大鼠肺泡巨噬细胞Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1表达变化及其调节糖皮质激素受体功能的研究

目的:在模拟大鼠肺泡巨噬细胞炎症合并糖皮质激素治疗的条件下,阐明Bcl-2相关抗凋亡蛋白-1(BAG-1)的表达变化及其对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法:Western blot检测脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1表达变化;免疫共沉淀法检测核蛋白中BAG-1与GR相互结合作用;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果:LPS和Dex作用后,细胞总蛋白中BAG-1 L表达增加,BAG-1 S表达无变化;核蛋白中只能检测到BAG-1 L,表达量在LPS作用24 h内逐渐增加;细胞核内BAG-1 L与GR在LPS和Dex作用后存在着相互结合,同时GR转录激活活性逐渐降低,其变化与核蛋白中BAG-1 L表达变化呈负相关。结论:LPS和Dex作用大鼠肺泡巨噬细胞BAG-1 L表达增加,与GR结合后共同转核,并抑制GR活性。该机制可能是感染条件下糖皮质激素抵抗的重要因素。

鼻息肉组织嗜酸粒细胞中水通道蛋白-1和抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达及意义

目的 明确水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)mRNA、抗凋亡基因Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织中的表达、分布及其相关性,探讨AQP-1 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞中表达的意义。方法 16例鼻息肉组织标本来源于鼻息肉切除的患者(女11例,男5例,年龄20-65岁);10例下鼻甲黏膜组织来源于有变应性鼻炎病史的鼻整形患者(女7例,男3例,平均年龄16-58岁)。上述标本取组织相邻切片,应用原位杂交方法检测AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA的表达;以麦格-姬姆萨(May-Griunwald-Giemsa,MGG)染色法鉴别嗜酸粒细胞。结果 16例鼻息肉组织嗜酸粒细胞中均有AQP-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表达,其阳性细胞表达率分别为(93.16±13.25)％;(84.74±12.10)％;而10例下鼻甲组织嗜酸粒细胞中均有Bcl-2 mRNA表达,但仅有4例表达AQP-1 mRNA;AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA在下鼻甲组织嗜酸粒细胞中阳性细胞表达率分别为(19.54±4.98)％和(16.45±3.12)％。AQP-1 mRNA与Bcl-2 mRNA在鼻息肉组织嗜酸粒细胞的表达呈明显正相关(r=0.875,P<0.01)。结论 AQP-1能够平衡鼻息肉组织嗜酸粒细胞内外液体渗透压,维持其存活,在嗜酸粒细胞抗凋亡中具有重要的意义。

α-1抗胰蛋白酶对缺氧/复氧小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的建立小鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,观察α-1抗胰蛋白酶(α-1 antitrypsin,A1AT)对小鼠心肌细胞凋亡的影响。方法体外采用连二亚硫酸钠(Na_(2)S_(2)O_(4))4 mmol/L诱导的缺氧培养基培养小鼠心肌细胞,模拟缺氧/复氧模型,并筛选A1AT最佳干预浓度,筛选A1AT最佳干预浓度实验分为7个组:Blank组、Control组、H/R组、A1AT 10μmol/L组、A1AT 20μmol/L组、A1AT 40μmol/L组以及A1AT 80μmol/L组。筛选最佳干预时间实验分为8个组:Blank组、Control组、H/R组、A1AT 1 h组、A1AT 2 h组、A1AT 4 h组、A1AT 6 h组及A1AT 12 h组。之后A1AT干预实验分组:正常组(Control组)、缺氧/复氧组(H/R组)、α-1抗胰蛋白酶干预组(A1AT组)。利用CCK-8检测细胞功能、流式细胞仪检测细胞凋亡、免疫荧光及Western Blot检测caspase-3的表达。并用SPSS 22.0进行数据统计。结果A1AT最佳干预浓度为20μmol/L,最佳干预时间为4小时。流式细胞仪检测发现H/R组细胞凋亡率增加,A1AT组细胞凋亡率明显下降,Control组、H/R组及A1AT组三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光检测发现H/R组caspase-3分子表达强阳性,与Control组及A1AT组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测发现H/R组caspase-3蛋白表达上调,与Control组及A1AT组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论α-1抗胰蛋白酶对小鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡具有改善作用。

HIF-1α对脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及凋亡相关基因的研究进展

缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)是一种在低氧条件下发挥作用的重要转录调节因子,HIF-1蛋白α亚基受细胞内氧分压的影响,常氧条件下HIF-1α被降解而表达很少,低氧条件下HIF-1α被激活而大量表达,通过调节其下游多种效应分子的转录和表达而发挥作用,HIF-1的生物学功能由HIF-1α决定。脑缺血再灌注时可导致脑组织缺血缺氧,诱导HIF-1α表达上调,有助于机体更好地耐受低氧环境而发挥脑保护作用。本文就HIF-1α对其重要靶基因Bcl-2、Bax及Caspase-3在脑缺血再灌注损伤中的表达和调节作用做一综述,为临床以HIF-1α基因作为靶点治疗脑缺血再灌注损伤提供参考。

细胞死亡诱导p53靶蛋白1—一种新型凋亡蛋白的功能研究进展

细胞死亡诱导p53靶蛋白1(CDIP1)是一种新型凋亡蛋白,参与外源性凋亡通路、内源性凋亡通路及细胞焦亡相关通路,是多通路介导细胞凋亡的关键调节因子。近年来研究发现,CDIP1通过与凋亡因子相结合,参与多种肿瘤、心血管疾病的发生发展。然而,目前CDIP1调控细胞凋亡的分子机制、上下游调控因子及在各类肿瘤及疾病的作用机理亟待深入研究和挖掘。该文就CDIP1在细胞凋亡通路中的功能研究进展,不同凋亡通路中与B细胞受体相关蛋白31(BAP31)、凋亡相关基因-2(ALG2)等蛋白分子的作用机制及其在疾病中的作用进行综述。

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

紫草素通过Keap1/Nrf2通路对膀胱癌细胞恶性增殖及凋亡的影响及作用机制

目的探讨紫草素对膀胱癌(BC)细胞T24恶性增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法含不同浓度紫草素培养液(0、10、20、40、80μmoL·L^(-1))培养对数生长期T24细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)生成水平;比色法检测细胞丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)含量;RT-qPCR技术检测细胞中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA相对表达;Western blot法检测细胞中Keap1、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)及醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白相对表达量。结果T24细胞存活率、集落形成数、GSH含量、Nrf2 mRNA和蛋白、HO-1及NQO1蛋白相对表达量均随紫草素作用浓度增加而降低(P<0.05);紫草素作用效果呈浓度依赖性(P<0.05)。结论紫草素可抑制BC细胞恶性增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Keap1/Nrf2通路激活,提高细胞内ROS水平进而促进BC细胞内氧化还原稳态失衡有关。

银杏总黄酮对IL-1β诱导的髓核细胞凋亡及Nrf2/ARE信号通路的影响

目的:探讨银杏总黄酮(TFG)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的髓核细胞凋亡的影响,及对核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的调控作用。方法:将人椎间盘髓核细胞分为正常组、IL-1β诱导组、二甲基亚砜(DMSO)组、TFG不同浓度组(5、10、20、40、80、160mg/mL),除正常组外,各组均用浓度为10ng/mL的IL-1β诱导培养24h后,CCK-8法检测细胞增殖活性。将髓核细胞分为正常对照组、IL-1β诱导组、TFG低(20mg/mL)、高(80mg/mL)剂量组、Nrf2通路抑制剂组(Brusatol组,0.2μg/mL)、TFG+Brusatol组(80mg/mL+0.2μg/mL);用CCK-8法检测细胞活性;hochest 33258染色检测细胞凋亡情况;免疫荧光染色法检测活性氧(ROS)含量;免疫荧光共聚焦法检测Nrf2入核情况;蛋白免疫印迹法检测各组细胞Nrf2、ARE、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,IL-1β诱导组细胞增殖活性降低(P<0.05);与IL-1β诱导组比较,随着TFG浓度升高,细胞增殖活性逐渐升高,在80~160mg/mL时保持在稳定水平,后续选用20mg/mL、80mg/mL为TFG低、高剂量组进行后续试验。与正常对照组比较,IL-1β诱导组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、cleaved caspase-3、HO-1、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)。与IL-1β诱导组比较,TFG低、高剂量组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.05);且TFG高剂量组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平高于TFG低剂量组(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α蛋白表达水平低于TFG低剂量组(P<0.05);Brusatol组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)。与TFG高剂量组比较,TFG+Brusatol组细胞增殖活性、Nrf2入核数目、Nrf2、ARE、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、ROS含量、cleaved caspase-3、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:TFG可通过激活Nrf2/ARE通路,发挥抗炎、抗氧化、抗髓核细胞凋亡作用。

PCNA、BCL-2和P53^(mt)蛋白在燃煤型砷中毒患者不同病变皮肤中的表达及相关性分析

目的 分析燃煤型砷中毒患者皮肤癌变过程中增殖细胞核抗原 (PCNA)、B-淋巴细胞瘤 /白血病 - 2抗凋亡蛋白 (BCL- 2 )和突变型 P5 3基因蛋白 (P5 3mt)的表达情况及相关性。方法 免疫组化 ABC法和En Vision TM +System两步法。结果 PCNA、BCL- 2和 P5 3mt蛋白在砷中毒患者的不同病变皮肤中均有表达 ,且无论是阳性细胞密度还是阳性率均呈现出癌变组 (A组 ) >癌前组 (B组 ) >一般病变组 (C组 )的趋势 ;癌变组 3项指标协同阳性率为 83.33% ,明显高于癌前组的 5 4.5 4%和一般病变组的 2 3.0 8% ;任何两指标间均有高度相关性(P<0 .0 1)。结论 PCNA、BCL- 2和 P5 3mt的协同高表达是砷性皮肤病变恶性转化的重要标志 ,皮肤角化过度患者有相当比例的表达 ,提示其具有恶变的潜在危险 ;燃煤型砷中毒致皮肤癌变过程中 ,PCNA、BCL - 2和 P5

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A1细胞增殖及SFRP1、MGMT甲基化蛋白表达的影响

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肺癌SPC-A1细胞增殖、细胞划痕和凋亡的影响,探讨抑癌基因分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)基因启动子区DNA甲基化mRNA和蛋白在其中的表达和意义。方法CCK-8法检测不同浓度的5-Aza-CdR对人肺癌SPC-A1细胞增殖影响,划痕实验测定5-Aza-CdR对SPC-A1细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色检测(0、3、10、30μmol·L^(-1))5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞24h后细胞凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测SPC-A1细胞中SFRP1和MGMT的mRNA、蛋白表达。结果5-Aza-CdR可以浓度梯度的抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,IC 50为21.2μmol·L^(-1);5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))作用48 h后,肺癌SPC-A1细胞划痕愈合分别为对照组的(92.4±2.6)%、(83.6±4.2)%、(76.7±4.5)%;5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞后,出现典型的细胞凋亡形态学改变;不同浓度5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^(-1))处理SPC-A1细胞24 h后,SFRP1、MGMT mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,抑制肺癌细胞划痕修复和促进凋亡,可能与升高MGMT和SFRPl的甲基化表达有关。

缺氧诱导因子-1α的表达与胰腺癌细胞增殖和凋亡研究

目的 探讨缺氧诱导因子- 1α(HIF -1α)在胰腺癌组织中表达及其与bcl 2和PCNA的关系。方法 应用免疫组织化学PicTureTM 检测47例胰腺癌组织中HIF- 1α、PCNA和bcl 2的表达。结果 47例胰腺癌组织HIF 1α阳性表达率为5 5 .3 % (2 6/4 7) ,有周围脏器浸润者与无浸润者的HIF- 1α阳性表达率分别为66.7% (2 0 /3 0 ) ,3 5 .3 % (6/17) ,两者有显著性差异(χ2 =4.3 2 ,P<0 .0 5 ) ;在47例胰腺癌组织中高增殖活性2 8例(Ⅲ/Ⅳ)、低增殖活性19例(Ⅰ/Ⅱ)。bcl 2在47例胰腺癌组织中阳性率为2 9.8%(14 /4 7)。HIF- 1α表达与胰腺癌细胞增殖程度呈正相关性(γ=0 .5 86,χ2 =15 .15 ,P <0 .0 1) ,与Bcl 2蛋白表达无相关性(γ=-0 .2 11,χ2 =15 .15 ,P >0 .0 5 )。结论 HIF -1α表达与胰腺癌的增殖、浸润和转移密切相关,与肿瘤细胞凋亡无关。

芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的作用机制研究

目的:观察芪蓝方对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:以DU145细胞为研究对象,通过观察不同浓度芪蓝方组(400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56、0μg/ml)细胞形态变化,筛选出高、中、低浓度应用于后续实验,并采用CCK-8法检测DU145细胞增殖,流式细胞术检测DU145细胞周期、凋亡情况,Western印迹检测DU145细胞中细胞周期、凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase 3的表达。结果:筛选结果显示100、200、400μg/ml浓度的芪蓝方均能显著抑制DU145细胞的生长、降低轮廓清晰度和贴壁能力,且200、400μg/ml浓度的芪蓝方可显著降低DU145细胞活力,故确定高中低浓度为400、200、100μg/ml,并用于后续实验研究。与空白组比较,G2期各浓度组DU145细胞数显著增加(P<0.01),而S期高、中浓度组细胞数显著下降(P<0.01、P<0.05);与空白对照组相比,芪蓝方各组DU145细胞总凋亡数均显著增高(P<0.01),高浓度组Cyclin D1表达显著降低,高、中浓度组Bcl-2表达明显降低,Bax和Cleaved-Caspase 3表达水平明显上升(P均<0.01)。结论:芪蓝方能够抑制前列腺癌DU145细胞的细胞增殖,促进其细胞凋亡,其机制可能与下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达,破坏Bax/Bcl-2平衡,上调Cleaved-Caspase 3表达相关。

CGRP、IGF-1、Bcl-2蛋白在急性脑梗死病情评估与预后预测中的价值

目的探究降钙素基因相关肽(CGRP)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、凋亡相关因子Bcl-2蛋白在急性脑梗死(ACI)病情评估与预后预测中的价值。方法选取阜阳市第二人民医院ACI患者117例,根据90 d预后分为预后良好组(87例)与预后不良组(30例),比较两组、不同病情程度患者血清CGRP、IGF-1、Bcl-2蛋白水平,分析各指标与病情程度及预后的关系,并评价各指标对预后的预测价值。结果预后不良组血清CGRP、IGF-1低于预后良好组,Bcl-2蛋白高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);血清CGRP、IGF-1与病情程度呈负相关,Bcl-2蛋白与病情程度呈正相关(P<0.05);多元线性回归分析,将NIHSS评分、梗死面积等其他因素控制后,血清CGRP、IGF-1、Bcl-2蛋白仍与预后显著相关(P<0.05);ROC曲线分析,血清CGRP、IGF-1、Bcl-2蛋白预测预后的AUC分别为0.763、0.623、0.792,三者联合预测预后的AUC为0.871,95%CI为0.797~0.926,诊断敏感度为90.00%,特异度为70.11%,明显优于各指标单独预测(P<0.05)。结论 CGRP、IGF-1、Bcl-2蛋白与ACI病情、预后显著相关,联合检测不仅能评估病情程度,还可能成为临床预测预后的重要途径。

RRS1在MPP^+诱导SH-SY5Y细胞凋亡过程中表达的变化及意义

目的探究核糖体合成调节因子1(RRS1)在1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^+)诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡过程中表达的变化及意义。方法以含有0、100、200、400μmol/L MPP^+的培养基培养SH-SY5Y细胞48 h,用CCK-8法检测各组细胞的增殖活力,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位,采用Annexin V-APC/PI试剂盒检测细胞凋亡率,用Western blot检测细胞抑癌因子P53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)与RRS1蛋白的表达。构建RRS1慢病毒过表达载体(Lv-RRS1)和慢病毒阴性对照载体,对细胞进行慢病毒转染后,用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测慢病毒转染效率;对转染细胞以400μmol/L MPP^+处理48 h,用CCK-8检测细胞增殖活力,用Annexin V-APC/PI试剂盒检测细胞凋亡率,用Western blot检测细胞RRS1、P53、Bcl-2和Bax蛋白的相对表达情况。结果细胞经MPP^+处理培养,SH-SY5Y细胞增殖活力、线粒体膜电位显著降低(F=95.63、69.90,P<0.05);细胞凋亡率明显升高(F=258.49,P<0.01);P53蛋白和Bax蛋白表达明显升高(F=40.47、20.78,P<0.05);RRS1蛋白和Bcl-2蛋白表达明显降低(F=28.44、42.43,P<0.05)。慢病毒转染后,与对照组相比较,Lv-RRS1组RRS1 mRNA和蛋白表达量均明显增加(t=15.59、6.05,P<0.01);对转染的细胞以400μmol/L MPP^+处理48 h后,与对照组相比较,Lv-RRS1组细胞增殖活力显著升高(t=4.76,P<0.01);细胞凋亡率明显降低(t=5.80,P<0.01);RRS1蛋白和Bcl-2蛋白表达明显升高(t=12.41、3.14,P<0.05);P53蛋白和Bax蛋白表达显著降低(t=5.20、4.77,P<0.05)。结论RRS1在MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡中低表达,RRS1可能通过影响凋亡相关因子P53、Bax和Bcl-2蛋白的表达参与MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。

苯乙酸联合化疗药物对Hep-2细胞凋亡及Bax表达的影响

目的初步探讨苯乙酸联合化疗药物促喉癌细胞凋亡的可能机制。方法体外培养Hep-2细胞,将苯乙酸(phenylacetate,PA)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(CDDP)及PA分别联合5-Fu、CDDP,5组药物作用于Hep-2细胞24小时,以无用药Hep-2细胞做为对照组,进行吖啶橙染色,分别检测喉癌细胞凋亡百分率,同时通过Bax免疫组织化学染色,观察Hep-2细胞中Bax的表达。结果①单一用药组及联合用药组与对照组相比,细胞凋亡百分率明显高于对照组(P<0.05),联合用药组与单一用药组相比,细胞凋亡百分率高于单一用药组(P<0.05);②单一用药组及联合用药组与对照组相比,Bax蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05),联合用药组与单一用药组相比,Bax蛋白表达水平明显高于单一用药组(P<0.05)。结论①PA联合5-Fu、CDDP对喉癌细胞的作用与单一化疗药物组比,具有明显促进细胞凋亡的作用;②PA联合CDDP、5-Fu抗喉癌细胞的机制与凋亡有关;③PA联合5-Fu、CDDP促进Hep-2细胞凋亡的机制可能与促进促凋亡基因Bax蛋白的表达有关。

miR-140-3p靶向凋亡基因BAX减轻白细胞介素-1β诱导的软骨细胞损伤

目的研究微小RNA(microRNA,miR)-140-3p靶向凋亡基因Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associatal X protein,BAX)减轻白细胞介素(interleukin,IL)-1β诱导软骨细胞损伤的作用及机制。方法培养大鼠骨关节软骨细胞ATDC5,采用不同浓度IL-1β(0、1、5、10ng/mL)处理后检测miR-140-3p、BAX的表达水平;10 ng/mL IL-1β处理的同时转染阴性对照(NC)miR或miR-140-3p、感染NC腺病毒或BAX腺病毒,检测细胞存活率、凋亡率、miR-140-3p、BAX及Cleaved caspase-3表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p靶向BAX的作用。结果不同浓度IL-1β处理的ATDC5细胞中miR-140-3p表达降低、BAX表达增加(P<0.05);miR-NC+IL-1β组的存活率、miR-140-3p表达水平低于miR-NC组,凋亡率、BAX及Cleaved caspase-3表达水平高于miR-NC组(P<0.05);miR-140+IL-1β组的存活率、miR-140-3p表达水平高于miR-NC+IL-1β组,凋亡率、BAX及Cleaved caspase-3表达水平低于miR-NC+IL-1β组(P<0.05);miR-140+Ad-BAX+IL-1β组的存活率低于miR-140+Ad-NC+IL-1β组,凋亡率、BAX及Cleaved caspase-3表达水平高于miR-140+Ad-NC+IL-1β组(P<0.05)。结论在IL-1β诱导软骨细胞损伤模型中miR-140-3p起到保护作用,靶向BAX并抑制细胞凋亡是相关的分子机制。

乳腺浸润性导管癌组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化及意义

目的观察乳腺癌浸润性导管癌(IDC)组织中Bag-1、Bcl-2、Bax的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测85例IDC及其癌旁组织中的Bag-1、Bcl-2、Bax。结果 DC组织中Bag-1、Bcl-2、Bax阳性表达率分别为92.9%(79/85)、78.8%(67/85)、74.1%(63/85),癌旁组织中分别为58.8%(50/85)、58.8%(50/85)、67.1%(57/85)。IDC组织中Bag-1、Bcl-2阳性表达率与癌旁组织比较,P均<0.05。Bag-1表达与IDC肿瘤直径有关(P<0.05)。IDC组织中,Bag-1、Bcl-2表达呈正相关(r=0.512,P<0.05)。结论 IDC组织中Bag-1、Bcl-2高表达,二者在乳腺癌的发生发展中发挥作用。

苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对Nrf2/HO-1通路的影响

[目的]探讨苓桂术甘汤对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用及对核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)通路的影响。[方法]45只雄性SD大鼠中随机选择10只作为正常对照组,其余35只经尾静脉注射氯化钡溶液制备慢性心律失常模型,将30只建模成功的大鼠随机分为苓桂术甘汤组、阳性对照组、模型对照组,每组各10只。苓桂术甘汤组大鼠采用苓桂术甘汤灌胃,阳性对照组采用酒石酸美托洛尔灌胃,模型对照组和正常对照组接受等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,2次/d,均干预4周。采用心电图检验大鼠造模成功情况,以酶联免疫吸附法检验大鼠血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽硫基转移酶(glutathione S-transferase,GST)含量,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察心肌组织病理变化,DNA缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)与Western blot检测心肌组织中Nrf2、HO-1基因及蛋白表达水平。[结果]与正常对照组比较,模型对照组、阳性对照组、苓桂术甘汤组GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白相对表达量较高(P<0.05)。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较高,心肌细胞凋亡率较低(P<0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠的GSH和GST含量较低,心肌细胞凋亡率较高(P<0.05)。模型对照组心肌组织水肿、充血严重,肌束紊乱,心肌细胞间隙增宽;阳性对照组、苓桂术甘汤组心肌组织水肿、肌束及心肌细胞间隙明显改善。与模型对照组比较,阳性对照组、苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较高(P<0.05);与阳性对照组比较,苓桂术甘汤组大鼠Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对表达量均较低(P<0.05)。[结论]苓桂术甘汤可能通过激活Nrf2/HO-1通路,发挥对慢性心律失常大鼠心肌损伤的保护作用。

缺血预处理对大鼠移植胰缺血再灌注损伤的保护作用及其与细胞凋亡的相关性

目的:探讨缺血预处理对大鼠移植胰缺血再灌注损伤的早期保护作用及其与细胞凋亡的相关性.方法:正常大鼠6只为对照组,糖尿病SD大鼠24只随机分为缺血再灌注组(I/R组,n=6)和缺血预处理组(IPC组,n=18),IPC组又根据不同方法分为3个亚组:IPC1组(缺血5min再灌注5min1次,n=6)、IPC2组(缺血5min再灌注5min2次,n=6)和IPC3组(缺血5min再灌注5min3次,n=6),I/R组和IPC组均行单纯胰腺移植,24只SD大鼠为供体;检测各组再灌注前、后血糖;再灌注后2h血清中TNF-α和NO的含量、移植胰组织中SOD,MPO和MDA含量;用TUNEL法观察移植胰组织细胞凋亡情况,WesternBlot法检测移植胰组织Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果:再灌注后IPC1(14.3±1.1vs12.1±0.9mmol/L.P<0.05)组、IPC2(12.1±0.9vs16.5±1.4mmol/L,P<0.01)和IPC3组(14.7±1.3vs12.1±0.9mmol/L,P<0.05)相对于I/R组血糖低;IPC2组较IPC1组(12.1±0.9vs14.3±1.1mmol/L,P<0.05)和IPC3组(12.1±0.9vs14.7±1.3mmol/L.P<0.05)血糖低.再灌注后IPC1(1.41±0.17vs1.79±0.25kU/L,P<0.05)组、IPC2(1.05±0.16vs1.79±0.25kU/L,P<0.01)和IPC3组(1.43±0.20vs1.79±0.25kU/L,P<0.05)较I/R组血清中TNF-α含量低;IPC2组较IPC1组(1.05±0.16vs1.41±0.17kU/L,P<0.05)和IPC3组(1.05±0.16vs1.43±0.20kU/L,P<0.05)TNF-α含量低.再灌注后IPC1(13.13±2.87vs8.91±1.23μg/L,P<0.05)组、IPC2(18.79±2.39vs8.91±1.23μg/L,p<0.01)和IPC3组(14.36±1.78vs8.91±1.23μg/L,P<0.05)较I/R组血清中NO含量高;IPC2组较IPC1组(18.79±2.39vs13.13±1.87μg/L,P<0.05)和IPC3组(18.79±2.39vs14.36±1.78μg/L,P<0.05)NO含量高.再灌注后IPC1(179.82±19.54vs153.47±17.67mU/g,P<0.05)组、IPC2(213.64±22.97vc153.47±17.67mU/g,P<0.01)和IPC3组(181.68±20.32vs153.47±17.67mU/g,P<0.05)较I/R.组移植胰组织中SOD活性高;IPC2组较IPC1组(213.64±22.97vs179.82±19.54mU/g,P<0.05)和IPC3组(213.64±22.97vs181.68±20,32mU/g.P<0.05)SOD活性高.再灌注后IPC1(0.70±0.26vs0.87±0.31mmol/g,P<0.05)组、IPC2(0.46±0.18vs0.87±0.31mmol/g,P<0.01)和IPC3组(0.67±0.15vs0.87±0.31mmol/g,P<0.05)较I/R组移植胰组织中MDA含量低;IPC2纽较IPC1组(0.46±0.18vs0.70±0.26mmol/g,P<0.05)和IPC3组(0.46±0.18vs10.67±0.15mmol/g,P<0.05)MDA含量低.再灌注后IPC1(0.81±0.23vs0.96±0.34A/g,P<0.05)组、IPC2(0.51±0.16vs0.96±0.34A/g,P<0.01)和IPC3组(0.78±0.22vs0.96±0.34A/g,P<0.05)较I/R.组移植胰组织中MPO活性低;IPC2组较IPC1组(0.51±0.16vs0.81±0.23A/g,P<0.05)和IPC3组(0.51+0.16vs0.78+0.22A/g,P<0.05)MPO活性低.再灌注后IPC1(25.21±3.47vs35.65±4.78%,P<0.01)组、IPC2(15.47±2.09vs35.65±4.78%,P<0.01)和IPC3组(24.89±3.56vs35.65±3.78%,P<0.01)较I/K组移植胰组织中AI值低;IPC2组较IPC1组(15.47±2.09vs25.21±3.47%,P<0.05)和IPC3组(15.47±2.09vs24.89±3.56%,P<0.05)AI值低.再灌注后I/R组胰组织Bax蛋白高表达,Bcl-2蛋白低表达,IPC各组再灌注后移植胰组织Bax蛋白低表达,Bcl-2蛋白高表达,而IPC2组Bcl-2蛋白表达最高Bax蛋白表达最低.结论:缺血预处理对大鼠移植胰的缺血再灌注损伤具有早期保护作用,可能于提高SOD的活性、增加内源性NO的合成、下调TNF-α和减轻PMNs黏附与聚集有关;缺血预处理可以减少移植胰缺血再灌注后的细胞凋亡,可能于减轻PMNs黏附与聚集、减少氧自由基、上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白有关;缺血5min再灌注5min2次是最佳的大鼠移植胰缺血预处理诱导办法.

石蜡包埋组织提取RNA检测API2-MALT1融合基因的研究

目的研究从石蜡包埋组织中提取RNA检测黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤T(11,18)易位所致API2-MALT1(凋亡抑制蛋白2-黏膜相关淋巴瘤转位基因1)融合基因。方法采用酸性酚氯仿法从石蜡包埋组织中提取RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增API2-MALT1融合基因,并通过转染测序检测基因。结果全部病例均检测到葡糖6磷酸脱氢酶(G6PD)重排;101例MALT淋巴瘤中API2-MALT1融合基因阳性率为21.8%,其中低度恶性的阳性率为25.0%,转化型的阳性率为13.8%;80例弥漫大B细胞淋巴瘤仅1例阳性;DNA测序结果与国际报道的序列相符。结论石蜡包埋组织中提取RNA方法稳定,可为疾病相关基因检测提供有效手段,在科研和临床方面有广阔的应用前景。