山萘酚逆转肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的作用机制研究

目的探讨山萘酚(KAE)对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu功能的影响。方法采用KAE处理Bel-7402/5-Fu细胞,将细胞分为对照组和药物组(0.064、0.320、1.600、8、40、200μmol/L KAE);根据干扰DNA依赖性激酶催化亚基(DNA-PKcs)、加入蛋白酶体抑制剂MG132或加入自噬抑制剂CQ,将细胞分为si-NC组和DNA-PKcs干扰(siRNA-1664、siRNA-2142、siRNA-3785)组,对照组、KAE组和KAE+si-DNA-PKcs组,对照组、KAE+DMSO组、KAE+MG132组和KAE+CQ组。采用CCK-8检测细胞增殖,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测组蛋白H_(2)AX磷酸化(γ-H_(2)AX)、DNA-PKcs、DNA双链断裂修复/V(D)J重组蛋白(Artemis)和药泵基因(P-gp)mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白稳定性实验检测DNA-PKcs蛋白稳定性,免疫共沉淀检测DNA-PKcs蛋白泛素化。结果与对照组相比,8μmol/L KAE处理细胞24 h可抑制约50%的细胞增殖能力,选择此时间和浓度进行后续研究。与对照组相比,KAE组γ-H_(2)AX mRNA和蛋白表达水平升高,DNA-PKcs、Artemis和P-gp mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与对照组相比,KAE促进Bel-7402/5-Fu细胞周期阻滞于G2/M期,增加细胞凋亡;与si-NC组相比,siRNA-1664能显著下调DNA-PKcs mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);与KAE组相比,KAE+si-DNAPKcs组进一步促进了KAE对细胞的效应;与对照组相比,KAE+DMSO组DNA-PKcs蛋白表达水平降低(P<0.05);与KAE+DMSO组相比,KAE+MG132组DNA-PKcs蛋白表达水平升高(P<0.05),而KAE+CQ组DNA-PKcs蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);与对照组相比,KAE+DMSO组促进DNA-PKcs蛋白的泛素化,而KAE+MG132组则可抑制其泛素化(P<0.05)。结论KAE能够诱导肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞凋亡和细胞周期阻滞。

冬凌草甲素对肝癌Bel-7402/Sora细胞增殖、凋亡、细胞周期及PI3K/AKT信号通路的影响

[目的]探讨冬凌草甲素对人肝癌Bel-7402/Sora细胞增殖、凋亡、细胞周期及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路的影响。[方法]采用浓度梯度递增法建立Bel-7402/Sora耐药细胞株,以细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖抑制率并计算细胞耐药逆转指数,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各组细胞中PI3K、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的mRNA表达水平,免疫印迹法检测各组细胞中PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达水平。[结果]与空白对照组比较,终浓度为4、8、16、32、64μmol·L^(-1)的冬凌草甲素对Bel-7402/Sora细胞均有较好的抑制作用(P<0.05,P<0.01),且作用呈现浓度依赖性。冬凌草甲素对Bel-7402/Sora细胞耐药逆转指数为2.024。与空白对照组比较,冬凌草甲素组的早期、晚期和总凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.05);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组的早期总凋亡率均显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组的G2期细胞比例显著增加(P<0.01);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组G,期细胞比例增加,G2期细胞比例降低(P<0.01)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组PI3K、AKT、mTOR的mmRNA相对表达量均显著降低(P<0.01);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组PI3K、AKT、mTOR的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组PI3K、AKT、蛋白相对表达量均显著降低(P<0.01),mTOR蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组AKT、蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),PI3K、mTOR蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]冬凌草甲素能抑制Bel-7402/Sora细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻碍细胞周期进程,其机制可能与干预PI3K/AKT信号通路有关。

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。

苦参碱衍生物ZS10基于PI3K/AKT信号通路诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡

目的探讨新型苦参碱衍生物ZS10抑制BEL-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡的信号通路。方法采用有机合成的方法,合成ZS10;采用MTT法,分析在作用时间分别为24、48、72 h时,ZS10对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,计算IC 50;采用DAPI染色法,观察BEL-7402细胞状态;采用克隆形成法,观察BEL-7402细胞集落形成情况;采用流式细胞仪观察BEL-7402细胞周期阻滞情况和凋亡情况;采用Western blot法检测PI3K-AKT通路及相关蛋白表达水平。结果获得新型苦参碱衍生物ZS10,并进行了结构表征;MTT结果表明,ZS10作用于BEL-7402细胞48 h,IC 50为(6.62±1.11)μmol·L^(-1);DAPI染色结果表明,给药浓度升高,细胞核发生明显改变;克隆形成结果表明,ZS10明显抑制BEL-7402细胞的集落形成;流式细胞术结果表明,ZS10诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞S期。Western blot结果显示,ZS10在浓度为0~8μmol·L^(-1)时,对PI3K/AKT通路及其相关蛋白具有调节作用,并呈剂量依赖性。与对照组比较,给药组PI3K、AKT、p-AKT和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平均明显降低,促凋亡蛋白Bax表达水平均明显升高,周期蛋白Cyclin D1和CDK2表达水平均明显降低,迁移蛋白EGFR、N-cadherin、Vimentin表达降低,E-cadherin表达升高。结论ZS10对肝癌细胞BEL-7402的生长、增殖具有抑制作用。

17-羟-岩大戟内酯B对肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法将BEL-7402细胞分为空白对照组、HJB 10μg/mL组、20μg/mL组和40μg/mL组。采用MTT实验检测各组细胞存活率。采用流式细胞术检测HJB对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;AO/EB双染色法检测细胞凋亡形态的变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达的变化。结果HJB可呈浓度-时间依赖趋势抑制BEL-7402细胞增殖。不同浓度HJB作用24小时后,各HJB处理组主要表现出S期和G2/M期阻滞;早、晚期细胞凋亡率均明显增加(P<0.05或P<0.01)。随着HJB浓度的增加,晚期凋亡细胞数量逐渐增加,呈固缩或圆珠状。各HJB处理组Bcl-2的蛋白表达均明显下调,40μg/mL组细胞Bax的蛋白表达明显上调,此外,各组细胞Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。结论17-羟-岩大戟内酯B可以抑制肝癌BEL-7402细胞增殖,调控细胞周期并诱导其凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达有关。

脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法。方法:对比观察脂质体姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl2的影响。MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体姜黄素对Bel7402细胞增殖的抑制作用。原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体姜黄素诱导Bel7402细胞凋亡的作用。免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体姜黄素对Bax和Bcl2基因表达的影响。结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体姜黄素对Bel7402细胞增殖有显著抑制作用,P<0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P<0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P<0.05)。10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体姜黄素处理组Bel7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P<0.05)。脂质体姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义。结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用。脂质体姜黄素对Bax、Bcl2的表达无显著影响。

基因芯片分析筛选BEL-7402与BEL-7402/FU细胞中的差异miRNA表达基因

目的:探讨2种肝癌细胞BEL-7402细胞及BEL-7402/FU细胞中差异表达的miRNA并对其基因表达谱进行生物学信息分析。方法:采用TRIzol一步法提取BEL-7402细胞及BEL-7402/FU细胞的总RNA,并纯化mRNA,反转录合成荧光分子Hy3标记的cDNA探针,与基因芯片杂交;采用Genepix Pro 6.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号,然后以差异为2倍的标准来确定差异表达基因。结果:在333个基因表达谱的筛选中,发现有2个基因表达水平显著上调,331个基因表达水平显著下调。结论:miR-122,miR-195等基因组对表达肝癌细胞耐药基因表达谱有显著的影响,可能参与肝癌耐药的发生、发展。

蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤生长及肿瘤血管生成的影响

背景与目的:蜂毒素体外抗骨肉瘤、白血病及宫颈癌的研究已有报道。我们先前的实验发现蜂毒素能够抑制人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究拟探讨蜂毒素在裸小鼠体内的抗肝癌作用及其对肿瘤血管生成的影响。方法:建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水对照组(10ml/kg)、阳性对照组(沙利度胺,200mg/kg)、蜂毒素低剂量组(40μg/kg)、蜂毒素中剂量组(60μg/kg)和蜂毒素高剂量组(80μg/kg)。测量各组裸鼠肿瘤体积,观察蜂毒素的体内抗肿瘤作用。光镜下观察肿瘤组织及瘤内血管形态。采用免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)蛋白表达。应用实时荧光定量PCR法检测BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。结果:蜂毒素低、中、高剂量组裸鼠肿瘤相对体积(V/V0)分别为4.42±0.58、3.47±0.97和3.06±1.23,与生理盐水对照组(V/V0为9.06±1.45)相比,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小(P<0.01)。与生理盐水对照组MVD(16.50±2.35)比较,蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织MVD(11.33±1.86、9.17±1.17和6.67±1.21)明显降低(P<0.01)。显微镜下可见蜂毒素各剂量组肿瘤组织呈片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象。蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织VEGF(2.59±0.27、2.61±0.17和1.55±0.22)、bFGF(2.45±0.78、2.27±0.36和2.10±0.27)及NF-κB(2.79±0.29、2.71±0.66和2.26±0.56)阳性表达指数均低于生理盐水对照组(3.80±0.60、4.43±0.34和4.98±0.63)(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测显示,蜂毒素能够抑制BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。结论:蜂毒素能够明显抑制人肝癌BEL-7402细胞裸鼠移植瘤的生长,影响NF-κB表达、下调VEGF和bFGF的表达、抑制肝癌血管生成可能是其抗肿瘤作用的重要机理之一。

温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨温阳散结中药的抗肿瘤机制 ,研究温阳散结中药诱导BEL 740 2细胞凋亡作用。方法 :采用细胞形态学、原位末端标记和流式细胞技术 ,观察温阳散结中药对BEL 740 2细胞的影响。结果 :BEL 740 2细胞经中药处理后 ,光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变 ,TUNEL标记阳性 ,流式细胞仪分析DNA含量 ,在非凋亡细胞二倍体峰 (G1)之前细胞出现典型的凋亡细胞峰 (Ap峰 )。 0 0 0 5g·ml-1中药组和 0 0 1g·ml-1中药组发生凋亡的细胞数分别为 13 9%和 2 1 6 %。结论 :温阳散结中药可诱导BEL 740 2细胞发生凋亡 ,并有随浓度升高作用增强的趋势 ,实验结果表明 ,诱导肿瘤细胞凋亡可能是温阳散结中药治疗肝癌的作用机理之一。

高良姜素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的：研究高良姜素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法：MTT法测定BEL-7402细胞毒性及细胞生长，荧光显微镜观察细胞形态学的变化，流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果：高良姜素对BEL-7402细胞IC50为30．15mg／L，BEL．7402细胞生长曲线表明，高良姜素浓度增高，生长率明显下降。细胞凋亡可在20～80mg／L高良姜素处理后24h出现。凋亡细胞主要表现为核染色质固缩，荧光染色增强。高良姜素阻断细胞于G1期，线粒体膜电位降低。Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活，呈时间依赖性改变。高良姜素处理BEL-7402细胞6h时Caspase-9活性最高，而Caspase-6活性在12h达峰值，Caspase-3活性峰值时间在18h。结论：高良姜素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡，其途径可能是通过线粒体旁路。

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。

白花蛇舌草体外对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402抗肿瘤活性的研究

目的探讨白花蛇舌草在体外对肝癌多药耐药细胞Bell-7402生长活性的抑制作用.方法 MTT法检测白花蛇舌草提取物对Bel-7402生长的抑制作用,有无逆转Bel-7402的多药耐药性;用淋巴细胞转化实验检测白花蛇舌草提取物能刺激T淋巴细胞增殖,并筛选出药物的安全剂量范围;集落形成实验观察体外抗癌药物的敏感性.结果白花蛇舌草提取物对肝癌多药耐药细胞Bel-7402的生长具有明显的抑制作用,且这种作用是剂量依赖关系.结论白花蛇舌草提取物在体外对人肝癌多药耐药细胞Be1-7402有抑制作用.

根皮素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果根皮素对BEL-7402细胞IC50在89.23μg/mL。BEL-7402细胞生长曲线表明,根皮素浓度增高,生长率明显下降。细胞凋亡可在40-160μg/mL根皮素处理后24h出现。凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强。根皮素阻断细胞于G1期,线粒体膜电位降低。Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变。根皮素处理BEL-7402细胞12hCaspase-9活性最高,而Caspase-6活性在18h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24h后。结论根皮素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,途径可能是通过线粒体旁路。

柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度和细胞内VCR蓄积的影响

目的:测定中药柴胡(BupleurumChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌BEL-7402细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和长春新碱(Vincristine,VCR)浓度的影响,探索柴胡提取物逆转BEL-7402细胞多药耐药的机制。方法:以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计分别测定不同条件下的BEL7402细胞内[Ca2+]i。高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL-7402后细胞内VCR蓄积情况的变化。结果:柴胡提取物可使人肝癌细胞BEL-7402细胞内游离钙离子浓度下降(P<0.001),可使细胞内VCR浓度升高(P<0.01)。结论:柴胡提取物可以增加VCR在BEL7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL7402细胞的多药耐药(multidrugresistance,MDR)。钙离子通道阻滞作用可能为柴胡提取物逆转BEL7402细胞多药耐药的机制之一。

脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究

目的:探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基(Resibufogenin,RG)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养Bel-7402细胞,采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位(△ψm)变化;WesternBlot检测与细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果:RG显著抑制细胞增殖,其作用24、48、72h的IC50分别为3.8、1.8、1.2"mol/L;经10"mol/LRG处理24h后,癌细胞出现凋亡的形态变化,其凋亡率明显高于对照组细胞;RG引起△ψm下降,释放入胞质中的细胞色素c(cytochromec,CytC)增多,促进Caspase-3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡。结论:RG诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能通过线粒体通路实现。

大蒜素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的 探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。 方法 MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。 结果 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。 结论 大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。

胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响

目的了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响。方法12.5μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备。结果12.5μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变。扫描电镜结果显示BEL-7402细胞胞体体积缩小,与周围细胞群脱离,表面微绒毛卷曲、畸变、小球结构逐渐增多,细胞间连接逐渐断裂,细胞间隙增宽,有凋亡小体形成。透射电镜结果显示胡桃醌作用BEL-7402细胞24h后,细胞内质网扩大,线粒体结构疏松,胞核核仁裂解,凋亡小体形成。结论胡桃醌能有效改变人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构,诱导细胞凋亡。

雷氏大疣蛛蛛毒对人肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及其机制的研究

背景与目的蜘蛛毒素抗肿瘤的研究迄今还是未知领域。本研究探讨雷氏大疣蛛(Macrotheleraveni)蛛毒对BEL-7402细胞增殖的抑制作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定了雷氏大疣蛛蛛毒(10、20、40、80滋g/ml)对BEL-7402细胞增殖作用的影响;采用[3H]-TdR掺入法检测蛛毒加入前后BEL-7402细胞DNA的变化;利用流式细胞光度术(FCM)探讨雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞凋亡率和细胞周期的影响;利用Westernblot方法进一步检测雷氏大疣蛛蛛毒对细胞周期相关基因c-myc的变化。结果雷氏大疣蛛蛛毒对BEL-7402细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05),IC50为20滋g/ml,时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛蛛毒可以抑制BEL-7402细胞DNA的合成。流式细胞仪检测发现经过雷氏大疣蛛蛛毒作用下的BEL-7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期。Westernblot方法进一步检测表明雷氏大疣蛛蛛毒作用于BEL-7402细胞72h后,c-myc基因表达减弱。结论雷氏大疣蛛蛛毒就可以抑制人肝癌BEL-7402细胞的增殖和DNA的合成。其药理作用机制可能是除了诱导凋亡外,主要是使细胞周期相关基因c-myc表达减弱,导致细胞周期的变化。

重组人生长激素对人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响

背景与目的:在原发性肝癌患者围手术期应用重组人生长激素(recombinanthumangrowthhormone,rhGH),于改善患者状况同时是否会促进原有肿瘤生长、转移与复发,鲜见相关的研究报道。大多数原发性肝癌能表达生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR),本研究拟探讨rhGH对表达GHR的人肝癌细胞Bel-7402裸小鼠移植瘤生长的影响。方法:放射配体分析法证实肝癌细胞Bel-7402表达GHR后行裸鼠肝内移植,将32只肝内移植人肝癌细胞Bel-7402的裸小鼠随机分为4组:1组为对照组,实验组则根据rhGH剂量不同分为3组[即0.5u·(kg·d)-1、1.0u·(kg·d)-1、2.0u·(kg·d)-1]。在肝脏肿瘤移植术后2周开始动物皮下注射rhGH2周,实验结束处死动物,检查肿瘤情况;用抗增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)单克隆抗体免疫组化染色检测瘤组织PCNA表达情况。结果:移植瘤组织的重量与体积在rhGH1.0u·(kg·d)-1、2.0u·(kg·d)-1组与对照组之间比较有显著性差异(P<0.05),但0.5u·(kg·d)-1组与对照组无显著性差异(P>0.05)。各实验组肿瘤PCNA标记指数(labelingindex,LI)均高于对照组(P<0.05),各实验组之间相互比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。rhGH用药剂量与LI显著相关(r=0.779,P<0.001)。结论:rhGH能促进裸小鼠肝脏人肝癌细胞Bel-7402移植瘤的生长,其作用有随用药量增加而增强的趋势,两者之间存在一定相关性。