Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断价值及与甲状腺细针穿刺诊断准确率对比

目的 探讨自噬相关基因Beclin-1联合细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)对甲状腺癌的诊断价值,并分析两者联合与甲状腺细针穿刺诊断对甲状腺癌准确率差异。方法 选取医院2020年10月至2023年10月收治的80例甲状腺癌患者作为观察组,另取同期收治的80例甲状腺结节患者作为对照组,取所有患者术后病理组织进行免疫组化染色,qRT-PCR仪进行检测与扩增,采用2-△△α法计算Beclin-1、Cx43的相对表达量,并将两组患者Beclin-1、Cx43水平进行对比。采用Spearman相关分析法分析Beclin-1、Cx43和甲状腺癌的相关性,并使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Beclin-1联合Cx43诊断甲状腺癌的效果,并对比两者联合与甲状腺细针穿刺对甲状腺癌的诊断价值。结果 经免疫组化结果显示,两组细胞质内均检测到Beclin-1、Cx43,且观察组的Beclin-1、Cx43相对表达量比对照组更少(P<0.05),而Beclin-1、Cx43阳性率也同样小于对照组(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,Beclin-1、Cx43和甲状腺癌呈现负相关(P<0.05);Beclin-1对甲状腺癌的诊断曲线下面积为0.822,最佳阈值为13.52;Cx43诊断甲状腺癌的曲线下面积为0.875,最佳阈值为18.67,两者联合的曲线下面积为0.932;Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断灵敏度与特异度明显高于单一指标(P<0.05);Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断准确率为93.75%,甲状腺细针穿刺对甲状腺癌的诊断准确率为98.75%,两者对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断灵敏度与特异度较高,且两者联合与甲状腺细针穿刺诊断甲状腺癌准确率对比并无显著差异,可考虑将Beclin-1、Cx43两者作为甲状腺癌诊断及预后判断的重要标志物。

中药调控Beclin-1基因干预自噬治疗类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎是一种难以治愈的自身免疫性疾病,其病因复杂,基本的病理表现为软骨的破坏、血管翳的生成等。有效治疗和预防类风湿性关节炎的发生及提高患者的生活质量是亟待解决的问题。现阶段临床治疗方法存在着用药量大,毒副作用强等弊端,近年来,以精准调控为优势并基于Beclin-1为代表的基因调节自噬和线粒体从而治疗类风湿性关节炎的研究不断发展,目前受到国内外专家学者的关注,具有广阔的发展前景。本文系统阐述在治疗类风湿性关节炎中Beclin-1、自噬和线粒体的相关联性,并发现中药在调节Beclin-1、自噬和线粒体治疗类风湿性关节炎的巨大潜力,因此对中药调控Beclin-1干预自噬治疗类风湿性关节炎进行系统性综述,并为该领域提供一定的科学参考。

自噬蛋白Beclin-1与N-myc下游调控基因2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的探索自噬蛋白Beclin-1和N-myc下游调控基因2(NDRG2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,并探讨两种蛋白作为ESCC预后分子标志物的临床价值。方法采用免疫组织化学染色检测Beclin-1与NDRG2在121例ESCC组织中的表达,通过Pearson相关分析两者表达与临床病理参数的关系。根据Beclin-1与NDRG2的表达情况将所有患者分为2组,高、低表达组的生存概率通过Kaplan-Meier曲线计算,Log-rank检验用于生存分析的比较。采用Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析,确定ESCC患者的独立预后因子。结果免疫组织化学染色分析显示Beclin-1蛋白在121例ESCC及癌旁组织中的阳性表达率分别为40.5%(49/121)和59.5%(68/121),差异有统计学意义(χ^(2)=5.973,P=0.015)。NDRG2蛋白在ESCC组织中的阳性表达率亦明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(46.3%vs.61.2%;χ^(2)=5.385,P=0.020)。Beclin-1低表达者有更为频繁的淋巴结转移(χ^(2)=6.158,P=0.013)和更晚的TNM分期(χ^(2)=4.538,P=0.033),而NDRG2低表达与更晚的T分期(χ^(2)=6.607,P=0.010)和TNM分期(χ^(2)=5.744,P=0.017)相关。Kaplan-Meier曲线显示,Beclin-1低表达与高表达患者的3年总体生存(OS)率分别为44.3%和60.9%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.696,P=0.017)。NDRG2低表达者的预后亦明显低于NDRG2高表达者,3年OS率分别为43.9%和59.2%(χ^(2)=9.004,P=0.003)。单、多因素Cox比例风险模型分析表明,Beclin-1低表达(HR=1.727,95%CI:1.017~2.934,P=0.043)、NDRG2低表达(HR=1.671,95%CI:1.023~2.730,P=0.040)与TNMⅡ~Ⅲ期(HR=3.823,95%CI:2.133~6.852,P<0.001)是ESCC患者预后不良的独立预测因素。结论Beclin-1和NDRG2表达在ESCC中明显下调,且与患者不良预后相关,其可能是预测ESCC患者生存的预后标志物。

Beclin-1基因沉默对蛇六谷提取物损伤胃癌SGC-7901细胞的影响

目的:探讨beclin-1基因沉默对蛇六谷提取物损伤人胃癌SGC-7901细胞的影响。方法:采用携带beclin-1-shRNA的慢病毒载体感染胃癌SGC-7901细胞,敲减beclin-1基因表达;蛇六谷提取物处理beclin-1基因敲减和未敲减的SGC-7901细胞,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞凋亡率,Western blot检测beclin-1和LC3的蛋白表达水平。结果:Beclin-1-shRNA转染SGC-7901细胞抑制beclin-1的mRNA和蛋白表达,促进LC3蛋白表达,降低细胞活力,增加细胞凋亡率(P<0.05);蛇六谷提取物上调SGC-7901细胞的beclin-1和LC3蛋白表达,但下调beclin-1基因敲减的SGC-7901细胞的LC3蛋白表达,并显著降低细胞活力和增加细胞凋亡率(P<0.05)。结论:Beclin-1基因沉默阻断蛇六谷提取物对beclin-1相关信号通路的激活,增强蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞活力的损伤作用。

搜风祛痰中药复方对AopE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响。方法:建立ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并设立空白组、模型组、西药组、稳斑汤低、中、高剂量组。13周后将小鼠麻醉处死,取经HE染色的主动脉组织在光学显微镜下进行病理学观察,并采用半定量RT-PCR技术检测Beclin-1和Bcl-2基因表达的变化。结果:与空白组相比,模型组Beclin-1mRNA表达水平明显下降(P<0.01);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Beclin-1mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,中药高剂量组Beclin1mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与空白组对比,模型组Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Bcl-2mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,稳斑汤高剂量组Bcl-2mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。光镜下观察西药组和稳斑汤各剂量组炎症反应均明显弱于模型组。结论:搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过上调ApoE基因敲除小鼠AS易损斑块中Beclin-1和Bcl-2的基因表达而干预AS不稳定斑块的形成及破裂,具有良好的心血管保护作用。

自噬相关基因Beclin-1在间歇期痛风性关节炎患者外周血单个核细胞中的表达变化及意义

目的探讨自噬相关基因Beclin-1在间歇期痛风性关节炎(IGA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达变化及意义。方法采集40例间歇期IGA男性患者(IGA组)、80例体检健康男性(正常对照组)外周静脉血,分离PBMC并进行培养。用实时荧光定量PCR、Western blotting技术分别检测PBMC中Beclin-1 mRNA、蛋白表达。随机抽取5例IGA患者外周静脉血20 m L,分为未刺激组及尿酸盐晶体(MSU)刺激1、3、6 h组并提取其PBMC,用Western blotting技术检测PBMC中Beclin-1蛋白表达。随机抽取5例IGA患者、5例体检健康者外周静脉血20 m L,将血液标本均随机分为空白对照组、雷帕霉素组、自噬抑制剂组。空白对照组不做干预,其他各组均加入相应试剂进行干预并提取PBMC,用Western blotting技术检测PBMC中Beclin-1蛋白表达;用酶联免疫吸附试验测定干预后IGA患者血浆IL-1β水平。结果与正常对照组比较,IGA组PBMC中Beclin-1 mRNA、蛋白相对表达量低(P均<0. 05)。MSU刺激1、3 h组PBMC中Beclin-1蛋白相对表达量较未刺激组高(P均<0. 05),而MSU刺激6 h组Beclin-1蛋白相对表达量较未刺激组低(P <0. 05)。IGA患者PBMC中Beclin-1蛋白相对表达量比较:雷帕霉素组较空白对照组低(P <0. 01),且自噬抑制剂组最高(P均<0. 05),恢复至空白对照组水平;体检健康者PBMC中Beclin-1蛋白相对表达量比较:空白对照组、MSU组、雷帕霉素组比较差异无统计学意义(P均> 0. 05),而自噬抑制剂组较其他组低(P均<0. 05)。IGA患者血浆IL-1β水平比较,MSU、雷帕霉素组较空白对照组高(P均<0. 05),雷帕霉素组较MSU组低(P <0. 05),自噬抑制剂组较空白对照组、MSU组高(P均<0. 05),自噬抑制剂组之间比较差异无统计学意义(P均> 0. 05)。结论自噬相关基因Beclin-1在间歇期IGA患者外周血PBMC中呈低表达,其可能在IGA发展过程中参与自噬途径并最终被自噬溶酶体降解。

Beclin-1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对B16F10细胞自噬及活力的影响

利用RNA干扰技术构建稳定沉默Beclin-l基因的B16F10小鼠黑色素瘤细胞系,分析稳转细胞系的自噬水平和活力,为探讨Beclin-1基因、自噬与肿瘤三者关系奠定基础。构建小鼠Beclin-l基因干扰载体,转染至293T细胞,获得慢病毒颗粒,将病毒颗粒感染B16F10细胞,通过加压筛选、有限稀释、细胞驯化得到稳定转染m-Beclin-1-shRNA1的B16F10细胞系。采用RT-PCR和免疫荧光技术检测对Beclin-l的干扰效果,Western blot和透射电镜分析稳转细胞系中自噬标志物LC3蛋白表达及自噬小体形成情况,CCK-8法检测稳转细胞系的活力。结果表明,成功构建了靶向抑制Beclin-l基因表达的shRNA,纯化的慢病毒滴度为1×10^(8) TU·mL^(-1),建立的细胞系中Beclin-1 mRNA和蛋白表达都受到不同程度的抑制,mRNA的沉默效率约为75%(P<0.01),发现干预Beclin-1表达能够抑制LC3-Ⅱ蛋白的表达及自噬小体的形成数量,降低B16F10细胞活力。以上结果表明,干扰Beclin-1表达能够有效降低B16F10细胞自噬活性,促进B16F10细胞死亡,这为探讨Beclin-1基因功能及自噬在抗肿瘤中的作用奠定重要基础。

beclin-1基因在乳腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

目的探讨beclin-1基因在乳腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用实时定量PCR和免疫组化方法检测56例乳腺癌中beclin-1基因及蛋白的表达并分析其与临床病理因素的关系。结果beclin-1mRNA及蛋白在乳腺癌中的表达显著下调,但与临床病理因素无显著相关性。结论beclin-1可能在乳腺癌中负调控而引起肿瘤的发生。

自噬基因Beclin-1在急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义

目的观察自噬基因Beclin-1在急性淋巴细胞白血病中的表达及其意义。方法选取2008年3月—2011年3月我院收治的急性淋巴细胞白血病76例作为试验组,同时选取健康人76例作为对照组,采用免疫组化技术检测两组外周血中有核细胞中Beclin-1的阳性表达率,并比较试验组中男性与女性及急性淋巴细胞白血病L1型与L2型Beclin-1阳性表达率的差异。结果试验组Beclin-1阳性表达率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组中男性与女性及急性淋巴细胞白血病L1型与L2型Beclin-1阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在急性淋巴细胞白血病患者外周血的有核细胞中自噬基因Beclin-1的阳性表达率要低于正常健康人群。

荧光报告系统验证miR-142-5p的靶基因Becn1

目的验证miR-142-5p的靶基因——自噬相关基因Becn1。方法生物信息学预测miR-142-5p与Becn1的结合位点,构建含有结合位点的Becn1基因3＇UTR野生型和突变型质粒,将重组质粒与miR-142-5p-mimics或miR-NC共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。结果 miR-142-5p与Becn1的3＇UTR存在一个结合位点（123~129）;成功构建野生型重组质粒p GL3-Becn1-3＇UTR和靶位点含3个碱基突变的重组质粒Mut-3＇UTR;与共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组荧光素酶活性显著下降,约为41.2%（P〈0.01）;而与对照组相比,共转染Mut-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组的荧光素酶活性下降不明显（P〉0.05）。结论初步验证自噬相关基因Becn1是miR-142-5p的靶基因。

自噬相关基因Beclin-1的克隆及原核表达载体的构建

目的克隆并构建自噬相关基因Beclin-1原核表达载体。方法根据Beclin-1鳊码区DNA序列设计引物，用前列腺癌细胞LNCaP作为模板进行RT—PCR，扩增Beclin-1编码区全基因片段，与pQE-80质粒连接后进行潮序鉴定。结果RT—PCR扩增出Beclin-1目的基因，限制性内切酶证实其已插入表达质粒中，DNA测序证实Beclin-1鳊码区全基因片段与GenBank公布的相应基因核苷酸序列的同源性为完全一致。结论成功克隆并构建了自噬相关基因Beclin-1原核表达载体，为研究Beclin-1蛋白的细胞自噬作用奠定了基础。

BECN1基因在绵羊皮肤毛囊上表达的研究

BECN1基因是细胞自噬的启动基因之一。检测该基因在细毛羊不同发育时期皮肤毛囊上的表达规律,可为细毛羊皮肤毛囊发育是否存在细胞自噬提供参考。利用实时荧光定量、免疫组化及免疫印迹法对BECN1基因分别在细毛羊休止期、生长期、退行期皮肤毛囊上的定位和表达进行了研究。结果表明,BECN1基因在细毛羊各个时期皮肤毛囊的内根鞘、外根鞘以及毛母质中均有阳性表达,但以退行期最为显著;在细毛羊各个时期的毛囊中均检测到BECN1基因的转录与蛋白表达,均以退行期表达量最高,且显著高于休止期和生长期(P<0.05),而生长期与休止期间的表达量无明显差异(P>0.05)。上述结果间接表明,细毛羊的毛囊周期中均存在细胞自噬现象,并以退行期最为明显。

甲状腺癌组织自噬相关基因Beclin-1和LC3的蛋白表达及其临床病理学意义

目的探讨甲状腺癌中自噬相关基因Beclin-1和LC3的表达及意义。方法收集2013-2016年威海市市立医院甲状腺外科手术切除的甲状腺癌63例标本,以距肿瘤边缘5cm以上的组织定义为配对癌旁组织,并收集同期住院的甲状腺腺瘤(42例)和结节性甲状腺肿组织标本(31例)。采用免疫组织化学SP法检测上述标本中Beclin-1和LC3的表达情况及两者之间的相关性。结果各组织Beclin-1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。甲状腺癌中Beclin-1的阳性表达率(39.68%,25/63)明显低于甲状腺腺瘤(69.05%,29/42)、结节性甲状腺肿(83.87%,26/31)和癌旁正常组织中(85.71%,54/63)的阳性表达率(P<0.05)。LC3蛋白在甲状腺癌的阳性表达率为25.40%(16/63),在甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、癌旁正常组织中的阳性表达率分别为40.48%(17/42)、38.72%(12/31)、42.86%(27/63)。在甲状腺癌中LC3表达低于以上正常的3种组织。4者比较LC3的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin-1蛋白的表达与颈部淋巴结转移有关(χ~2=8.433,P=0.000)。经Spearman相关性检验分析,在甲状腺癌中LC3与Beclin-1蛋白成正相关(r=0.272,P=0.031)。结论 Beclin-1、LC3在甲状腺癌中低表达,在甲状腺癌中Beclin-1与LC3的表达量呈正相关。

细胞缝隙连接蛋白43、自噬相关基因Beclin-1表达水平与甲状腺癌患者TNM分期的相关性研究

目的探究细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)、自噬相关基因Beclin-1表达水平与甲状腺癌患者TNM分期的相关性。方法选取2011年5月至2017年4月许昌市人民医院术后确诊的125例甲状腺癌患者,68例甲状腺良性疾病患者,因其他原因进行手术或甲状腺活检的42例甲状腺组织正常者,均行Cx43、Beclin-1免疫组化染色检测。比较不同甲状腺组织中Cx43、Beclin-1表达水平,并分析Cx43、Beclin-1表达水平与甲状腺癌患者TNM分期的相关性。结果甲状腺癌组织中Cx43、Beclin-1阳性表达率低于甲状腺良性病变组织、正常甲状腺组织,差异有统计学意义(P <0. 05)。甲状腺癌患者TNMⅠ+Ⅱ期Cx43阳性表达率高于Ⅲ+Ⅳ期,差异有统计学意义(P <0. 05)。Cx43与甲状腺癌患者TNM分期呈负相关(P <0. 05);自噬相关基因Beclin-1与甲状腺癌患者TNM分期无关(P> 0. 05)。结论 Cx43表达与甲状腺癌患者TNM分期呈负相关,自噬相关基因Beclin-1与甲状腺癌患者TNM分期无关。

口腔癌患者中SOX9、Beclin1的表达与预后转归的关系

目的探讨口腔癌患者中性别决定基因盒9(sex-determining region Y box 9,SOX9)、自噬基因(Beclin1)的表达与预后转归的关系.方法选取2017年5月至2018年5月河北省保定市第一中心医院口腔科收治的38例口腔癌患者,取其口腔癌组织标本38份和癌旁组织标本30份,检测患者口腔癌组织中SOX9、Beclin1的表达情况.分析SOX9、Beclin1阳性表达与临床病理因素的关系,采用COX分析影响口腔癌预后转归的危险因素,分析SOX9、Beclin1与预后转归的关系.结果口腔癌组织中SOX9和Beclin1阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05),SOX9、Beclin1阳性表达与年龄、性别无关(P>0.05),与肿瘤分期、分化程度和淋巴转移相关(P<0.05).对口腔癌预后影响因素采取Cox逐步回归分析,结果显示肿瘤分期、淋巴转移、SOX9、Beclin1是影响口腔癌患者预后转归的独立危险因素(P<0.05).SOX9阳性及阴性表达患者无进展生存期分别为10~18月[平均(12.5±2.4)月]、14~23月[平均(17.5±3.1)月];Beclin1阳性及阴性表达患者无进展生存期分别为11~18月[平均(13.7±2.4)月]、13~22月[平均(15.7±3.1)月].SOX9、Beclin1阳性表达患者无进展生存期显著低于阴性表达患者(χ^(2)=7.969、3.315,P<0.05).结论口腔癌患者中SOX9、Beclin1呈阳性表达,其表达与预后转归密切相关,口腔癌患者SOX9、Beclin1表达越高预后转归越差.

Beclin-1与Bcl-2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及意义

目的观察自噬相关蛋白Beclin-1与凋亡相关蛋白Bcl-2在血管性痴呆大鼠海马CA1区的表达及变化情况。方法60只实验大鼠随机分为假手术组和血管性痴呆模型组(模型组),每组又随机分为模型制备成功后1、2、4、8和12周5个亚组(各6只)。采用四血管阻断法制备血管性痴呆模型,Morris水迷宫法测试学习记忆能力,免疫组化法检测自噬相关蛋白Beclin-1及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果模型组大鼠的海马CA1区1周时可见Beclin-1、Bcl-2蛋白阳性表达,4周达到高峰,8周开始下降,至12周仍较高。与假手术组比较,模型组各时间点的Beclin-1、Bcl-2蛋白表达均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。模型组大鼠海马CA1区的Beclin-1阳性表达数与Bcl-2阳性表达数呈正相关(r=0.809,P<0.05)。结论血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬和凋亡同时发生,且表达趋势一致。

Beclin-1表达对舌癌细胞Tca8113顺铂敏感性的影响

目的观察自噬基因Beclin-1表达对舌癌细胞Tca8113顺铂敏感性的影响。方法分别构建过表达和干扰Beclin-1的真核表达载体,并建立稳定表达和稳定干扰Beclin-1的Tca8113细胞模型,RT-PCR和Western blotting法检测Beclin-1表达,MTT法检测上述细胞模型对顺铂的敏感性。结果成功建立稳定表达Beclin-1的细胞模型Tca8113/pLEX-Beclin-1,其与对照细胞系对顺铂的半数抑制浓度(IC50)分别为(11.99±0.34)、(5.03±0.16)mg/L,P<0.01;成功建立干扰Beclin-1表达的细胞模型Tca8113/pRNAT-Beclin-1-sh1,其与对照细胞系对顺铂的IC50分别为(2.76±0.09)、(5.01±0.18)mg/L,P<0.01。结论下调Beclin-1表达可增加舌癌细胞Tca8113对顺铂的敏感性。

自噬相关基因Beclin 1和微管相关蛋白轻链3在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探究Beclin-1及LC3蛋白在胃癌组织中的表达水平,并分析其临床病理意义。方法选取2015年3月—2016年3月我院收治的患者146例,收集其胃癌组织标本及癌旁组织标本,并采集146例健康黏膜组织作为对照组,利用SP方法检测Beclin-1和LC3的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。结果 Beclin-1及LC3在健康黏膜组织的表达最高,在胃癌组织中的表达最低,此外,上述两组蛋白在不同的性别、年龄及发病部位无明显差异,但在T3~T4分期、高、中分化程度及有淋巴结转移的胃癌组织中表达率显著降低。结论胃癌组织中的Beclin-1及LC3蛋白的表达量显著低于正常组织及癌旁组织,提示与胃癌的发生及发展密切相关,本研究为胃癌的诊断、预防及治疗提供了新的思路。

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。

沉默BECN1对人三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231中beclin 1(BECN1)基因后其生物学特性的变化。方法:设计3组沉默BECN1基因的慢病毒(干扰组1、干扰组2和干扰组3)以及阴性对照慢病毒(NC组)分别转染MDA-MB-231细胞,空白组不做处理。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BECN1 mRNA表达,蛋白免疫印迹(WB)实验检测各组细胞BECN1蛋白与自噬标志蛋白LC3B的表达,筛选出抑制率最高的一组用于后续实验。细胞计数试剂8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况、Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力、流式细胞术检测各组细胞凋亡率与周期分布情况。结果:慢病毒感染细胞后,干扰组2中BECN1的信使核糖核酸(mRNA)与蛋白的表达量最低(P<0.05),WB结果显示干扰组2的LC3B蛋白中LC3-Ⅱ/LC31-Ⅰ的比值明显低于空白组和NC组(均P<0.05),选取干扰组2用于后续实验。沉默BECN1基因后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P<0.05);流式细胞术结果显示干扰组2、NC组与空白组的凋亡率没有明显差异;相比于空白组与NC组,干扰组2处于G0/G1期的比例升高(P<0.05)。结论:BECN1基因沉默可以降低细胞的自噬水平,抑制TNBC MDA-MB-231细胞增殖、迁移与侵袭能力。