5-FU持续和间歇处理对Bel-7402肝癌细胞株的抑制作用

目的:评价体外5FU持续和间歇处理对Bel7402肝癌细胞株的生长抑制作用。方法:体外培养Bel7402肝癌细胞株,用一系列不同浓度的5FU对Bel7402肝癌细胞株分别进行每天24小时持续处理及2小时间歇处理,4天后进行MTT试验,检测肿瘤细胞的生长抑制率,对两组的IC50进行比较。结果:5FU处理浓度依次10.0μg/L、25.0μg/L、50.0μg/L、75.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L、500.0μg/L、750.0μg/L、1000.0μg/L、2500.0μg/L、5000.0μg/L、7500.0μg/L、10000.0μg/L、20000.0μg/L持续处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.34%、2.01%、7.21%、10.37%、18.64%、29.96%、35.06%、43.35%、50.66%、87.63%、93.63%、94.46%、99.27%、99.35%,IC50是991.7μg/L。5FU处理浓度依次120.0μg/L、300.0μg/L、600.0μg/L、900.0μg/L、1200.0μg/L、3000.0μg/L、6000.0μg/L、9000.0μg/L、12000.0μg/L、18000.0μg/L、60000.0μg/L、90000.0μg/L、120000.0μg/L、240000.0μg/L2小时间歇处理组的肿瘤细胞抑制率依次分别为1.32%、1.78%、2.01%、2.89%、3.57%、5.94%、8.30%、10.36%、15.25%、17.27%、25.95%、32.63%、43.66%、67.81%,IC50为146600μg/L,为持续处理组的1478倍。

低浓度5-Fu24-小时持续化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响

目的研究低浓度5-Fu24-小时持续化疗和高浓度5鄄Fu短时间化疗对BEL-7402肝癌细胞株的细胞周期的影响。方法用低浓度(1000.0μg/L)的5-Fu对BEL-7402肝癌细胞株进行持续24小时的培养(A组),用高浓度(50000.0μg/L)的5-Fu对BEL-l7402肝癌细胞株进行2小时培养(B组),在培养后的不同时间点用流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果A组结果显示:0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为25.23%、32.35%、39.28%、41.05%、46.02%、47.00%及47.14%。B组结果显示:0h、4h、8h、12h、16h、20h和24h的S期细胞的百分数分别为24.68%、68.43%、46.67%、43.67%、35.42%、33.22%及32.96%。结论5-Fu引起的S期细胞周期阻滞不但和浓度相关,也和作用时间相关。低浓度(1000.0μg/L)的5-Fu持续化疗较高浓度(50000.0μg/L)的5-Fu短时间(2小时)化疗更容易引起BEL-7402肝癌细胞株S期阻滞。

冬凌草甲素对肝癌Bel-7402/Sora细胞增殖、凋亡、细胞周期及PI3K/AKT信号通路的影响

[目的]探讨冬凌草甲素对人肝癌Bel-7402/Sora细胞增殖、凋亡、细胞周期及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路的影响。[方法]采用浓度梯度递增法建立Bel-7402/Sora耐药细胞株,以细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖抑制率并计算细胞耐药逆转指数,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各组细胞中PI3K、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的mRNA表达水平,免疫印迹法检测各组细胞中PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达水平。[结果]与空白对照组比较,终浓度为4、8、16、32、64μmol·L^(-1)的冬凌草甲素对Bel-7402/Sora细胞均有较好的抑制作用(P<0.05,P<0.01),且作用呈现浓度依赖性。冬凌草甲素对Bel-7402/Sora细胞耐药逆转指数为2.024。与空白对照组比较,冬凌草甲素组的早期、晚期和总凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.05);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组的早期总凋亡率均显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组的G2期细胞比例显著增加(P<0.01);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组G,期细胞比例增加,G2期细胞比例降低(P<0.01)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组PI3K、AKT、mTOR的mmRNA相对表达量均显著降低(P<0.01);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组PI3K、AKT、mTOR的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组PI3K、AKT、蛋白相对表达量均显著降低(P<0.01),mTOR蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组AKT、蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),PI3K、mTOR蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]冬凌草甲素能抑制Bel-7402/Sora细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻碍细胞周期进程,其机制可能与干预PI3K/AKT信号通路有关。

生长激素受体在Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株中的表达

目的了解Bel-7402与QGY-7701人肝癌细胞株生长激素受体(GHR)的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与RT鄄PCR法检测GHR在Bel鄄7402与QGY-7701肝癌细胞株的表达。结果7402肝癌细胞可表达GHRmRNA,在蛋白表达水平放射性配体法发现GHR在此肝癌细胞位点数量(Site,103/cell)为7.348±0.891,平衡解离常数为0.63±0.04583nmol/L;未发现7701肝癌细胞株表达GHR。结论7402肝癌细胞株表达GHR,可为将来研究rhGH与原发性肝癌的增殖关系奠定一些实验基础。

SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株生长激素受体的表达及意义

目的了解生长激素受体(GHR)在SMMC-7721与Bel-7402人肝癌细胞株的表达情况,以获得肝癌GHR在细胞水平上的定量表达。方法分别采用放射性配体分析与逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR法)检测GHR在SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞株的表达情况,使用双脱氧末端终止法进行基因测序。结果SMMC-7721与Bel-7402肝癌细胞均可表达GHRmRNA;在蛋白质表达水平发现GHR在7721肝癌细胞的位点数量(Site,103/cell)为3.462±0.632,平衡解离常数(Kd)为0.52±0.05942nmol/L;7402肝癌细胞位点数量为7.348±0.891,Kd为0.63±0.04583nmol/L。结论由于上述两种肝癌细胞株均可表达GHR,因此可为研究rhGH与肝细胞肝癌的生长关系奠定一定的实验基础。

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸I、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁,其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸I、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸I、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱,其次为黄连碱、马兜铃酸I和茄次碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

合成紫花茄皂甙诱导人肝癌细胞株Bel-7402凋亡的作用机制

背景与目的:紫花茄(SolanumindicumL.)是一种有抗炎和治疗跌打损伤作用的传统中草药,含有丰富的结构独特的薯蓣皂甙,即紫花茄皂甙。我们的研究结果已证实,数种合成紫花茄皂甙有强抗肿瘤效果。本研究探讨合成紫花茄皂甙Ⅰ("-D-木吡喃糖基-(1→3)-[#-L-鼠李吡喃糖基-(1→2)]-"-D-半乳吡喃糖基薯蓣苷)的抗肿瘤机制。方法:以不同浓度紫花茄皂甙处理人肝癌细胞Bel-7402后,用酸性磷酸酶(acidphosphataseassay,APA)法测定增殖抑制率和IC50。用结晶紫染色显微镜观察细胞的形态学变化。用蛋白免疫印迹法检测凋亡过程中相关蛋白的变化。结果:紫花茄皂甙对Bel-7402细胞有明显的增殖抑制作用,在皂甙Ⅰ作用72h后的IC50为4.20μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度降低,胞质中出现膜泡等形态学变化。蛋白免疫印迹检测结果显示,紫花茄皂甙Ⅰ作用后细胞质中的细胞色素c含量明显增加,Caspase-3被激活,细胞内的poly(ADR-ribose)polymerase(PARP)蛋白被剪切。结论:紫花茄皂甙对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,且通过线粒体依赖性通路诱导肿瘤细胞凋亡。

温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402凋亡的作用

目的研究温化胶囊对Bel-7402人肝癌细胞株凋亡的影响。方法对人肝癌细胞株Bel-7402进行体外细胞培养,分设阴性对照组、低剂量温化胶囊组(150μg/m L)及高剂量温化胶囊组(750μg/m L),每组设置5个平行实验。使用流式细胞仪分析温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402凋亡的影响。结果与阴性对照组相比较,高剂量温化胶囊组能够提高Bel-7402细胞的凋亡率[(9.620±0.593)%vs(5.520±1.270)%],差异有统计学意义(P<0.05)。同时,高剂量温化胶囊组与阴性对照组相比,S期细胞比例[(31.92±2.19)%vs(24.90±1.16)%]增加(P<0.05)。结论温化胶囊具有诱导Bel-7402人肝癌细胞株凋亡的作用并引起细胞周期的改变。

肝癌细胞株Bel-7402中侧群细胞的分离和致瘤能力

【目的】分选肝癌Bel-7402细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。【方法】采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将Bel-7402细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2亚群。实验分组:SP组与NSP组。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;RT-PCR法检测SP细胞和NSP细胞的CD133、三磷酸腺苷结合盒转动蛋白G2(ABCG2)表达;流式细胞术分析细胞凋亡率;无血清培养法检测SP细胞及NSP细胞成球率;非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性。【结果】Bel-7402细胞中分选出的SP细胞比例为(2.4±0.0)%。生长曲线表明SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(P<0.05)。SP、NSP细胞的克隆形成率分别为(20.5±2.6)%、(5.1±0.9)%,两者差异明显(P<0.05)。SP细胞ABCG2 mRNA和CD133 mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的3.03倍(P<0.01)和1.98倍(P<0.01)。SP细胞凋亡率为(0.89±0.23)%,低于NSP细胞(P<0.05)。在无血清培养基中,SP细胞成球率为(14.1±1.9)%,高于NSP细胞(P<0.05)。1×103、104、105数量的SP细胞形成皮下移植瘤(P>0.05,P<0.05,P<0.05),而1×105NSP细胞则还不能成瘤。【结论】肝癌Bel-7402细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞。

芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响

研究芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响。方法:采用人肝癌细胞株Bel-7402和细胞药理学方法,对比观察3种措施(阴性无药对照、阳性阿霉素对照及芍药甙)对Bel-7402细胞增殖的影响。结果:芍药甙(2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml)对Bel-7402细胞增殖均有显著性抑制作用(均P<0.01),其抑制率分别为33.78％、22.22％和11.56％,增殖抑制作用随药物浓度增高而加强,呈显著的量效关系。结论:芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖有一定的抑制作用。

黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞株的抑制作用

目的研究黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌BEL-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞具有促进凋亡作用,并且上调p53基因表达。结论黄芪总苷可抑制肝癌BEL-7402的增殖,其抑制肝癌BEL-7402作用与其促进肿瘤细胞凋亡、上调p53基因表达有关。

人肝癌细胞株HepG2和BEL-7402对放射敏感性的体外实验研究

目的 采用体外实验方法探讨人肝癌细胞株HepG 2和BEL -740 2对放射的敏感性。方法 对人肝癌细胞株HepG2和BEL -740 2进行体外培养 ,应用集落形成法和MTT法测定 6MVX线不同剂量照射后细胞的存活率 ,计算 2株细胞放射敏感性参数 (D0 )。结果 HepG 2的D0 值为 1.5 ,SF2 为 (0 .45± 0 .0 5 ) ;BEL -740 2的D0 值为 1.6,SF2 为 (0 .63± 0 .0 5 )。MTT法与集落形成法相关性较好 (γ =0 .946,P <0 .0 5 )。结论 HepG2具有较高的放射敏感性 ,BEL -740 2的放射敏感性较低 ;MTT法可替代集落形成法作细胞放射敏感性的快速测定。

17-羟-岩大戟内酯B对肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人肝癌BEL-7402细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法将BEL-7402细胞分为空白对照组、HJB 10μg/mL组、20μg/mL组和40μg/mL组。采用MTT实验检测各组细胞存活率。采用流式细胞术检测HJB对BEL-7402细胞周期和凋亡的影响;AO/EB双染色法检测细胞凋亡形态的变化;Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达的变化。结果HJB可呈浓度-时间依赖趋势抑制BEL-7402细胞增殖。不同浓度HJB作用24小时后,各HJB处理组主要表现出S期和G2/M期阻滞;早、晚期细胞凋亡率均明显增加(P<0.05或P<0.01)。随着HJB浓度的增加,晚期凋亡细胞数量逐渐增加,呈固缩或圆珠状。各HJB处理组Bcl-2的蛋白表达均明显下调,40μg/mL组细胞Bax的蛋白表达明显上调,此外,各组细胞Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。结论17-羟-岩大戟内酯B可以抑制肝癌BEL-7402细胞增殖,调控细胞周期并诱导其凋亡,其分子机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax、Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3蛋白表达有关。

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制

目的：探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制。方法：用血清药理学方法，把含不同浓度蟾酥胶囊的血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞，分别孵育24、48h，显微镜下观察细胞形态学改变；MTT比色检测细胞的存活率；流式细胞仪检测细胞的凋亡率；琼脂糖凝胶电泳测定DNA条带；免疫细胞化学显色检测Bcl-2蛋白的表达。结果：实验组部分细胞凋亡，形态学改变；细胞存活率降低，增殖受到抑制；流式细胞仪检测，可见凋亡峰；孵育48h，琼脂糖凝胶电泳呈梯状条带（DNALadder）；免疫细胞化学检测，Bcl-2表达明显降低。结论：蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞BEL-7402株凋亡的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

卵圆细胞标志分子在肝癌细胞株BEL-7402中的表达及其意义

目的探讨肝癌细胞株BEL-7402的发生与卵圆细胞之间的分子关联及诱导分化前后的变化特征。方法应用免疫细胞化学和酶细胞化学技术检测卵圆细胞的多种标志分子CK7、CK8、CK18、CK19、AFP及GGT在人肝癌细胞株BEL-7402中的表达状态,并观察BEL-7402诱导分化前后各种标志分子的表达变化特征。结果 BEL-7402中CK7、CK8、CK18、AFP及GGT表达阳性,CK19表达阴性,与卵圆细胞向肝细胞分化早期阶段的分子表达谱相似。BEL-7402诱导分化前后各分子标记物及GGT酶活性的表达无明显改变。结论 BEL-7402与卵圆细胞在分子表达谱上有高度相似性,提示肝细胞癌的发生与卵圆细胞之间存在重要关联。在诱导分化过程中,BEL-7402标志分子表达水平的变化要晚于其在细胞周期方面的变化。

大蒜素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的 探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。 方法 MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。 结果 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。 结论 大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。