TNFα-在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机理研究

目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型,运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗,检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平,肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD1小鼠叶酸诱导肾病模型中,尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞坏死和凋亡增加,小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平显著升高,肾皮质组织中Bcl-xL表达水平显著下降,运用抗TNF-α多克隆抗体干预治疗可保持Bcl-xL在肾组织中的表达水平,减少肾小管上皮细胞凋亡,有效减轻小鼠肾功能损害。结论TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病发病机制中具有重要作用,阻断TNF-α是治疗急性肾衰的一种潜在有效手段。

文拉法辛对抑郁模型大鼠心肌Bcl-xLmRNA和BaxmRNA表达的影响

目的探讨抑郁模型大鼠心肌组织中Bcl-xLmRNA和BaxmRNA基因表达的变化及抗抑郁药文拉法辛对其的影响。方法选择48只SD大鼠,随机分为3组,即对照组,抑郁组,药物组,每组16只。采用慢性轻度不可预见性的应激结合孤养制备抑郁模型。抑郁组及药物组大鼠共接受21d各种不同的应激。刺激同时药物组灌胃给药,抑郁组蒸馏水灌胃。采用敞箱实验和糖水消耗实验观察大鼠行为改变。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织凋亡相关基因BaxmRNA和Bcl-xLmRNA表达情况。结果应激后,抑郁组敞箱实验得分和糖水消耗量[分别为（34.5±14.9）分、（9.8±4.6）分、（5.6±1.7）g]与对照组[分别为（69.1±21.3）分、（19.2±5.4）分、（9.4±1.4）g]比较明显降低（P〈0.01）;与抑郁组比较,文拉法辛能增加抑郁大鼠敞箱实验得分和糖水消耗量[分别为（68.9±17.6）分、（17.8±4.7）分、（8.7±1.2）g,P〈0.01]。抑郁组与对照组比较,抑郁组心肌组织BaxmRNA基因表达明显升高（P〈0.05）,Bcl-xLmRNA基因表达明显降低（P〈0.01）;与抑郁组比较,文拉法辛可降低抑郁模型大鼠心肌组织BaxmRNA基因表达,升高Bcl-xLmRNA基因表达（P〈0.05）。结论抑郁模型大鼠心肌组织BaxmRNA基因表达升高,Bcl-xLmRNA基因表达降低,而文拉法辛不仅可显著改善抑郁模型大鼠的异常行为,并对心肌组织Bax mRNA和Bcl-xLmRNA基因表达具有干预作用。

MiR-122下调Bcl-2蛋白家族增强BEL-7402/FU细胞对氟尿嘧啶的敏感性

目的:探讨MiRNA-122对肝癌耐药细胞株BEL-7402/氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)的FU敏感性的影响及其作用机制。方法:构建miR-122及其阴性对照空载体并稳定转染至BEL-7402/FU细胞中,Western免疫印迹检测miR-122转染组(n=3)、阴性空载体转染组(n=3)和未转染组(n=3)中与耐药相关的Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达水平。用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)]法检测三组细胞对FU敏感性。结果:与未转染组、阴性空载体转染组比较,miR-122转染组Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达明显降低(P<0.05)。MTT结果显示:在不同浓度FU处理下,miR-122转染组的细胞抑制率较未转染组和阴性空载体转染组高(P<0.05)。结论:miR-122能特异性地下调Bcl-2和Bcl-XL表达,可增加BEL-7402/FU细胞对FU敏感性。

脑缺血预处理诱导海马CA1区神经元Bad磷酸化及其蛋白表达的变化

目的： 观察大鼠脑缺血预处理（CIP）后不同时间点海马CA1区胞质及线粒体中Bcl-xl/Bcl-2相关死亡促进因子（Bad）和p-Bad蛋白水平变化,探讨其在缺血耐受机制中的作用.方法： 采用SD大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,利用焦油紫染色、免疫印迹法检测神经元的损伤及蛋白表达.结果： 焦油紫染色显示,脑缺血再灌注（I/R）3d,CA1区神经元大量损伤,与I/R组相比,CIP组CA1区存活的神经元增加;免疫印迹结果显示,CIP组胞质中Bad磷酸化水平于再灌注3h和3d出现高峰,而其蛋白表达无明显变化;与I/R对应时间点相比,CIP后再灌注3h和3d p-Bad升高.CIP后线粒体中p-Bad在再灌注不同时间点无明显变化,而其蛋白表达在再灌注后期（6h～3d）逐渐下降.结论： 脑缺血预处理可有效减轻海马CA1区神经元损伤;同时诱导神经元胞质中p-Bad蛋白水平升高,线粒体Bad蛋白表达降低.脑缺血预处理后Bad线粒体转位的降低可能是缺血耐受的重要机制.

经PBEF/Caspase-3通路研究妇炎舒胶囊治疗盆腔炎性疾病模型大鼠的作用机制

目的观察临床上已取得明显疗效的妇炎舒胶囊对盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease,PID)模型大鼠子宫组织中细胞凋亡相关因子的含量及表达影响,探讨妇炎舒胶囊治疗PID的作用机制。方法选取42只8周龄SPF级雌性大鼠,采用混合菌液注射+机械损伤法建造PID大鼠模型,结合大鼠子宫炎症病理改变评分进行造模验证。给予妇炎舒胶囊高、中、低剂量、康妇炎胶囊、头孢克肟胶囊连续治疗14 d后,HE染色观察大鼠的子宫病理切片,运用聚合酶链反应(RT-PCR)检测子宫组织前B细胞克隆增强因子(pre-B-cell colony-enhancing factor,PBEF)mRNA的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测子宫组织中B淋巴细胞瘤-xl(B cell lymphoma-xl,Bcl-xl)、半胱氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate-specific protease 3,Caspase-3)、PBEF等因子的含量变化。结果(1)与空白组相比,模型组大鼠子宫炎症病理评分显著升高(P<0.05),子宫组织切片镜下见大量中性粒细胞浸润,子宫组织中Bcl-xl、PBEF浓度升高(P<0.01),Caspase-3浓度降低(P<0.05),提示造模成功,盆腔炎性疾病的发病机制可能与细胞凋亡相关;(2)与模型组相比,妇炎舒高剂量组子宫组织中Bcl-xl、PBEF浓度降低(P<0.05),Caspase-3浓度升高(P<0.05);(3)相关性分析:PBEF的表达与Caspase-3的表达呈负相关,相关性系数=-0.364(P<0.05)。结论PID模型大鼠的发病机制可能与细胞凋亡机制相关,妇炎舒胶囊可通过降低PBEF表达,同时下调Bcl-xL蛋白的表达水平,进而上调Caspase-3表达,调节炎性细胞凋亡,最终达到治疗PID的作用机制。

雷帕霉素介导丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞的影响

目的:探讨雷帕霉素介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对肝癌细胞Bcl-2、Bcl-xl及Bax蛋白表达的影响。方法:将人肝癌细胞BEL-7402细胞分为对照组和雷帕霉素处理组(20、50、100 ng/mL),观察各组BEL-7402细胞的形态变化、细胞增殖抑制率、凋亡及蛋白(MAPK、Bcl-2、Bcl-xl及Bax)表达。结果:随着雷帕霉素浓度的升高,BEL-7402细胞呈现崩解和坏死;对照组BEL-7402细胞增殖抑制率最低,雷帕霉素干预组BEL-7402细胞增殖抑制率高于对照组,随着时间及雷帕霉素浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐升高;雷帕霉素处理组与对照组相比差异有统计学意义;随着浓度的升高,BEL-7402细胞凋亡率升高;对照组BEL-7402细胞中MAPK阳性表达率高于雷帕霉素处理组,雷帕霉素处理组随着浓度升高,MAPK阳性表达率不断降低;对照组BEL-7402细胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白升高,与雷帕霉素处理组比较存在显著差异,雷帕霉素处理组Bcl-2、Bcl-xl蛋白水平随着雷帕霉素的浓度升高而降低,Bax表达水平随着雷帕霉素的浓度升高而增加。结论:雷帕霉素能够抑制肝癌细胞增殖,加快坏死及破裂,随着雷帕霉素的浓度升高,凋亡程度增大,其作用机制可能与抑制MAPK、Bcl-2、Bcl-xl表达,促进Bax水平升高有关。

bcl-xL在姜黄素诱导K562细胞凋亡中的作用及机制

目的:探讨bcl-xL基因在姜黄素诱导K562细胞凋亡过程前后的表达情况及其作用机制。方法:不同浓度的姜黄素作用于K562细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析姜黄素作用前后胃癌细胞中bcl-xL的表达。结果:姜黄素能显著抑制体外培养的K562细胞生长并呈量效和时效关系。流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加。RT-PCR和Western blot结果提示经姜黄素作用后,bcl-xL表达下降。结论:姜黄素能抑制K562细胞的生长并促进其凋亡,其发生与bcl-xL有关。