梨形环棱螺11个地理种群的几何形态学分析

为了摸清国内梨形环棱螺的种质资源现状,提供下一步选择育种的优质种质资源材料。通过采集江苏、安徽、上海、山东、湖南、广西、江西、贵州、湖北、浙江、广东典型分布省份的249个野生样本,对不同群体的每个个体自壳顶开始顺时针设置24个地标点,并在第11~12、12~13、13~14、14~15、15~11、15~16个地标点之间等距设置15个半地标点。基于地标点和半地标点设置结果进行普氏叠印,并删除超过上四分位的异常值。采用薄板样条曲线法进行缺失值检查,并利用主成分分析对形态学变异进行分析。对不同地理群体的普氏距离进行方差分析并根据不同群体之间的普氏距离进行聚类分析。梨形环棱螺11个地理种群外部形态的主要变异位置是壳顶及螺口上缘。不同地理种群形态特征变异的集中性较差,第1主成分和第2主成分不能显著区别区分不同的群体。11个群体大致可以划分为长江流域群体和长江以南群体两大类。不同群体的外形特征存在显著差异,这种外形差异可能与当地的生境有关。

梨形环棱螺11个地理种群遗传多样性和遗传分化

为了解国内梨形环棱螺(Bellamya purificata)群体的遗传特征,利用7对微卫星引物对山东微山湖、江苏高邮湖、上海明珠湖、浙江淳安、安徽黄陂湖、湖北长湖、江西仙女湖、湖南耒水、贵州夜郎湖、广西千亩湖、广东榕江11个群体的遗传多样性和遗传结构进行了分析。结果显示:观察杂合度(Ho)为0.434~0.674,期望杂合度(He)为0.772~0.905,多态性信息含量(PIC)为0.756~0.885,这11个群体的遗传多样性均较高。遗传变异中有94.84%来自群体内,5.16%的遗传变异来自群体间,群体间的遗传分化程度较低(F_(st)=0.052)。浙江淳安群体和江苏高邮湖遗传距离最远。

铜对梨形环棱螺抗氧化酶活性和金属硫蛋白含量的影响

本实验采用暴露重金属的方法,研究了不同浓度硫酸铜(Cu2+分别为0、0.005、0.01、0.02、0.05mg/L)在不同暴露时间(0—14d)下对梨形环棱螺(Bellamya purificata)过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活性、还原性谷胱甘肽(GSH)和金属硫蛋白(MT)含量的影响,以探讨Cu2+对梨形环棱螺的氧化损伤及其防御作用的机理,并为水环境Cu2+污染的早期诊断及生态风险评价提供科学的依据。结果表明:Cu2+对梨形环棱螺肝脏和鳃中CAT、SOD、GST、GSH和MT均有明显影响,表现出时间剂量效应。SOD在前4天、CAT在前3天酶活性总体上表现出诱导趋势,GST在前4天酶活性处于诱导状态,随着暴露时间的延长,酶活性下降,到第5天时表现出抑制趋势;随着时间的进一步增长,至14d时,0.005mg/L剂量组酶活性维持在正常值附近波动,0.01mg/L剂量组酶活性被诱导,0.02mg/L剂量组酶活性在肝脏中表现为诱导而在鳃中则被抑制,0.05mg/L剂量组酶活性被抑制。肝脏和鳃GSH含量的变化与GST相似,在短时间内表现出诱导效应,肝脏GSH在暴露的前5天、鳃GSH在暴露的前4天均处于诱导状态,随着暴露时间的延长,0.005mg/L剂量组表现出诱导,0.05mg/L剂量组则受到抑制。MT在整个实验期间均处于诱导状态,各剂量组在0.5d被极显著诱导,随后MT含量出现起伏波动,有上升和下降,至第14天时达到一稳定水平。其中,0.01mg/L剂量组肝脏的MT在整个实验期间均被极显著地诱导(p<0.01),0.01mg/L剂量组的鳃组织MT除第10天外也被极显著诱导(p<0.01)。在暴露14d时,除0.05mg/L剂量组的肝脏MT外,其余处于极显著诱导状态(p<0.01)。

多孔混凝土综合生态效应的试验研究

通过模拟实际封闭水域的室内水质净化装置,研究了水体生物与多孔混凝土的生态适应性以及形成的综合生态效应对水质的净化效果.多孔混凝土综合生态效应的水质净化效果可通过总磷(TP)、总氮(TN)、高锰酸盐指数(CODMn)和悬浮固体浓度(SS)的去除量进行评价.试验表明:附着生长在多孔混凝土上的黄花水龙、杂藻、螺蛳以及微生物形成一个完整的微生态系统,6周后可使水体中TP的去除率均达到95%,TN的去除率达72.5%,CODMn去除率达到75%.提出了多孔混凝土水质净化的机理,即多孔混凝土作的多孔结构为水体中的生物提供了附着生长的空间,为水体生物多样性的增加,生态系统的完善提供了一个基础平台,其形成的生态系统具有良好水质净化效果.

不同密度梨形环棱螺对养殖池塘水质及沉积物氮、磷释放的影响

在底面半径10 cm、高35 cm的圆柱型玻璃柱中研究了不同密度梨形环棱螺（Bellamya purificata）对养殖池塘水体理化指标及沉积物氮、磷释放的影响。试验用水为养殖池塘水,平均水温30.5℃。梨形环棱螺平均体重（1.91±0.27）g、体长（1.96±0.13）cm、体宽（1.32±0.21）cm,放养密度为287.86、590.28、1 237.03 g/m2。各处理组DO均不同程度下降,且显著低于对照组（P〈0.05）,下降频率与放养密度呈显著正相关（R2=0.8568,P〈0.05）;pH则出现小幅波动,维持在7.76~9.63,且各处理组pH均显著低于对照组（P〈0.05）。梨形环棱螺对TN、NH＋4-N、悬浮物和叶绿素a去除效果显著,除NH＋4-N外,去除率均随密度的增加而增大。各密度组去除率：TN为14.41%、29.43%、32.88%,NH＋4-N为15.65%、11.38%、19.92%,悬浮物为40.22%、59.78%、73.91%,叶绿素a为1.59%、10.59%、26.60%。梨形环棱螺生物量与氨氮释放通量呈指数关系（y1=0.4147e0.0017 x1;R2=0.8221,P=0.092）,与活性磷酸盐释放通量呈多项式关系（y2=-7.6×10-7x22＋0.0013 x2-0.1141;R2=0.9913,P=0.082）。

稀土元素镧在底泥及底栖生物螺蛳中的积累

通过１４０Ｌａ放射示踪技术，研究了稀土元素镧（Ｌａ）在底泥及底栖生物螺蛳（梨形环棱螺，Ｂｅｌａｍｙａｐｕｒｉｆｉｃａｔａ）中的分布和积累作用。结果表明，稀土元素镧在底泥中较易积累，并主要以碳酸盐结合态（３６％左右）、铁锰结合态（２６％左右）及有机结合态（１４％左右）形态存在；螺蛳对镧也有一定的富集能力，其各部位镧的积累量依次为：内脏囊＞螺壳＞头足部；高浓度（１０ｍｇ／Ｌ）处理组底泥及螺蛳中镧的积累量明显高于低浓度（２ｍｇ／Ｌ）处理组，但富集能力差异不大。

采用大孔吸附树脂提纯螺蛳腹足肌酶解产物的研究

利用 DA201-C 大孔吸附树脂对螺蛳腹足肌酶解产物进行脱盐及糖原分离。结果表明,用不同浓度的乙醇进行洗脱时,洗脱组分的疏水性氨基酸含量及 ACE 抑制活性随乙醇浓度的增大而增大；依次用25%和 75%乙醇进行阶段洗脱时,脱糖率为78．59%,脱盐率为93．79%；酶解糖原比碱提糖原的相对分子质量大而纯度较低。

不同密度铜锈环棱螺和梨形环棱螺对水体环境的影响效果

[目的]弄清螺蛳改良水体的效果,并为虾蟹、甲鱼等养殖生产提供科学依据。[方法]在平均水温为22.8℃、曝气的情况下,以富营养化的池塘水作为试验用水,进行不同密度铜锈环棱螺和梨形环棱螺改善水质的研究。[结果]螺蛳对TN、TP没有显著的去除效果;投放10、20、40个铜锈环棱螺及梨形环棱螺氨氮的去除效率分别为35.39%、33.93%、29.57%和38.29%、25.69%、19.39%,对亚硝酸盐氮的去除效率分别为48.67%、36.14%、34.96%和38.93%、35.20%、33.08%。[结论]投放一定密度的铜锈环棱螺及梨形环棱螺有利于水体环境的改善,不同密度螺蛳改善水体环境的效果不同。建议与沉水植物共存,达到螺-草互利作用进而改善养殖水体生态环境的目的。

梨形环棱螺保护酶分子标志物在大运河污染评价中的应用

运用室内模拟法、样点笼内放养法和直接采样法研究京杭大运河不同污染程度环境对梨形环棱螺内脏团中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果表明:梨形环棱螺组织抗氧化保护酶系统的SOD、POD、CAT活性是指示污染的敏感指标,其监测结果与水质化学评价结果基本一致。CAT活性在临界范围内随着污染程度加深,抑制作用加强。POD活性在污染环境中被激活,但各时间段的增幅不尽相同。SOD活性变化不稳定,较适合作为短时间内的监测指标。比较而言,这3种测定保护酶分子标志物活性的试验方法以样点笼内放养法最优,直接采样法最不可取。

梨形环棱螺3个群体形态性状与体质量的相关及通径分析

为了探究梨形环棱螺各形态性状与体质量的相关性及影响体质量的因素组成,随机选取太湖野生群体、阳澄湖野生群体、江阴养殖群体共698个个体,测量梨形环棱螺壳高(SH)、壳宽(SW)、壳口高(AH)、壳口宽(AW)、体螺层高(BWH)、体质量(BW),并鉴定其性别,采用相关与通径分析方法进行分析,为梨形环棱螺人工繁育和品系选育提供理论依据和测度指标。结果表明:不同群体的壳高、壳宽、壳口高、壳口宽、体螺层高、体质量及性别比均存在显著性差异。决定系数分析表明不同群体梨形环棱螺影响体质量的主要形态性状并不相同,但不同群体中壳高对体质量的相关系数和直接作用均最大,是影响体质量的主要因素。

螺蛳腹足肌的酶解工艺

以螺蛳的腹足肌部分为研究对象,比较了几种酶对螺蛳蛋白的作用效果,选择了一种新型酶Proleather FG-F。以水解度和蛋白质得率为指标采用响应面分析法对酶解工艺进行了优化,对酶解产物的相对分子质量分布范围、游离氨基酸含量及ACE酶抑制活性等进行了分析和比较。

梨形环棱螺五种酶分子与大运河底泥重金属含量相关分析

运用样点笼内放养法,研究了京杭大运河不同污染程度环境对梨形环棱螺内脏团中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和胆碱酯酶(CHE)的影响,进行了酶活性与样点底泥重金属含量的相关分析。结果表明,梨形环棱螺组织抗氧化保护酶系统的SOD、CAT、GSH-PX和GST活性是指示污染的敏感指标,其监测结果与水化学评价结果基本一致。在10d暴露中,SOD酶活性被激活,CAT、GSH-PX和GST酶活性在污染环境中被抑制,CHE活性变化比较复杂。酶活性变化与底泥重金属的含量相关性很大。

螺蛳中几种糖类物质的提取与分析

以不同的工艺从螺蛳的软体部分中提取出多糖或糖原组分,并对其组成和结构进行了全面分析。用酶法提取螺蛳粗多糖并分析单糖组成,用碱法提取中性糖即糖原并用酶法测定其分支化结构参数,对酸性糖即糖胺聚糖进行了分离与鉴定。

五氯酚钠对梨形环棱螺的毒理效应研究

采用在体暴露试验的方法,研究了不同浓度五氯酚钠(Na-PCP)在不同暴露时间(24、48、72和96 h)下对梨形环棱螺的急性毒性,以及Na-PCP对肝脏、鳃和腹足中精氨酸激酶(AK)活性的影响。结果显示,Na-PCP对梨形环棱螺的半致死浓度为0.411 mg/L,安全浓度为0.0411 mg/L;在Na-PCP暴露下,梨形环棱螺肝脏中单位蛋白AK活性在低浓度下被诱导增长,在高浓度下则出现被抑制的现象,鳃和腹足中单位蛋白AK活性伴随Na-PCP浓度的增加而下降,表现出时间剂量效应,且腹足中下降幅度相对鳃中较大。试验结果表明AK活性可以作为指示五氯酚钠对梨形环棱螺毒理效应的生物标志物。

梨形环棱螺凝集素的初步研究

通过Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ－甲状腺球蛋白亲和层析，从梨形环棱螺Ｂｅｌｌａｍｙａｐｕｒｉｆｉｃａｔａ体内分离到的一种凝集素，不连续ＰＡＧＥ显示其为单一的蛋白质谱带．它能凝集兔、猪、鸭等动物的红细胞，但不能凝集人的Ａ、Ｂ、Ｏ及ＡＢ型血的红细胞和固定后的兔红细胞．其凝集活力可被１．０ｍｏｌ／Ｌ的乳糖、半乳糖和６０ｇ／Ｌ的甲状腺球蛋白抑制，但不能被碱性硼酸缓冲液抑制．对温度变化敏感，有较宽的最适ｐＨ范围．

低浓度铜暴露导致梨形环棱螺氧化胁迫及DNA损伤的研究

采用暴露重金属的方法,研究了不同浓度硫酸铜(Cu2+分别为0.00、0.005、0.01、0.02、0.05mg/L)在不同暴露时间(0～14d)下对梨形环棱螺(Bellamyapurificata)肝脏和鳃组织线粒体的活性氧(ROS)含量、肝脏和鳃组织中金属硫蛋白(MT)含量和DNA单链断裂程度的影响,探讨Cu2+对梨形环棱螺的氧化胁迫和DNA损伤及MT防御作用的机理。结果表明,Cu2+对梨形环棱螺肝脏和鳃线粒体ROS水平、肝脏和鳃组织DNA损伤和MT含量均有明显的影响。ROS含量在实验开始时持续上升,肝脏和鳃线粒体ROS分别在第7天(除0.005mg/L剂量组外)和第4天达到最高点,随后下降,但直到第10天时仍显著高于对照组。肝脏和鳃组织DNA单链断裂程度随Cu2+暴露剂量和暴露时间而显著增加。暴露于Cu2+后,F值迅速降低,随后,F值开始上升,在第2天时的F值达到峰值;随后DNA单链断裂程度继续加重,第5天后F值持续下降,至第10～14天时达到稳定水平。第10～14天时,肝脏组织0.005、0.01、0.02和0.05mg/L剂量组间的F值没有显著差异。MT在整个实验期间均处于诱导状态,0.01mg/L剂量组肝脏的MT在整个实验期间均被极显著地诱导(P<0.01),0.01mg/L剂量组的鳃组织MT除第10天外也被极显著诱导(P<0.01)。在暴露至第14天时,除0.05mg/L剂量组的肝脏MT外,其余均处于极显著诱导状态(P<0.01)。

反相高效液相色谱/基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分离鉴定螺蛳血管紧张素转换酶抑制肽

运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5μm o l/L,基本为单一肽组分。对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/E S I-M S)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALD I-TO F M S)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-G lu-Ile-Trp(KE IW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律。经过对两种方法分析过程的比较,认为E S I-M S可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALD I-TO F M S可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.000 1),从而可以得到确定的肽的序列。

2种壳色梨形环棱螺贝壳7种金属元素质量分数比较分析

利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)对梨形环棱螺(Bellamya purificata)青色和紫色贝壳的7种金属元素质量分数进行了比较分析。结果显示:紫色梨形环棱螺贝壳中铁(Fe)质量分数显著高于青色贝壳。青色贝壳中钾(K)、镁(Mg)、锰(Mn)的含量显著高于紫色贝壳,钠(Na)、锶(Sr)、锌(Zn)元素含量在两种壳色贝壳中差异不显著。贝壳中Fe含量和K、Mg、Mn的含量呈显著负相关,与Sr、Zn含量的相关性不显著。K、Mg、Mn、Na的4种元素含量呈显著正相关。

螺蛳腹足肌蛋白的研究

以螺蛳的腹足肌部分为研究对象,从粘度、构象变化、氨基酸组成、提取以及增溶等几个角度对其中的蛋白质组分进行了探讨。结果表明,螺蛳肉粉溶液在pH11处存在一个粘度峰值;腹足肌中蛋白质的二级结构随pH的升高会变得较为松散;可通过粉碎、超声波处理、高速分散及碱溶等多种方法增加螺蛳腹足肌中蛋白组分的溶解度。

铜仁锦江河梨形环棱螺的生物学特性研究

采用形态观测和生物统计学方法,对锦江河野生梨形环棱螺基本生物学特性进行研究,结果表明:壳高、壳宽、螺旋部长、壳口长、厣径、鲜重、壳口宽、鲜肉重、干肉重、厣重之间存在明显的相关关系。壳高与壳宽、壳高与壳口长、壳高与螺旋部高、壳高与鲜重、壳高与厣重、壳高与鲜肉重、壳高与干肉重、壳口宽与厣径的回归关系分别为:y壳宽=1.333x壳高0.784、y壳口长=1.242x壳高0.74、y螺旋部高=0.407x壳高1.126、y鲜重=0.01x壳高2.454、y厣重=3.707x壳高1.854、y鲜肉重=0.01x壳高2.288、y干肉重=2.119x壳高2.929、y厣径=0.945x壳口宽1.064,梨形环棱螺的含肉率在28.6%一35.5%之间,成螺后的净肉比例减少。通过系统聚类,得出7个样点中的梨形环棱螺可以分为上中游和下游2大类。