六味地黄丸的高效液相色谱/电喷雾电离-质谱分析

建立了高效液相色谱/电喷雾电离 质谱定性分析六味地黄丸的方法,通过2级质谱识别了其中的9种化学成分。色谱条件为:ZorbaxSB C18色谱柱;乙腈 水二元高压梯度洗脱;二极管阵列检测器,设定波长254nm;流速1mL/min。质谱条件为:Agilent离子阱质谱仪;电喷雾电离(ESI)离子源;负离子检出模式。结果表明,六味地黄丸的总离子流色谱图比紫外色谱图具有更强的特征性,以质谱作为检测器是一种很好的研究中药指纹图谱的方法。

HPLC-QAMS法同时测定白芍配方颗粒中7种活性成分的含量

目的:建立同时测定白芍配方颗粒中7种活性成分含量的高效液相色谱-一测多评法(HPLC-QAMS)。方法:采用HPLC法,以芍药苷为内参,分别计算其与没食子酸、没食子酸甲酯、儿茶素、芍药内酯苷、五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷的相对校正因子(RCF),通过RCF计算白芍配方颗粒中上述6种成分的含量(计算值),同时采用外标法测定7种成分的含量(实测值),比较计算值与实测值的差异。色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 ml·min^-1,检测波长为230 nm(芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷和苯甲酰芍药苷)、270 nm(没食子酸、没食子酸甲酯和五没食子酰葡萄糖),柱温为30℃,进样量为10μl。结果:芍药苷、没食子酸、没食子酸甲酯、儿茶素、芍药内酯苷、五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷检测质量浓度的线性范围分别为40.01~720.20,12.03~216.50,0.17~3.06,0.66~16.59,26.43~475.70,4.02~72.41,1.99~35.82μg·ml^-1(r为0.9993~0.9998);平均加样回收率分别为98.5%,98.4%,98.4%,98.6%,98.4%,98.4%,98.5%(RSD为0.06%~0.21%,n=9)。芍药苷、没食子酸、没食子酸甲酯、儿茶素、芍药内酯苷、五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷的RCF分别为1.000,1.589,1.950,1.316,0.609,0.833,0.835,其计算值和实测值之间差异无统计学意义。结论:该方法简单、有效、结果准确、节约成本,可用于白芍配方颗粒中上述7种活性成分的同时测定。

RP-HPLC法测定逍遥丸(水丸)中芍药苷、苯甲酸和苯甲酰基总苷

目的建立反相高效液相色谱法定量测定8家企业生产的逍遥丸中芍药苷、游离苯甲酸和苯甲酰基总苷。方法逍遥丸甲醇提取液分析采用Agilent Eclipse XDB C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,测定芍药苷和苯甲酸的流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）,梯度洗脱;苯甲酰基总苷以总苷碱水解为苯甲酸计算,色谱条件同上。结果芍药苷和游离苯甲酸进样量分别在0.060 8-0.760μg（r=0.999 8）、0.009 6-0.120 0μg（r=0.999 7）范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率（n=6）为97.3%（RSD=2.2%）和97.2%（RSD=2.2%）;苯甲酰基总苷在0.020 32-0.304 8μg范围内线性关系良好（r=0.999 6）,平均回收率（n=6）为96.6%（RSD=2.8%）。结论建议增加苯甲酰基总苷的定量测定可有助于更好地控制逍遥丸的内在质量。

四川牡丹皮UPLC指纹图谱研究及4种成分的同时测定

建立四川牡丹皮的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和对照指纹图谱,并同时测定样品中的4种成分的含量,为了解四川牡丹皮化学成分特征提供方法和依据。采用Ultimate UPLC LP-C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%(体积分数)甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流量0.2 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm,进样量2μL。建立四川牡丹皮的UPLC指纹图谱并标定共有峰18个,对其中4个色谱峰进行指认。17个样品指纹图谱相似度在0.765~0.989之间,丹皮酚、芍药苷、丹皮酚原苷和苯甲酰芍苷4种成分含量分别在6.97~24.0 mg/g、14.8~36.9mg/g、4.05~73.5 mg/g、4.83~18.0 mg/g之间。2个市售安徽产牡丹皮指纹图谱与四川牡丹皮相比,其相似度低,四川牡丹皮成分数量和含量均更高。UPLC指纹图谱结合多成分含量测定能够反映四川牡丹皮化学成分特征,方法重现性好、简便可行、快速准确,可为四川牡丹皮和其他牡丹皮化学成分特征差异提供研究方法。

苯甲酰芍药苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤保护作用及分子机制研究

目的探讨苯甲酰芍药苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能分子机制。方法将75只SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分成五组,每组15只:空白对照组(生理盐水200μL)、ALI组(2mg/kg LPS 100μL+生理盐水100μL)、阳性对照组(2mg/kg LPS100μL+血必净注射液100μL)、苯甲酰芍药苷低剂量组(2mg/kg LPS 100μL+2.5mg/kg苯甲酰芍药苷100μL)、苯甲酰芍药苷高剂量组(2mg/kg LPS 100μL+5.0mg/kg苯甲酰芍药苷100μL),通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ALI小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测肺组织IκB激酶(IKKβ)/核因子κB(NF-κB)表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC(RT-PCR)检测ALI小鼠肺组织mi R-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测mi R-520c-3p靶基因;A549转染mi R-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比[(5.64±0.14)、(4.75±0.11)比(6.21±0.64),P均<0.05];ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷能明显降低ALI小鼠肺组织TNF-α、IL-6水平[TNF-α:(20.68±1.06)pg/m L、(7.34±0.37)pg/m L比(32.27±1.89)pg/m L,P均<0.05;IL-6:(29.16±2.36)pg/m L、(14.26±1.06)pg/m L比(48.26±3.19)pg/m L,P均<0.05];WB结果显示,与ALI组比较,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RTPCR结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷有效促进mi R-520c-3p在ALI中的表达[(0.51±0.13)、(0.74±0.09)比(0.34±0.11),P均<0.05];Targetscan预测结果显示,mi R-506-3p直接靶向NF-k B p65亚基RELA基因3'UTR序列;补救实验显示,与苯甲酰芍药苷组比较,苯甲酰芍药苷+mi R-520c-3p inhibitor组TNF-α、IL-6 m RNA水平明显升高[TNF-α:(3.94±0.49)比(1.55±0.36),P<0.05;IL-6:(6.95±1.21)比(2.11±0.42),P<0.05]。结论苯甲酰芍药苷能有效缓解LPS引起的小鼠ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调mi R-520c-3p表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。

基于指纹图谱结合化学模式识别法对不同种质白芍质量评价

目的 采用指纹图谱与化学模式识别方法,以质量标志物(quality marker,Q-Marker)为指标,评价不同种质白芍Paeoniae lactiflora的质量。方法 采用HPLC法,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1m L/min,检测波长230 nm;绘制40批白芍样品的指纹图谱,结合相似度分析、聚类分析(cluster analysis,HCA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法(orthogonal partial least square,OPLS-DA)等化学模式识别技术,对不同种质的白芍样品进行质量评价。结果 从质量传递与溯源,植物亲缘性及化学成分的特有性、有效性及可测性等方面对白芍Q-Marker的选择进行了分析,推测白芍中芍药苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷、儿茶素、没食子酰芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖和没食子酸可作为白芍的Q-Marker。以40批白芍HPLC指纹图谱标定白芍的Q-Marker,相似度在0.892~1.000;聚类分析初步区分出了不同种质的白芍,四川中江、浙江杭州和河北安国的白芍样品质量较为相近;PCA和OPLS-DA结果显示,筛选出的Q-Marker可作为不同种质白芍的特征化学成分;对Q-Marker进行含量测定,结果不同种质样品间差异较大;TOPSIS分析结果表明山西运城的白芍质量排名最高,人工培育的杂花白芍质量排名最低。结论 通过指纹图谱结合化学模式识别技术,以白芍Q-Marker为评价指标能较为全面地反映白芍的质量,可以为白芍优质种质资源的选育和育种提供参考。

HPLC波长切换法同时测定白芍饮片中9个成分的含量

目的:建立高效液相色谱波长切换法对白芍中9个成分(没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚)进行分析。方法:采用Phenomsil ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长为267 nm(0～12 min,测定没食子酸)、258 nm(12～30 min,测定氧化芍药苷、儿茶素)、230 nm(30～38 min,测定芍药内酯苷、芍药苷)、223 nm(38～42 min,测定苯甲酸)、275 nm(42～56 min,测定1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖)、230 nm(56～70 min,测定苯甲酰芍药苷、丹皮酚)。结果:白芍中9个成分没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚进样量分别在0.13～0.87μg(r=0.9991),0.13～0.85μg(r=0.9991),2.50×10-3～17.50×10-3μg(r=0.9993),0.26～1.78μg(r=0.9995),0.46～3.20μg(r=0.9991),0.83×10-3～5.77×10-3μg(r=0.9997),0.28～1.92μg(r=0.9994),11.00×10-3～77.00×10-3μg(r=0.9994),5.88×10-3～41.12×10-3(r=0.9994)μg范围内呈良好线性关系;平均回收率(n=5)分别为98.7%,96.7%,98.0%,97.8%,98.9%,98.3%,97.6%,96.7%,96.7%。结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于白芍的质量控制。

微波技术在桂枝茯苓胶囊提取过程中的应用

该文在中试规模下考察微波技术在桂枝茯苓胶囊提取过程中的最佳条件,首先,对各因素进行单因素试验考察,确定各因素大致的影响趋势及范围;其次,以L9(34)正交试验进行优化,检测药液中没食子酸、芍药苷、苯甲酸、肉桂酸、苯甲酰芍药苷、苦杏仁苷的含量,分别计算其提取率并进行综合评价,以其作为提取效果的评判依据。微波提取桂枝茯苓胶囊的最佳工艺为按液固比6∶1加入饮用水,设定微波功率6 k W,提取20 min,提取3次。该工艺经3批放大试验验证,结果稳定,且相比常规煎煮提取具有节能、省时、高效的优势。以上结果显示该优化工艺提取效率高,且稳定可行。

HPLC波长切换法同时测定大黄、牡丹皮药对提取物中11个成分的含量

目的:建立高效液相色谱波长切换法对大黄、牡丹皮药对提取物中11个成分(没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)进行分析。方法:采用Phe-nomsil ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长为267 nm(0～20 min,没食子酸)、258 nm(20～30 min,氧化芍药苷)、230 nm(30～50 min,芍药苷)、274 nm(50～80 min,1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚)、230 nm(80～90 min,苯甲酰芍药苷)、254 nm(90～125 min,芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚),柱温30℃。结果:大黄、牡丹皮药对中11个成分没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚进样量分别在0.365～3.65μg(r=0.9991)、0.0349～0.349μg(r=0.9995)、0.106～1.06μg(r=0.9993)、0.215～2.15μg(r=0.9996)、0.259～2.59μg(r=0.9994)、0.0758～0.758μg(r=0.9993)、0.0846～0.846μg(r=0.9993)、0.0581～0.581μg(r=0.9993)、0.109～1.09μg(r=0.9992)、0.164～1.64μg(r=0.9991)、0.0424～0.424μg(r=0.9995)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=5)分别为100.1%、98.4%、99.5%、99.3%、99.4%、98.8%、99.5%、99.0%、99.1%、98.8%、99.1%。结论:该方法可用于大黄、牡丹皮药对提取物的质量控制。

HPLC波长切换法同时测定牡丹皮中6个成分的含量

目的:建立高效液相色谱波长切换法对牡丹皮中6个成分(没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷)进行分析。方法:采用Phenomsil ODS(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长为267 nm(0～20 min没食子酸)、258 nm(20～30 min氧化芍药苷)、230 nm(30～50 min,芍药苷)、274 nm(50～80 min 1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚)、230 nm(80～90 min苯甲酰芍药苷),柱温30℃。结果:牡丹皮中6个成分没食子酸、氧化芍药苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、丹皮酚、苯甲酰芍药苷进样量分别在0.109 4～1.094μg(r=0.999 5),0.034 86～0.348 6μg(r=0.999 5),0.212 4～2.124μg(r=0.999 1),0.214 5～2.145μg(r=0.999 6),0.323 5～3.235μg(r=0.999 4),0.075 84～0.758 4μg(r=0.999 3)与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=6)分别为98.7%,98.8%,99.7%,98.3%,98.9%,99.2%。结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于牡丹皮的质量控制。

配伍比例及配伍组分对芍药甘草汤中9种药效组分的影响

目的:建立芍药甘草汤中9种药效组分分析方法,研究配伍比例及配伍组分对芍药甘草汤药效组分的影响,为建立与临床疗效对应的中药质量标准提供科学依据。方法:以不同配伍比例及不同配伍组分的芍药甘草汤为载体,以经方芍药甘草汤(《伤寒论方》)作对照,按照汤剂制备供试品,采用HPLC-DAD多波长法测定芍药甘草汤中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷、甘草酸(230 nm),甘草苷、甘草素(276 nm),异甘草苷、异甘草素(360 nm)共9种药效组分的含量。结果:不同配伍比例的芍药甘草汤中9种药效组分总量(mg·m L-1)在醋白芍-炙甘草(3 g∶3 g)、(6 g∶6 g)、(12 g∶12 g)中相等且最高,其余依次为在醋白芍-炙甘草(9 g∶12 g)、(12 g∶9 g)、(6 g∶12 g)、(3 g∶12 g)、(12 g∶6 g)、(12 g∶3 g)中;不同配伍组分的芍药甘草汤中9种药效组分总量(mg·m L-1)依次为在醋白芍-炙甘草(12 g∶12 g)、酒白芍-炙甘草(12 g∶12 g)、炒白芍-炙甘草(12 g∶12 g)、醋白芍-生甘草(12 g∶12 g)、焦白芍-炙甘草(12 g∶12 g)、酒白芍-生甘草(12 g∶12 g)、炒白芍-生甘草(12 g∶12 g)、焦白芍-生甘草(12 g∶12 g)中。结论:1配伍比例、配伍组分相同,药效组分相同;2配伍比例相同但配伍组分不同,药效组分不同;3配伍组分相同、配伍比例越接近1∶1,药效组分含量越高;4配伍比例相同时,对药效组分的影响程度为醋白芍>酒白芍>炒白芍>焦白芍,炙甘草>生甘草;5配伍组分相同时,对药效组分的影响程度为炙甘草>醋白芍。研究结果说明:配伍比例和配伍组分不同,是不同的药物,其药效组分质量标准不同。

指纹图谱结合灰色关联度分析法对不同产地赤芍质量的评价研究

目的研究不同产地赤芍的指纹图谱,测定其中没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷的含量并对其进行系统聚类,应用灰色关联度分析产地与含量的关系,为赤芍的质量评价提供参考。方法采用高效液相色谱法构建21个不同产地赤芍药材指纹图谱,并利用主成分分析及系统聚类分析对测定结果进行分类,灰色关联度法处理各指标性成分,计算其相对关联度。结果建立了21个产地赤芍的HPLC指纹图谱,标定11个共有峰,指认其中5个(没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、苯甲酰芍药苷)共有峰,北赤芍相似度均大于0.9,川赤芍相似度均小于0.9,主成分分析结合聚类分析将其分为二类,灰色关联度分析结果显示相对关联度(ri)最大的为甘肃陇南,其次为四川甘孜。结论不同产地赤芍具有较大差异,通过建立指纹图谱,主成分结合系统聚类分析和灰色关联度分析方法对21个产地赤芍综合评价,为赤芍质量评价提供科学依据。

不同产地白芍标准煎液的指纹图谱及4种单萜苷类成分含量测定

目的建立不同产地白芍饮片标准煎液的质量评价方法,以其分析不同产地白芍饮片的差异性。方法根据标准煎液的制备要求,制备15批不同产地的白芍饮片标准煎液,采用HPLC建立指纹图谱,同时测定氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷成分含量以及转移率、标准煎液出膏率,并以标准煎液的含量测定结果对所有样品进行方差分析。结果15批不同产地白芍标准煎液的出膏率范围为15.39%~27.81%,平均出膏率为23.15%,标准偏差为4.44%;氧化芍药苷含量范围为0.015%~0.046%,转移率为70.04%~129.26%;芍药内酯苷含量范围为0.315%~1.150%,转移率为70.77%~119.80%;芍药苷含量范围为1.857%~2.522%,转移率为67.84%~99.16%;苯甲酰芍药苷含量范围为0.051%~0.172%,转移率为56.11%~88.00%;指纹图谱包含共有峰14个,标定4个,相似度>0.97。结论不同产地白芍饮片和标准煎液的成分基本一致,白芍标准煎液中芍药苷、苯甲酰芍药苷无差异,氧化芍药苷、芍药内酯苷有差异。

不同生长年限牡丹皮指纹图谱研究

目的:建立牡丹皮HPLC指纹图谱,并测定不同生长年限牡丹皮中丹皮酚、芍药苷、没食子酸、氧化芍药苷及苯甲酰芍药苷含量,为牡丹皮药材的质量评价提供依据。方法:采用Diamonsil Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%甲酸溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml/min;检测波长230 nm(芍药苷、苯甲酰芍药苷)、267 nm(没食子酸)、258 nm(氧化芍药苷)、274 nm(丹皮酚);柱温25℃。将色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012A版),对不同年限的牡丹皮进行相似度评价;峰面积导入SPSS软件进行聚类分析,从树状图上判断聚类效果。结果:所建立的指纹图谱有23个共有峰,指认了其中5个指标成分,分别为丹皮酚、芍药苷、没食子酸、氧化芍药苷及苯甲酰芍药苷;不同年限的栽培牡丹皮相似度在0.850~0.991。该方法具有良好的线性关系(r≥0.9995),精密度、稳定性、重复性试验的RSD<1.6%(n=6)。不同生长期对5种化合物的浓度有明显影响。结论:HPLC指纹图谱结合化学计量学方法可评价和鉴别不同年限的牡丹皮,为牡丹皮药材的采收、开发、评价等提供参考。

基于一测多评法对白芍中5种化学成分质量控制研究

目的:建立同时测定白芍中5种化学成分含量的一测多评法(quantitative of multi-component with a single-marker,QAMS)。方法:采用高效液相色谱法,SunFire?C18(4.6 mm×250.0 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈(A)-(体积分数)0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,检测波长230 nm,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃。以芍药苷为内标物,计算没食子酸、芍药内酯苷、1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖和苯甲酰芍药苷的相对校正因子?i/s值。分别考察相对校正因子对不同色谱柱、仪器、柱温、流速、实验人员、流动相pH和检测波长的耐用性。比较外标法和QAMS法测定的40批白芍样品中芍药苷等5种化学成分含量,验证QAMS法的准确性和可行性。结果:不同检测波长(230±2)nm对相对校正因子?β-PGG/芍药苷和?没食子酸/芍药苷的影响及流动相磷酸水的体积分数(0.01%~0.10%)对?β-PGG/芍药苷的影响均十分明显(RSD>5.0%),其他因素对各相对校正因子影响不大(RSD<5.0%);相对校正因子的重复性和耐用性良好(RSD<5.0%);相对校正因子?没食子酸/芍药苷=2.16,?芍药内酯苷/芍药苷=0.81,?β-PGG/芍药苷=2.17,?苯甲酰芍药苷/芍药苷=1.92。8批趁鲜切制饮片和32批润切饮片中5种化学成分的QAMS含量值与外标实测值之间相对偏差均<5.0%,无明显差异。结论:以芍药苷为内标物,同时测定白芍中没食子酸、芍药内酯苷、1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖和苯甲酰芍药苷等5种成分含量的一测多评法重复性好,结果准确,可为白芍饮片的质量控制提供参考。