肉苁蓉苯乙醇总苷对Bel-7405肝癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)对Bel-7405肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法以不同浓度CPhGs干预Bel-7405肝癌细胞后,计算其IC_(50),根据IC_(50)设置后续实验干预浓度分别为0、35、70和140μg/ml,采用MTT与划痕实验检测CPhGs对Bel-7405肝癌细胞活性及增殖情况、Annexin V-FITC/PI、Hochest33258及线粒体染色检测细胞凋亡变化,Western blot检测Pro-PARP、cleaved-PARP、Pro-Caspase-9、cleaved-Caspase-9及Cleaved-Caspase-3等凋亡蛋白表达情况。结果CPhGs对Bel-7405肝癌细胞的IC_(50)为298μg/ml,随着CPhGs浓度增加,Bel-7405细胞增殖抑制作用逐渐增强(P<0.01);细胞在24 h及48 h迁移率随CPhGs剂量的增加而减少(P<0.01);CPhGs各剂量组均可诱导Bel-7405肝癌细胞凋亡,且有一定的剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。Hoechst33258及线粒体染色发现,CPhGs各剂量组均可诱导细胞凋亡;凋亡相关蛋白Pro-PARP、Cleaved-PARP、Pro-Caspase-3、Cleaved-Caspase-3、Pro-Caspase-9及Cleaved-Caspase-9表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CPhGs对Bel-7405肝癌细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关,但其具体细胞凋亡机制还需进一步探讨。

冬凌草甲素对肝癌Bel-7402/Sora细胞增殖、凋亡、细胞周期及PI3K/AKT信号通路的影响

[目的]探讨冬凌草甲素对人肝癌Bel-7402/Sora细胞增殖、凋亡、细胞周期及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路的影响。[方法]采用浓度梯度递增法建立Bel-7402/Sora耐药细胞株,以细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖抑制率并计算细胞耐药逆转指数,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各组细胞中PI3K、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的mRNA表达水平,免疫印迹法检测各组细胞中PI3K、AKT、mTOR的蛋白表达水平。[结果]与空白对照组比较,终浓度为4、8、16、32、64μmol·L^(-1)的冬凌草甲素对Bel-7402/Sora细胞均有较好的抑制作用(P<0.05,P<0.01),且作用呈现浓度依赖性。冬凌草甲素对Bel-7402/Sora细胞耐药逆转指数为2.024。与空白对照组比较,冬凌草甲素组的早期、晚期和总凋亡率均显著升高(P<0.01,P<0.05);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组的早期总凋亡率均显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组的G2期细胞比例显著增加(P<0.01);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组G,期细胞比例增加,G2期细胞比例降低(P<0.01)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组PI3K、AKT、mTOR的mmRNA相对表达量均显著降低(P<0.01);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组PI3K、AKT、mTOR的mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01)。与空白对照组比较,冬凌草甲素组PI3K、AKT、蛋白相对表达量均显著降低(P<0.01),mTOR蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与冬凌草甲素组比较,冬凌草甲素+索拉非尼组AKT、蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),PI3K、mTOR蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]冬凌草甲素能抑制Bel-7402/Sora细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻碍细胞周期进程,其机制可能与干预PI3K/AKT信号通路有关。

大蒜素诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的 探讨大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡作用。 方法 MTT法检测大蒜素对BEL 740 2细胞的生长抑制作用 ,光镜、电镜、流式细胞术观察大蒜素诱导BLE 740 2细胞凋亡作用。 结果 10、2 0、40ml L大蒜素皆能抑制BEL 740 2细胞生长 ,其抑制作用与剂量、作用时间呈正相关。 6 0mg L大蒜素作用 3h ,BEL 740 2细胞出现典型凋亡形态学变化 :细胞体积缩小 ,微绒毛消失 ,染色质浓聚、边集、裂解 ,细胞表面凸起多个小泡或小球状小体 ,凋亡细胞拒染台盼蓝等。台盼蓝染色计数对照组凋亡率 2 0 2± 0 37% ,诱导组凋亡率 78 48± 3 15 % ;流式细胞分析对照组凋亡率 1 78± 0 48% ,诱导组凋亡率 74 0 7± 3 94% ,对照组诱导前时G0 /G1 、S、G2 /M期细胞分别为47 6 6± 2 72 % ,2 2 0 6± 2 0 4% ,30 2 5± 3 78% ,皆低于 74 0 7± 3 94%。 结论 大蒜素诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡 ,其诱导凋亡效果明显 ,并推测大蒜素诱导BEL 740

虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。

两种儿茶素成分体外逆转人肝癌细胞BEL-7404/ADR多药耐药性

背景与目的:儿茶素具有多种抗肿瘤的活性,目前,国内外尚未见儿茶素用于肝癌多药耐药性的研究。本研究拟探讨两种儿茶素成分表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制。方法:MTT法检测ECG、EGCG的细胞毒作用;荧光分光光度法检测细胞内化疗药物的含量;RT-PCR法检测mdr1基因的表达。结果:ECG和EGCG在100mg/L以下剂量时对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADR的抑制率均小于10%,60mg/L的ECG和14mg/L的EGCG分别与0.8mg/L的阿霉素(adriamycin,ADM)合用能使ADM对BEL-7404/ADR的IC50由36mg/L分别下降至2.3mg/L和1.9mg/L,增敏倍数分别为15.8倍和19.2倍,联合用药可使细胞内ADM的浓度由(0.76±0.02)μg/108cells～(2.55±0.17)μg/108cells提高到(2.04±0.07)μg/108cells～(9.28±0.59)μg/108cells(P<0.01),并使mdr1表达与对照组相比分别下降了27.6%及41.3%,逆转肿瘤MDR作用以EGCG为强。结论:EGCG和ECG具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1表达、增加细胞内化疗药物的积累有关。

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL 74 0 4细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL 74 0 4细胞 ,通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL 74 0 4细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化 ,凝胶电泳可见细胞DNA有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL 74 0

脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究

目的:探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基(Resibufogenin,RG)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养Bel-7402细胞,采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位(△ψm)变化;WesternBlot检测与细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果:RG显著抑制细胞增殖,其作用24、48、72h的IC50分别为3.8、1.8、1.2"mol/L;经10"mol/LRG处理24h后,癌细胞出现凋亡的形态变化,其凋亡率明显高于对照组细胞;RG引起△ψm下降,释放入胞质中的细胞色素c(cytochromec,CytC)增多,促进Caspase-3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡。结论:RG诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能通过线粒体通路实现。

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。

白藜芦醇对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其效应机制分析

目的通过体内体外实验,观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对肝癌细胞Bel-7402的增殖抑制作用,并对其抑癌的可能效应机制进行分析。方法实验中设4个Res药物组,终浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L,同时设置不含Res药物的对照组,采用MTT法测试Res对体外培养肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制作用,反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA的表达,Western Blot检测Bcl-2蛋白的表达,ELISA测定Res对荷瘤小鼠细胞因子水平的影响。结果与对照组相比,Res可以呈剂量和时间依赖性方式抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖和Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。同时Res能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并能明显升高荷瘤小鼠体内细胞因子IL-2、IL-6、IL-12和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 Res体内与体外对肝癌细胞Bel-7402均有明显的增殖抑制活性,其抗肿瘤的效应机制可能与其下调Bcl-2的表达和提高细胞因子IL-2、IL-6、IL-12及TNF-α的水平有关。

肝癌细胞株Bel-7402中侧群细胞的分离和致瘤能力

【目的】分选肝癌Bel-7402细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。【方法】采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将Bel-7402细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2亚群。实验分组:SP组与NSP组。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;RT-PCR法检测SP细胞和NSP细胞的CD133、三磷酸腺苷结合盒转动蛋白G2(ABCG2)表达;流式细胞术分析细胞凋亡率;无血清培养法检测SP细胞及NSP细胞成球率;非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性。【结果】Bel-7402细胞中分选出的SP细胞比例为(2.4±0.0)%。生长曲线表明SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(P<0.05)。SP、NSP细胞的克隆形成率分别为(20.5±2.6)%、(5.1±0.9)%,两者差异明显(P<0.05)。SP细胞ABCG2 mRNA和CD133 mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的3.03倍(P<0.01)和1.98倍(P<0.01)。SP细胞凋亡率为(0.89±0.23)%,低于NSP细胞(P<0.05)。在无血清培养基中,SP细胞成球率为(14.1±1.9)%,高于NSP细胞(P<0.05)。1×103、104、105数量的SP细胞形成皮下移植瘤(P>0.05,P<0.05,P<0.05),而1×105NSP细胞则还不能成瘤。【结论】肝癌Bel-7402细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞。

益气活血软坚解毒含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞的凋亡

目的:研究益气活血软坚解毒(YHRJ)含药血清对人肝癌细胞系Bel-7402生长抑制及诱导凋亡作用.方法:将YHRJ含药血清作用于人肝癌细胞系Bel-7402细胞,应用MTT检测对肝癌细胞生长抑制作用,倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等影像学方法观察细胞形态学变化,以及PI染色单染、AnnexinV-PI双染后,流式细胞术检测对细胞周期影响及诱导细胞凋亡程度.结果:MTT法检测结果显示:YHRJ含药血清具有抑制Bel-7402肿瘤细胞生长作用(其中20%YHRJ等效剂量抑制率49.1%,与NS比,P<0.01);荧光显微镜及激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡形态学变化.流式细胞术检测结果,细胞周期出现G0/G1期阻滞,并出现典型的凋亡峰,AnnexinV-PI双染法检测到早期及中晚期细胞凋亡.结论:YHRJ含药血清有抑制人肝癌细胞系Bel-7402细胞生长并有诱导细胞凋亡作用.

温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402凋亡的作用

目的研究温化胶囊对Bel-7402人肝癌细胞株凋亡的影响。方法对人肝癌细胞株Bel-7402进行体外细胞培养,分设阴性对照组、低剂量温化胶囊组(150μg/m L)及高剂量温化胶囊组(750μg/m L),每组设置5个平行实验。使用流式细胞仪分析温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402凋亡的影响。结果与阴性对照组相比较,高剂量温化胶囊组能够提高Bel-7402细胞的凋亡率[(9.620±0.593)%vs(5.520±1.270)%],差异有统计学意义(P<0.05)。同时,高剂量温化胶囊组与阴性对照组相比,S期细胞比例[(31.92±2.19)%vs(24.90±1.16)%]增加(P<0.05)。结论温化胶囊具有诱导Bel-7402人肝癌细胞株凋亡的作用并引起细胞周期的改变。

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的 :板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL 740 4/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法 :MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用 ;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白 (P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果 :耐药肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性 ,耐药细胞P gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞 (P <0 .0 1) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时 ,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论 :肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性 ,其多药耐药性与P gp和MRP过量表达有关 ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gp药物外排功能。

黄芪多糖协同顺铂对BEL-7404人肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨黄芪多糖对人肝癌细胞BEL- 740 4细胞株细胞周期的影响及与顺铂联合使用,对BEL- 740 4肝癌细胞的杀伤作用。方法 通过四氮甲唑蓝(MTT )实验检测细胞的增殖抑制率,以观察黄芪多糖对肝癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 黄芪多糖可抑制肝癌BEL- 740 4细胞的生长、增殖;与顺铂联合应用对BEL 740 4肝癌细胞杀伤作用强于2种药物单独使用。黄芪多糖处理后的BEL- 740 4细胞出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,将细胞周期阻滞于G1期。结论 黄芪多糖对肝癌BEL -740 4细胞有杀伤作用;黄芪多糖与顺铂联合使用具有协同抗肿瘤作用。

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸I、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁,其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸I、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸I、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱,其次为黄连碱、马兜铃酸I和茄次碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V-FITC&PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明:OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC50分别为65ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化:细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V-FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现:OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明:OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。

荧光素酶标记的BEL-7405细胞体内外成像及肿瘤动物模型建立

目的筛选表达荧光素酶(luciferase)基因的人单克隆肝癌细胞系,用活体成像技术(bioluminescentimaging)在细胞及整体动物水平检测其发光能力,为监测肿瘤生长和转移建立一种新的肿瘤动物模型。方法构建表达荧光素酶基因的真核表达载体并将其转入肝癌细胞(BEL-7405),用G418筛选稳定表达荧光素酶的单细胞克隆,在体外用活体成像技术评价其稳定发光能力。BALB/c nu/nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体内观察肿瘤的生长及转移情况。结果在肝癌细胞中获得稳定表达荧光素酶的克隆,利用活体成像技术可检测到细胞克隆发光。将稳定表达荧光素酶的克隆皮下接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长过程,肿瘤发光随着观察时间的延长而增强,但是没有观察到肿瘤转移的现象。结论本研究筛选得到了稳定表达荧光素酶的肿瘤单克隆细胞系,结合活体成像技术,建立了一套新的能够用于活体内监测肿瘤生长的研究方法。

川芎嗪对人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR多柔比星蓄积的影响

目的考察中药川芎有效成分川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR中多柔比星(DXR)蓄积的影响。方法将人肝癌细胞耐药株Bel-7402/DXR及其亲本细胞Bel-7402分为6组:亲本空白对照组(Parental)、耐药空白对照组(Resistance)、亲本多柔比星组(Parental+DXR)、耐药多柔比星组(Resistance+DXR)、TMP组(Resistance+DXR+TMP)、维拉帕米(VRP)阳性对照组(Resistance+DXR+VRP),荧光显微镜下观察细胞内DXR荧光强度,流式细胞术检测细胞内DXR的平均荧光强度。结果荧光显微镜结果显示,(Resistance+DXR)组、TMP组、VRP组,其细胞内DXR荧光强度分别占Parental+DXR组的(50.03±6.01)%、(119.34±5.4)%、(169.25±21.0)%;流式细胞术结果显示:Resistance+DXR组、TMP组、VRP组细胞内DXR平均荧光强度分别为Parental+DXR组的(82.08±6.98)%、(134.43±39.5)%、(262.74±47.18)%。结论TMP可使人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR中抗癌药多柔比星的蓄积增加,其机制可能与逆转P-gp对药物的外排功能有关。