降钙素基因相关肽在大鼠纹状体边缘区内分布及其纤维联系的研究

应用免疫细胞化学ABC法对降钙素基因相关肽（CGRP）在大鼠纹状体边缘区内的分布以及与杏仁核、终纹床核等边缘系统结构之间的联系进行了研究。结果发现：（1）CGRP免疫阳性纤维在纹状体内存在于纹状体的中部和尾侧，位于尾壳核和苍白球之间，即相当于纹状体边缘区的部位，形成一条明显的背腹方向走行的带状。CGRP免疫阳性纤维分布越靠纹状体尾，则纤维越密集，且阳性带越宽；（2）在纹状体的最尾侧，除边缘区外，尾壳核的外侧缘也出现一条致密的阳性纤维带，与边缘区走向一致。并与边缘区的CGRP阳性纤维带之间存在较多的横向联系纤维；（3）纹状体边缘区的CGRP阳性纤维向背侧通过终纹与吻侧的终纹床核联系，向腹侧与杏仁核的CGRP阳性纤维相连，向尾侧和中脑黑质外侧部及其背外侧区的CGRP阳性胞体相连；（4）边缘区的CGRP阳性纤维主要与杏仁中央核相联系，少量与杏仁内侧核相联系；尾壳核外侧缘的CGRP阳性纤维也主要与杏仁中央核相联系。结果提示：CGRP阳性纤维在纹状体边缘区、杏仁核、终纹床核以及黑质背外侧区之间形成了一个相互联系的神经网络，纹状体边缘区与边缘系统之间存在密切的纤维联系。

戊四氮诱发大鼠全身强直-阵挛性癫痫发作诱导终纹床核c-fos癌基因表达

本文用Fos癌蛋白抗体免疫组化法详细研究了戊四氮诱发大鼠全身强直-阵挛性癫痫发作诱导终纹床核c-fos癌基因表达的动态分布,结果如下:腹腔内注入戊四氮50mg/kg后0.5h,前腹区梭形核出现低密度的Fos免疫阳性(Fos-ir)细胞核标记;注射戊四氮后3h,前腹区和后部腹外侧区域均有较高密度的Fos-ir标记,前外区和前背区的密度则较低,后部背内侧区域未见Fos-ir标记;注射戊四氮后6h,终纹床核各核团和区域均出现较高密度的Fos-ir标记,其中,前部的密度高于后部、腹侧区域的密度高于背侧区域。上述终纹床核的Fos-ir标记出现的先后顺序及波及范围很可能反映了戊四氮诱发大鼠全身强直-阵挛性癫痫发作累及终纹床核的顺序和范围。

大鼠终纹床核卵圆核及其邻近区域的传出纤维联系——WGA-HRP顺行追踪法研究

本实验选用150～260g的雄性Sprague-Dawley大鼠13只,把WGA-HRP/HRP混合水溶液加压注入一侧终纹床核群前外侧区的卵圆核区域,冰冻切片,TMB法呈色后,在中枢看到顺行标记终末最密集的部位是:下丘脑后部外侧区、中央杏仁核、中脑中央灰质、臂旁核、三叉神经中脑核、蓝斑;比较多的部位是视前区、下丘脑室周区、弓状核、丘脑中线核群、内侧纽核、腹侧背盖核、脚桥背盖核、中脑网状结构、中缝背核以及迷走神经复合体;在线形中缝核、中央上核、腹侧背盖区、黑质,以及延髓中介核,也看到少量标记终末。本工作对卵圆核的传出纤维联系,进行了较全面的观察。

大鼠下丘脑室旁核与终纹床核及前额叶皮质间纤维联系的研究

分别注射辣根过氧化物酶(HRP)入大鼠的PVN和BNST,用组织化学的方法在确定注射部位准确的情况下,在PVN、BNST及PFC观察被标记的神经元或轴突末梢,探讨大鼠下丘脑室旁核(PVN)与终纹床核(BNST)及前额叶皮质间(PFC)之间是否存在投射通路;将HRP注射到PVN后,在同侧的BNST见标记的细胞体,在PFC未见标记的细胞体或轴突末梢;将HRP注射到BNST后,在同侧的PVN见标记的轴突末梢,在PFC未见标记的细胞体或轴突末梢。大鼠BNST有神经纤维投射到PVN,PFC与PVN及BNST之间没有直接的或只有极少量的纤维联系,在机体面临威胁性情境时,BNST可能激活HPA轴引发生理和行为反应,PFC是否通过与PVN或BNST的直接或间接的纤维投射实现其调节功能值得关注。

大鼠终纹床核卵圆核的传入联系——FG和WGA-HRP逆行追踪法研究

实验选用雄性Sprague-Dawley大鼠24只,分2组进行。第1组11只,将2～4％的荧光金(fluoro-gold,FG)水溶液加压或电泳导入一侧终纹床核群卵圆核,检查中枢不同区域逆行标记细胞的分布。第2组13只,将WGA-HRP/HRP混合水溶液注入一侧卵圆核,检查逆行标记细胞在不同脑区的分布。比较两组结果,发现所标记的神经元分布范围和趋势大致相同;但FG标记的神经元突起远较HRP标记长,并在对侧某些区域出现标记细胞。这表明作为一种逆行束路示踪剂,FG较WGA-HRP敏感性高。逆行标记细胞主要见于梨状皮质、纹底、海马下托、视前区、斜角带水平支、大细胞视前区、腹侧苍白球;杏仁体的中央核、内侧核、皮质核;丘脑的中线核群、束旁核、室旁核有散在的标记细胞;下丘脑的前区、外侧区、背侧区和腹内核、弓状核、前乳头体核有数量不等的标记细胞;中脑的中央灰质腹侧半、中缝背核、脚桥被盖核、中缝核群和腹侧被盖区、黑质致密带、脚间核、束间核;脑桥的臂旁核、蓝斑、三叉神经中脑核、A_5区、中缝核群;延髓的孤束核/迷走神经背核和C_1/A_1等区域均可看到一定数量的标记细胞。本工作首次较系统地观察了大鼠卵圓核的传入纤维联系。

GABA免疫阳性神经元和纤维在大鼠终纹床核的分布

用ABC法研究GABA免疫阳性神经元和纤维在大鼠终纹床核的分布,结果如下;大量GABA阳性神经元分布于终纹床核前外区和前背区背侧部及前腹区和后部腹侧部,其余区域阳性细胞较少,除前外区卵圆形核和囊旁核、前腹区纹旁核和梭形核及后部主核内,中至高密度的阳性细胞限于这些核团范围内,其余区域的细胞散在分布。GABA阳性纤维主要集中于前外区、前背区背侧部、前腹区梭形核和纹旁核及后部背侧区域。终纹内的大量阳性纤维,主要分布于其腹外和腹内角。结合文献报道,上述结果提示,卵圆形核经终纹投射至同侧杏仁中央核,以及杏仁中央核和内侧核经终纹投射至同侧卵圆形核和主核的纤维,均可能为GABA能;其中,卵圆形核向杏仁中央核的GABA能投射,可能在癫痫的发生和发展中起重要作用。

大鼠终纹床核5-羟色胺免疫阳性神经纤维及终支的分布

本文在鞠躬和Swanson有关大鼠终纹床核细胞构筑学研究的基础上,用ABC或PAP免疫组化结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈色法,对大鼠终纹床核内5-HT免疫阳性神经纤维和终支(简称5-HT纤维)的分布进行了研究。结果如下:终纹床核内的5-HT纤维由较粗纤维、细纤维和膨体型纤维组成。除卵圆形核、囊旁核、梭形核、后背核和主核含3种纤维及终纹床核纹延部仅有膨体型纤维外,终纹床核其余区域中5-HT纤维为细纤维和膨体型纤维的混合。在前部,以其腹内侧部尾侧的5-HT纤维密度最高,腹外侧部及背内侧部次之,背外侧部吻侧最低;在后部,则以腹外侧部密度最高,背外侧部次之,内侧部最低。上述结果表明,终纹床核内各区间5-HT纤维的分布密度和纤维特征的差别基本上与终纹床核各区的个体发生顺序吻合。此外,本文还讨论了终纹床枝内5-HT纤维与5-HT受体不匹配现象。

大鼠终纹床核卵圆核内CRF与NT的共存——相邻切片法研究

实验选用170～210g的雄性Sprague-Dawley大鼠,侧脑室注入秋水仙素80～120μg,48小时后经左心室灌流固定,恒冷箱连续切片,厚5μm,每两个相邻的切片相对应,融表在两组载片上,分别用促肾上腺皮质激素释放因子抗血清(Anti-CRF)和神经降压素抗血清(Anti-NT)孵育,ABC或PAP免疫组织化学反应后,DAB呈色,检查、比较配对切片上免疫反应阳性细胞的位置和形态。结果,在相邻切片上看到卵圆核内有数量不等的位置相同、形态相似的免疫反应阳性细胞,即CRF-NT双标记或两种神经肽共存神经元。本组实验首次发现卵圆核内有CRF-NT共存神经元。

电刺激终纹床核群对大鼠痛阈的影响

本实验用辐射热作为伤害性刺激，以浅麻状态大鼠甩尾反射潜伏期为痛阈指标，观察了电刺激终纹床核群对大鼠痛阈的影响。结果表明，电刺激终纹床核群使大鼠甩尾反射潜伏期明显延长；这种作用可被ＰＡＧ内微量注入γ－氨基丁酸所阻断。提示终纹床核群参与了痛觉调制，其下行抑制通路主要是经过ＰＡＧ中继的。

TH免疫阳性神经成分在大鼠终纹床核的分布

本文在Ju和Swanson有关大鼠终纹床核细胞构筑的最新研究基础上,用ABC免疫组化结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈邑法洋细研究了酪氨酸羟化酶免疫阳性神经成分在大鼠终纹床核的分布,结果如下;1.终纹床核中的酪氨酸羟化酶阳性神经元主要集中于前腹区纹旁核和腹核,总数约10个左右的阳性神经元还分布于前背区,后者尚未见文献报道;2.终纹床核各部均有酪氨酸羟化酶阳性神经纤维和终支,以前外区和前腹区密度最高,前背区次之,后部较低。结合文献报道得到下述推测;上述酪氨酸羟化酶阳性神经元可能为多巴胺能;前外区和前背区的酪氨酸羟化酶阳性纤维可能主要由多巴胺能纤维组成,而前腹区的酪氨酸羟化酶阳性纤维则可能主要为去甲肾上腺素能和肾上腺素能。

大鼠终纹床核5-羟色胺免疫阳性神经纤维和终支的起源

本文用WGA-HRP逆行束路追踪结合免疫酶组织化学双标记法,对大鼠终纹床核5-羟色胺(5-HT)免疫阳性神经纤维和终支(5-HT纤维)的起源进行了研究。结果如下,终纹床核主要区域的5-HT纤维,除主要起源于中缝背核和中央上核外,尚有部分纤维源自B_9组细胞群和尾侧线形核;在这些发出纤维支配终纹床核的中缝核神经元中,约有1/3为5-HT免疫阳性且主要为同侧;除少数区域外,这些核群内所有类型的5-HT免疫阳性神经元均有部分发出纤维投射到终纹床核。

大鼠中央杏仁核-卵圆核投射神经元的免疫细胞化学特征——荧光金逆行追踪结合免疫荧光双标记法研究

本实验用雄性Sprague-Dawley大鼠,全身麻醉下将荧光金水溶液注入一侧终纹床核群卵圆核区域,在同侧中央杏仁核看到大量逆行标记细胞。将此切片分别用促肾上腺皮质激素释放因子、神经降压素、甲-脑啡肽和胆囊收缩素抗血清孵育,再用FITC结合的羊抗兔IgG温育,结果在中央杏仁核范围内,看到数量不等的荧光金逆行标记细胞,分别被上述4种神经肽免疫血清标记。本组实验结果表明,中央杏仁核有上述4种肽能神经元投射到终纹床核群的卵圆核区域。

卵圆核内促肾上腺皮质激素释放因子和神经降压素免疫反应阳性神经元向后部下丘脑外侧区投射——荧光金逆行追踪结合免疫荧光双标记法研究

本实验选用雄性Sprague-Dawley大鼠15只,分为3组。第1组5只,将3％荧光金水溶液注入一侧不同平面下丘脑外侧区,检查终纹床核群内逆行标记细胞的分布;第2组3只,免疫酶和免疫荧光法检查终纹床核群卵圆核内促肾上腺皮质激素释放因子和神经降压素免疫阳性神经元的分布;第3组7只,选卵圆核内有逆行标记的切片,进行免疫荧光反应。结果发现,只有当示踪剂注入后部下丘脑外侧区时,卵圆核区域才出现较多的逆行标记细胞。免疫荧光法显示的两种肽能神经元的分布与免疫酶法相似;卵圆核内的逆行标记细胞,有的是促肾上腺皮质激素释放因子免疫阳性,也有的是神经降压素免疫阳性。本实验发现终纹床核群卵圆核内有上述两种肽能神经元投射到后部下丘脑外侧区。

卵圆核内CRF和NT免疫反应阳性神经元向中央杏仁核投射——荧光金逆行追踪结合免疫荧光双标记法研究

用雄性Sp:ague-Dawley大鼠14只,分两组。第一组6只,将荧光金(FG)注入杏仁复合体,检查终纹床核群范围内逆行标记细胞的分布。结果发现,只有在FG注射到中央杏仁核(Ce)的动物,卵圆核(Ov)内才出现较多的标记细胞。第二组8只,选FG注入Ce且Ov有较多标记细胞的切片,分别用抗促皮质激素释放因子(Anti—CRF)和抗神经降压素(Anti—NT)兔血清孵育,冉用FITC—IgG(羊抗兔)血清温育,结果发现,Ov内的FG标记细胞中,部分亦呈现CRF或NT免疫反应阳性。结果提示,Ov内有CRF和NT能神经元投射到Ce。

大鼠终纹床核区的垂体后叶投射细胞

在大鼠垂体后叶内注入霍乱毒素结合辣根过氧化物酶后,在终纹床核群区发现一些逆行标记细胞。根据最近对于终纹床核群的细胞构筑学的研究,本文分析了其逆行标记细胞的分布。在终纹床核群的前腹区内,在纹旁核内有少量树突,核周有少量细胞;有一些散在的大细胞核神经元;腹侧核内也有一些标记细胞。在终纹床核群后部的背侧半附近,有若干比较明显的标记细胞群,包括前穹窿核、内侧背副细胞群、外侧背副细胞群及室间孔下群。这些细胞群紧靠终纹床核群,却难以归入终纹床核群本身。但其树突往往伸入至终纹床核后部的主核或束间核内,与终纹床核具有共同的传入来源。还有少量细胞非恒定地散在于终纹床核群各处。

孕酮调节腺苷信号通路缓解大鼠神经病理性疼痛

目的:探索孕酮通过调节生殖内分泌靶器官睾丸和疼痛相关脑区终纹床核(bed nuclei of the stria terminals, BST)腺苷信号通路缓解坐骨神经结扎损伤(chronic constriction injury, CCI)模型大鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain, NP)的机制。方法:雄性SD大鼠32只,随机分为4组(每组8只):假手术组、模型组、腺苷A1受体(A1R)拮抗剂组(DPCPX, 2 mg·kg-1)和孕酮组(PROG,12 mg·kg-1)。结扎后第14天开始各组连续14天分别给予溶剂、DPCPX或孕酮干预。进行L4-5背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)和脊髓背角(spinal dorsal horn, SDH) 5’-核苷酸酶(ecto-5’-nucleotidase, CD73)免疫组化染色,并检测大鼠血清睾酮含量以及DRG、SDH、睾丸和BST的CD73或A1R蛋白表达变化。结果:与假手术组相比,模型组血清睾酮、DRG和SDH的CD73阳性细胞数以及DRG、SDH、睾丸和BST的A1R蛋白,显著下降或减少(P <0.05)。与模型组相比,PROG组和DPCPX组血清睾酮含量都有回升(P <0.05),但PROG组回升更显著(P <0.05);孕酮组DRG和SDH的CD73阳性细胞和A1R蛋白显著增多(P <0.05),但DPCPX抑制这些改变(P <0.05);孕酮组睾丸和BST的CD73蛋白和A1R蛋白均显著升高(P<0.05)。与孕酮组相比,DPCPX对睾丸和BST的CD73蛋白表达的抑制作用无统计学意义,但显著抑制了A1R蛋白水平恢复(P <0.05)。结论:孕酮通过调节DRG、SDH与生殖内分泌靶器官睾丸和疼痛相关脑区BST腺苷信号通路的上游信号CD73和下游信号A1R,缓解了大鼠NP。

应激诱发复吸行为的生物学机制研究进展

复吸是药物依赖的主要特征 ,也是治疗的首要问题。应激可以诱发复吸。应激诱发复吸的神经生物学机制不同于启动药物诱发复吸的机制。启动药物诱发复吸涉及中脑边缘多巴胺通路的激活 ;而应激诱发复吸主要涉及脑去甲肾上腺素和促肾上腺皮质激素释放因子 ,终纹床核是两者相互作用的关键部位。去甲肾上腺素外侧被盖核和终纹床核是应激诱发复吸的重要脑区。不同应激源可能通过相关机制诱发复吸。