子宫内膜癌病灶超声造影参数与Beclin1、Bax及CDK4表达水平的相关性分析

目的分析子宫内膜癌病灶超声造影参数与Beclin1、Beclin1关联X蛋白(Bax)及周期素依赖性激酶4(CDK4)表达水平的相关性。方法选取2022年1月至2023年1月在联勤保障部队第九〇〇医院就诊的42例子宫内膜癌患者作为恶性组,58例癌前病变患者作为良性组。两组患者均给予超声造影成像检查并测定造影剂平均渡越时间(MMT)、达峰时间(TTP)及峰值强度(Peak),均进行子宫切除术并采集病灶组织,检测Beclin1、Bax、CDK4及周期素依赖性激酶6(CDK6)表达水平。采用Pearson相关分析子宫内膜癌病灶超声造影参数与Beclin1、Bax及CDK4表达水平的相关性。结果恶性组病灶Peak高于良性组,MMT长于良性组,TTP短于良性组,Beclin1、Bax表达水平低于良性组,CDK4、CDK6表达水平高于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。恶性组中TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者病灶Peak高于Ⅰ~Ⅱ期患者,MMT长于Ⅰ~Ⅱ期患者,TTP短于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。恶性组中TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者病灶组织Beclin1、Bax表达水平低于Ⅰ~Ⅱ期患者,CDK4、CDK6表达水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,子宫内膜癌病灶Peak、MTT与CDK4及CDK6表达水平呈正相关(P<0.05),与Beclin1、Bax表达水平呈负相关(P<0.05),TTP与病灶组织CDK4及CDK6表达水平呈负相关(P<0.05),与Beclin1、Bax表达水平呈正相关(P<0.05)。结论子宫内膜癌患者MTT长于癌前病变患者,以及Peak、CDK4、CDK6表达水平均高于癌前病变患者,子宫内膜癌患者病灶超声造影参数MTT、TTP及Peak与Beclin1、Bax及CDK4表达水平相关,超声造影检查有助于辅助临床判断子宫内膜癌患者细胞凋亡相关蛋白表达情况。

细胞分化周期蛋白27基因沉默抑制GH3细胞迁移及其分泌功能

目的进行3种全基因组外显子测序所得基因体外的功能验证,为垂体柄中断综合征病因研究的体内实验提供理论依据。方法将细胞分化周期蛋白27(cell division cycle protein 27,CDC27)、神经纤维瘤病1型(neurofibromatosis type1,NF1)、X染色体关联的泛素特异性蛋白酶9(ubiquitin specific peptidase 9,X-Linked,USP9X)三种基因经由小干扰RNA(si RNA)分别转染至细胞内,每种基因均设置实验组、阴性对照(negative control,NC)组、空白细胞组。通过RTPCR筛选出各基因最佳的si RNA敲低序列以用于复筛,Western bolt复筛各基因最佳敲低序列在蛋白水平的表达,以确定目标基因进行下一步研究。依次运用CCK-8检测细胞增殖能力及形态,细胞划痕实验检测细胞迁移,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞分泌功能,Western bolt检测垂体特异性转录因子-1(pit-oct-unc class 1homeobox 1,POU1F1)和垂体特异性转录因子祖先蛋白(homeobox protein prophet of pit-1,PROP1)表达水平。结果 1)CDC27在si RNA 117和1968序列时能够达到稳定的沉默效率,并且在mRNA及蛋白两个水平上均能够被敲低,NF1和UPS9X仅能在mRNA水平上实现敲低而未实现蛋白水平的敲低,无法进行后续实验;2)CDC27沉默对于细胞的增殖及形态无明显影响(P>0.05);3)CDC27沉默能够明显抑制细胞的迁移能力(P<0.05);4)CDC27沉默能够明显抑制细胞分泌生长激素(growth hormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)分泌(P均<0.05),对促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)的分泌无明显影响(P>0.05);5)CDC27沉默能够明显下调POU1F1与PROP1的表达水平(P<0.05)。结论 CDC27沉默可以抑制GH3细胞的迁移及其生长激素、泌乳素的分泌。

缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞凋亡的影响及相关机制

目的 :观察缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞(cartilage endplate-derived stem cells,CESCs)凋亡的影响,探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19-k Da结合蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-k Da-interacting protein 3,BNIP3)信号通路在其中的作用。方法 :从临床获取退变椎间盘软骨终板标本,分离培养软骨终板细胞,使用琼脂糖筛选获得CESCs并进行干细胞标志物鉴定,将第三代细胞分别在常氧/完全培养基(对照组)与缺氧和营养缺乏(实验组)条件下培养48h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,CCK-8法检测细胞活性,Western Blot检测BNIP3、Bcl-2关联x蛋白(Bax)、Bcl-2关联k蛋白(Bak)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达水平。使用BNIP3小干扰RNA(siRNA)干扰CESCs中BNIP3基因,同时设置阴性干扰对照组(Scramble siRNA),同前分组处理后再次检测细胞凋亡率、细胞活性及BNIP3、Bax、Bak蛋白的表达水平。结果:对5例标本获得的CESCs进行了干细胞标志物鉴定,其中细胞表面粘附分子44(CD44)、CD73、CD90和CD105为阳性,CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR为阴性,提示CESCs具有干细胞特性。实验组细胞凋亡率为(29.12±0.65)%显著高于对照组的(14.87±2.03)%(P<0.05);实验组的细胞增殖活性明显降低,为对照组的56.18%(P<0.05)。与对照组相比,实验组BNIP3、Bax、Bak蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。使用BNIP3 siRNA干扰后,缺氧和营养缺乏引起的细胞凋亡增加和细胞增殖活力下降均被明显抑制;同时,缺氧和营养缺乏导致CESCs中BNIP3、Bax和Bak的蛋白表达升高也被显著逆转(P<0.05)。结论:缺氧和营养缺乏能够诱导CESCs发生凋亡,此过程可能是通过上调BNIP3、Bax和Bak蛋白表达而发挥作用的。

c-Jun氨基端激酶通路抑制剂SP600125对大鼠脑缺血再灌注后自噬的影响

目的研究c-Jun氨基端激酶(JNK)特异性抑制SP600125对大鼠脑缺血再灌注后自噬性蛋白Beclin1、髓样细胞白血病基因-1(Mcl-1)蛋白和B淋巴瘤-2基因相关X(Bax)蛋白表达的影响。方法按照体重将SD大鼠随机分为3组,每组10只:假手术组、模型组和实验组。模型组和实验组均采用线拴法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO)模型,脑缺血1 h再灌注72 h。造模前,实验组先向大鼠侧脑室内注射3μg·μL^(-1)SP600125溶液10μL,1 h后进行MCAO制模。以组织免疫荧光染色方法测定MCAO后JNK与Beclin1的表达;以免疫印迹法测定MCAO后JNK、Beclin1、Mcl-1和Bax蛋白表达。结果给药后,假手术组、模型组、实验组的JNK条带光密度值分别是0.11±0.05,0.83±0.03,0.56±0.04;这3组的Beclin1条带光密度值分别为0.14±0.04,1.77±0.05,0.86±0.05;这3组的Mcl-1条带光密度值分别为0.17±0.03,0.79±0.04,1.46±0.05;这3组的Bax条带光密度值分别为0.26±0.05,1.15±0.06,0.47±0.04。模型组与假手术组比较,JNK、Beclin1、Mcl-1和Bax值均明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01);实验组与模型组比较,JNK、Beclin1和Bax值均明显下降而Mcl-1值明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论通过抑制JNK可下调脑缺血再灌注后Bax与Beclin1的表达、上调Mcl-1蛋白表达,推测JNK可能参与调节缺血再灌注后神经元的自噬。

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1(YAP1)、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。