蛋白Beclin-1的表达。

三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响

目的:探讨三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响,探究三物白散抗胃癌的作用机制。方法:将28只SPF级雄性大鼠随机分为4组,每组7只,分别予以0.03125、0.0625、0.1250 g/(kg·d)三物白散及相同体积生理盐水灌胃,经腹主动脉采血制备含药血清。体外培养AGS细胞,设置空白对照组(空白组)、三物白散低剂量含药血清组(低剂量组)、三物白散中剂量含药血清组(中剂量组)、三物白散高剂量含药血清组(高剂量组)。采用CCK-8法检测不同浓度(5%、10%、15%、20%)三物白散含药血清对AGS细胞活性的影响;倒置显微镜下观察三物白散含药血清对AGS细胞形态的影响;RT-qPCR法检测Beclin1 mRNA、LC3 mRNA、p62 mRNA表达;Western blotting法检测Beclin1、LC3、p62蛋白表达。结果:与空白组比较,5%、10%、15%、20%三物白散高剂量含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制AGS细胞活性;随着含药血清浓度升高,细胞形态逐渐不规则,细胞数量逐渐减少;中、高剂量组Beclin1 mRNA、LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量均高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01);低剂量组LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01)。高剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均高于空白组,p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01);中剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高于空白组(P<0.05或P<0.01),p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01)。结论:三物白散对胃癌细胞的增殖有抑制作用,上调Beclin1、LC3表达、下调p62的表达、诱导胃癌细胞自噬可能是其抗胃癌作用机制之一。

怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠LC3及Beclin-1表达的影响

目的:探讨怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏LC3及Beclin-1表达的影响。方法:将64只雄性SD大鼠随机分为假手术组(16只)、UUO模型组(16只)、UUO模型+怡肾丸组(16只)、UUO模型+依那普利组(16只)。手术组大鼠游离并结扎左侧输尿管制备肾纤维化模型,假手术组只游离不结扎左侧输尿管。各给药组于造模当日开始给予相应药物,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃3周。于术后第3、7、21天分批处死各组大鼠,取血清及左肾标本,检测血清肌酐、尿素氮,HE染色、Masson染色观察其病理形态学改变,免疫组织化学法及qRT-PCR法分别检测肾组织LC3及Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素水平均升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组肾功能上升速度缓慢(P<0.05);假手术组大鼠肾脏未见明显病理改变。模型组大鼠肾小球硬化,肾小管高度扩张萎缩,小管基底膜变薄,间质区细胞大量增生及纤维化,并随梗阻时间延长而加重,治疗组病理损伤明显减轻,胶原纤维沉积减少(P<0.05);与假手术组相比,模型组的LC3、Beclin1水平升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组的LC3、Beclin1表达水平显著上升(P<0.05)。结论:UUO大鼠肾损害过程中自噬被激活,而怡肾丸增强了LC3、Beclin-1自噬相关蛋白的表达水平,并减轻肾纤维化以保护肾脏。

骨松益骨方调控Beclin 1/Bcl-2对去卵巢大鼠骨细胞凋亡和自噬的影响

目的探讨骨松益骨方(GSYG)对去卵巢(OVX)大鼠骨质疏松的作用以及对Beclin 1/Bcl-2介导的骨细胞凋亡与自噬的影响。方法将大鼠随机分成假手术组(Sham)、模型组(Model)、GSYG低、中、高剂量组[1.25、2.5、5 g/(kg·d)]。通过ELISA检测大鼠血清中P1NP和β-CTX的水平;Micro-CT测定股骨骨密度以及微结构的变化;HE染色检查骨组织的形态学变化;TUNEL染色观察骨细胞凋亡;免疫组化观察骨组织中LC3的变化;Western blot法检测大鼠胫骨近端Bcl2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP、LC3、Beclin1的表达变化;免疫共沉淀法检测Beclin1和Bcl-2的相互作用。结果与模型组相比,GSYG中、高剂量组的P1NP和β-CTX水平显著降低(P<0.01);GSYG各剂量组骨的微结构明显改善(P<0.01);骨小梁明显增多;骨细胞凋亡明显减少(P<0.01);Bcl-2的表达显著升高(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.05或P<0.01),GSYG高剂量组中的cleaved caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达显著降低(P<0.01),GSYG中、高剂量组的LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值与Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01);免疫组化染色显示,与模型组相比GSYG各剂量组LC3蛋白显著增加(P<0.05或P<0.01);免疫共沉淀的结果提示,模型组Beclin1和Bcl-2相互作用较强,而GSYG高剂量组中两者结合均减少。结论GSYG对OVX大鼠的骨质疏松发展有抑制作用,其机制与其调控Beclin 1/Bcl-2介导的凋亡与自噬有关。

Beclin 1基因突变对成骨细胞自噬-凋亡表达的影响

目的观察Beclin 1野生型、突变型质粒对成骨细胞自噬-凋亡表达的影响。方法采用原代分离培养的大鼠颅骨成骨细胞,构建Beclin 1突变型质粒转染成骨细胞(MUT)和野生型质粒转染成骨细胞(WT),使用自噬激活剂rapamycin(Rapa)、自噬抑制剂Baf-A1(Baf)和Beclin1/Bcl2结合抑制剂mifepristone(Mif)干预细胞,分为NC组、Beclin1 WT组、Beclin1 WT+Baf-A1组、Beclin1 WT+mif组、Beclin1 Mut组、Beclin1 Mut+Rapa组。使用免疫共沉淀检测Beclin1-Bcl2复合物结合水平,通过MDC染色、溶酶体染色、流式检测、线粒体膜电位检测、Hoechest染色、免疫荧光、WB分别检测成骨细胞的自噬和凋亡表达情况。结果免疫共沉淀检测:与NC组相比,MUT组中Beclin1-Bcl2复合物水平显著降低(P<0.05);MDC染色显示:相对于NC组,WT细胞中溶酶体染色明显增加;细胞凋亡方面:与NC组相比,WT组、WT+Mif组细胞凋亡率显著上升,MUT细胞凋亡率低于WT细胞,比较差异具有统计学意义;JC-1检测显示:与NC组相比,WT细胞的线粒体跨膜电位异常改变,而MUT细胞样本的跨膜电位表达活跃。结论①Beclin 1的过表达可以抑制Beclin 1-Bcl2复合物的生成;②Beclin 1是参与自噬的重要基因,适度的Bcilin 1表达有利于维持细胞群的代谢平衡,Beclin 1的过表达对细胞自噬无明显影响;③Beclin 1过表达能抑制成骨细胞凋亡。

EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。

LC-3、Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性

目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、自噬调控因子Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征的相关性。方法 回顾性分析93例NSCLC患者资料,比较癌组织和癌旁组织LC-3、Beclin-1和P62表达情况;比较LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者临床病理特征差异。结果 癌组织LC-3、Beclin-1阳性率低于癌旁组织,P62表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者肺癌病理类型、TNM分期以及分化程度差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LC-3、Beclin-1和P62表达情况与NSCLC患者病理类型、TNM分期以及分化程度有密切联系。LC-3、Beclin-1表达降低及P62表达升高与肺癌的发生发展相关,可作为NSCLC患者早期评估的辅助指标。

金欣康颗粒提高线粒体自噬蛋白LC3/Beclin1表达改善心力衰竭大鼠心肌纤维化的研究

目的探讨金欣康颗粒(丹参、桂枝、黄芪、人参、毛冬青等7味药组成)对心力衰竭(简称心衰)大鼠线粒体自噬蛋白LC3/Beclin1表达的影响,阐述金欣康颗粒改善心梗后心衰心肌纤维化的机制。方法复制心梗后心衰大鼠模型。将造模成功的心衰大鼠随机分为4组:模型组,金欣康颗粒低剂量组、高剂量组和培哚普利组,另设假手术组,每组10只。给药12周,以HE染色、天狼猩红染色评估心肌组织的病理变化,心脏彩超对心脏结构和心功能进行评估,透射电镜观察自噬小体,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原(CollagenⅠ和CollagenⅢ)蛋白的表达,Western Blot法检测自噬蛋白LC3、Beclin1的表达。结果成功复制心梗后心衰大鼠模型,模型组大鼠梗死区周边区域有大量红色的胶原沉积,心肌纤维排列紊乱,部分纤维断裂;线粒体明显肿胀,出现峭断裂,能观察到较多的自噬小体。金欣康颗粒组和培哚普利组心肌纤维排列较模型组整齐,纤维化程度较轻,自噬小体更加明显。与假手术组比较,模型组的射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS)显著降低(P<0.01),左室舒张末期内径(LVEDd)及收缩末期内径(LVEDs)增大(P<0.01),α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平升高(P<0.05),线粒体自噬蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达升高(P<0.05);与模型组比较,金欣康颗粒组和培哚普利组LVEF和LVFS明显提高(P<0.01),心功能得到改善;α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表达降低(P<0.05),Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达升高(P<0.05)。结论金欣康颗粒可减轻心梗后心衰大鼠的心肌纤维化程度,其机制可能与增强线粒体自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin1的表达有关。

miR-30b靶向Beclin1参与慢性肾脏病血管钙化

目的 探究miR-30b在慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化(VC)中的作用及miR-30b与自噬基因Beclin1的靶向关系。方法 将SD雄性大鼠随机分成对照组、模型组(CKD)、miR-30b组(CKD+miR-30b模拟物)和miR-30b阴性对照(NC)组(CKD+miR-30b NC)。使用全自动生化分析仪检测血清中血尿素氮(BUN)、血钙(Ca)、血磷(P)、血肌酐(Scr)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织和肾主动脉组织的病理学变化;茜素红染色观察主动脉钙化结节情况;使用试剂盒检测血管壁钙含量及碱性磷酸酶(ALP)水平;反转录荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测主动脉miR-30b水平;Western印迹检测主动脉中Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白相对表达水平;透射电镜观察血管平滑肌细胞(VSMC)中自噬小体的变化;双荧光素酶测定miR-30b与Beclin1的靶向关系。结果 与对照组相比,模型组肾小球萎缩,间质增宽,肾小管扩张严重,炎性细胞浸润严重,血清中BUN、Ca、P、Scr水平、主动脉钙含量及ALP水平显著升高(P<0.05),自噬小体数量、miR-30b相对表达水平及Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组和miR-30b NC组相比,miR-30b组肾组织损伤明显减轻,血清中BUN、Ca、P、Scr水平、主动脉钙含量及ALP水平显著降低(P<0.05),细胞的自噬小体数量及Beclin1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论 miR-30b可通过靶向Beclin1对CKD大鼠的血管钙化起到保护作用。

膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达及与患者肿瘤特征、预后的相关性分析

目的观察膀胱癌组织中自噬基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达状况,并分析两者与预后的相关性。方法选取2020年1月—2021年8月新疆医科大学附属肿瘤医院病理资料完整的110例膀胱癌患者。观察患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达状况,记录病理参数,并对患者进行为期1年的随访。统计预后情况,观察不同病理参数及预后的膀胱癌患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,并分析两者与患者预后的相关性。结果膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白高表达率较癌旁组织低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达率较癌旁组织高(P<0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者Beclin1蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者Beclin1蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高组织学分级、T_(2)~T_(4)分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白高表达率低于低组织学分级、T_(a)~T_(1)分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经Phi系数相关性分析,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白与预后不良均呈负相关(Phi=-0.277和-0.222,均P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:Beclin1高表达[O^R=3.892(95%CI:1.504,10.072)]、LC3Ⅱ蛋白中低表达[O^R=3.358(95%CI:1.165,9.677)]是预后不良的危险因素(P<0.05)。结论膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ表达与预后密切相关,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达是预后不良的危险因素。

口腔癌患者中SOX9、Beclin1的表达与预后转归的关系

目的探讨口腔癌患者中性别决定基因盒9(sex-determining region Y box 9,SOX9)、自噬基因(Beclin1)的表达与预后转归的关系.方法选取2017年5月至2018年5月河北省保定市第一中心医院口腔科收治的38例口腔癌患者,取其口腔癌组织标本38份和癌旁组织标本30份,检测患者口腔癌组织中SOX9、Beclin1的表达情况.分析SOX9、Beclin1阳性表达与临床病理因素的关系,采用COX分析影响口腔癌预后转归的危险因素,分析SOX9、Beclin1与预后转归的关系.结果口腔癌组织中SOX9和Beclin1阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05),SOX9、Beclin1阳性表达与年龄、性别无关(P>0.05),与肿瘤分期、分化程度和淋巴转移相关(P<0.05).对口腔癌预后影响因素采取Cox逐步回归分析,结果显示肿瘤分期、淋巴转移、SOX9、Beclin1是影响口腔癌患者预后转归的独立危险因素(P<0.05).SOX9阳性及阴性表达患者无进展生存期分别为10~18月[平均(12.5±2.4)月]、14~23月[平均(17.5±3.1)月];Beclin1阳性及阴性表达患者无进展生存期分别为11~18月[平均(13.7±2.4)月]、13~22月[平均(15.7±3.1)月].SOX9、Beclin1阳性表达患者无进展生存期显著低于阴性表达患者(χ^(2)=7.969、3.315,P<0.05).结论口腔癌患者中SOX9、Beclin1呈阳性表达,其表达与预后转归密切相关,口腔癌患者SOX9、Beclin1表达越高预后转归越差.

自噬核心蛋白Beclin 1在动物生殖生理中的作用研究进展

自噬是一种进化上高度保守的自我消化过程,是维持细胞内稳态所必需的。Beclin 1(Becn1)是酵母自噬相关基因6(ATG6)的同源物,Beclin 1蛋白在自噬中起核心作用,与多种因子相互作用,介导自噬蛋白定位于自噬前体结构而推进自噬进程。Beclin 1的功能障碍会导致动物生育力下降等多种疾病,且Beclin 1与生殖系统肿瘤发生也存在多种联系。本文综述了Beclin 1在动物生殖生理以及生殖系统恶性疾病中的研究进展,讨论了Beclin 1对于维持生殖系统健康的重要性,为提高动物繁殖力及治疗人类繁殖障碍提供参考。

PTEN和Beclin-1在儿童非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨PTEN、Beclin-1在儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)组织中的表达特点及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测儿童NHL及淋巴结反应性增生(reactive hyperplasia, RH)组织中PTEN蛋白、Beclin-1蛋白的表达,应用χ^(2)检验比较此两种蛋白在NHL及RH组织中的阳性表达率,进一步分析此两种蛋白与患儿临床病理因素(性别、年龄、T/B分型、St.Jude分期、LDH水平、有无B症状、Ki-67及IPI危险度分层)的关系及两者的相关性。结果:儿童NHL组织中PTEN蛋白阳性率为47.2%,低于RH组织(80.8%)(χ^(2)=7.161,P<0.05)。PTEN蛋白的表达与NHL患儿IPI危险度分层及LDH水平相关。儿童NHL组织中Beclin-1蛋白阳性率为50.0%,低于RH组织(84.6%)(χ^(2)=7.902,P<0.05)。Beclin-1的表达与NHL患儿的临床病理特征无明显相关性。Spearman等级相关分析显示PTEN蛋白和Beclin-1蛋白在儿童NHL组织中的表达呈正相关(r=0.501,P<0.05)。结论:PTEN基因和Beclin-1基因在儿童NHL中缺失或失表达,可能促进疾病发生发展。此两种抑癌基因在NHL的发生中可能起协同作用,联合检测可能有助于诊断及预后判断。

猪瘟病毒非结构蛋白NS5A与Beclin1相互作用并促进病毒增殖

为探究宿主蛋白Beclin1在猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)非结构蛋白NS5A激活细胞自噬反应过程中的作用及具体分子机制,本研究在感染CSFV及表达NS5A蛋白的ST细胞中,利用qRT-PCR方法检测Beclin1、PI3K/Akt通路相关因子表达变化情况;利用激光共聚焦、Co-IP及GST-pulldown等方法研究Beclin1与NS5A相互作用关系;通过在ST细胞中过表达或敲低Beclin1,研究其对CSFV复制的影响。结果表明,ST细胞感染猪瘟病毒或外源表达NS5A蛋白,Beclin1转录和蛋白表达水平均显著升高,且PI3K/Akt通路相关因子表达水平与之呈正相关。此外,CSFV NS5A蛋白与Beclin1蛋白在细胞中存在共定位且具有相互作用。最后,作者发现在细胞中过表达Beclin1,对CSFV复制起到明显促进作用;反之,利用siRNA敲低Beclin1后,抑制PI3K/Akt通路活化,CSFV增殖表现出明显抑制效应。以上结果表明,Beclin1蛋白对CSFV复制具有促进作用,其机制是通过与NS5A的相互作用调控PI3K/Akt通路来实现。