GP1BA基因复合杂合变异致Bernard-Soulier综合征1例报告

目的分析Bernard-Soulier综合征(BSS)的临床及遗传学特征。方法回顾分析1例确诊为BSS患儿的临床和分子遗传学检测资料。结果患儿,男,5岁,自新生儿期就出现血小板计数减少,平时血小板计数维持在(25~40)×10^(9)/L。丙种球蛋白与激素治疗效果不佳。血小板膜糖蛋白Ⅰbα(GPⅠbα)表达水平为42.4%,显著低于正常水平。全外显子测序检测到患儿GP 1BA基因存在2处变异,c.987G>A和c.523_525delAAC,经Sanger家系验证变异分别来源于父母,构成复合杂合变异。结论c.523_525delAAC变异位点尚未见报道,拓展了BSS基因变异谱。

15例遗传性血小板膜糖蛋白缺陷疾病临床和基因突变分析

目的探讨遗传性血小板膜糖蛋白(GP)缺陷疾病临床特征和发病机制。方法采用血小板聚集试验观察血小板对各种诱聚剂的反应,流式细胞术检测血小板膜GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ、αⅡb/β3复合物的含量;应用PCR扩增与DNA直接测序技术进行GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ、αⅡb/β3复合物基因突变分析,同时进行100名健康对照人群相关基因检测并结合千人基因组资料以排除基因多态性。结果 4例大血小板综合征(BSS)患者血小板数减少,血小板体积巨大,对瑞斯托霉素(RIS)诱导的聚集显著降低,对二磷酸腺苷(ADP)诱聚剂反应正常,血小板膜糖蛋白GPⅠbα表达量严重降低;11例血小板无力症(GT)患者,血小板计数均正常,对ADP诱聚剂反应低下,而对RIS反应基本正常。流式细胞仪检测结果显示,Ⅲ型GT 1例,Ⅱ型GT 5例,Ⅰ型GT 5例。基因测序共发现16种突变,其中GPⅠbα基因突变c.G987 A、c.1480ins A,αⅡb基因突变c.C2870 T、c.C2330 A、c.T2597 G为新的突变。结论在BSS和GT中,血小板膜糖蛋白异常与致病基因缺陷有关,出血症状严重程度可能受多种因素的影响。

糖蛋白IX基因Ala 139→Thr突变导致的巨大血小板综合征

目的:对1例有血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb/Ⅸ缺失的巨大血小板综合征(BSS)患者的GPⅠb/Ⅸ的基因进行系统的研究。方法:用PCR扩增GPⅠbα.GPⅠbβ与GPⅨ基因全长编码序列并做DNA序列分析。用限制性内切酶HPYCH4Ⅲ对GP Ⅸ的基因片断做酶切位点分析。用定点诱变技术制备突变质粒并通过脂质体转染技术转染至中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。用流式细胞术比较野生型与突变CHO细胞表面的GPⅠb/Ⅸ表达。结果:在GP Ⅸ cDNA的688 bp位置发现G→A突变,导致CPⅨ跨膜区139 Ala(GCC)被Thr(ACC)取代。该突变为一种国际上尚未报道的BSS新的基因突变。限制性酶切位点分析显示患者为纯合子,而家庭的其它成员为杂合子。野生型细胞表面有大量的GPⅠb/Ⅸ,但突变型细胞几乎无GPⅠb/Ⅸ表达。结论:研究表明本例BSS患者的发病机理为GP Ⅸ Ala139(GCC)→Thr(ACC)突变,并提出GP Ⅸ跨膜区结构对维持GPⅠb/Ⅸ在血小板正常表达与可能中的重要意义。

巨大血小板综合征1例并文献复习

目的:探讨巨大血小板综合征的临床特征和诊断要点。方法:报道1例巨大血小板综合征,通过详细采集病史、血常规、末梢血涂片、流式细胞术等检查进行诊断,聚合酶链反应和基因序列分析血小板膜表面糖蛋白Ⅰb和Ⅸ基因,并对其直系亲属进行相关检查。结果:根据父母为近亲结婚,患者自幼出血、血小板减少、血小板形态巨大以及血小板膜表面糖蛋白Ⅰb-Ⅸ-Ⅴ(GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ)复合物表达低下诊断巨大血小板综合征。但是未发现血小板膜表面糖蛋白Ⅰb和Ⅸ基因缺陷。其父母、胞弟无出血倾向,血常规、血小板膜表面糖蛋白Ⅰb和Ⅸ基因以及GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ表达正常。结论:巨大血小板综合征为少见的常染色体隐性遗传病,流式细胞术检测血小板膜表面糖蛋白Ⅰb-Ⅸ-Ⅴ复合物表达是诊断的重要方法,基因转录调控水平异常可能是本例患者GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ表达减低的原因。

巨大血小板综合征GP Ⅸ基因纯合突变1例并文献复习

目的报道1例巨大血小板综合征GPⅨ基因纯合突变患儿,并探讨其临床表现及实验室检查特点,梳理诊断思路和治疗方法。方法回顾性分析1例巨大血小板综合征GPⅨ基因突变患儿的临床特征、实验室检查、基因测序及诊治经过,并复习相关文献和讨论。结果 14岁女性患儿,表现为反复鼻衄、月经量大、血小板减少、血小板体积增大、血红蛋白降低。GPⅨ基因纯合突变:[c.105G>A,p.35W>X],父母热点基因突变验证显示父亲为杂合携带者,母亲不存在相应位点突变。结论本研究患儿是GPⅨ基因突变、血小板膜糖蛋白缺陷所致的出血疾病,早期诊断、早期预防和正确治疗利于患儿健康成长。

血小板最大聚集率和血栓最大振幅在儿童血小板无力症和巨大血小板综合征中的临床应用

目的探讨不同致聚剂诱导的血小板最大聚集率(MAR)和血栓弹力图(TEG)参数血栓最大振幅(MA)在血小板无力症(GT)和巨大血小板综合征(BSS)中的诊断价值。方法选取2014年7月—2021年6月首都医科大学附属北京儿童医院24例GT患儿(GT组)和13例BSS患儿(BSS组),以20例凝血因子缺乏症患儿作为对照组。采用光学比浊法(LTA)和TEG比较各组血小板聚集功能的差异。结果GT组二磷酸腺苷(ADP)、胶原蛋白(Col)、花生四烯酸(AA)诱导的MAR和MA值均显著低于对照组和BSS组(P<0.01);瑞斯托霉素(Risto)诱导的MAR显著低于对照组(P<0.01);BSS组Risto诱导的MAR显著低于对照组和GT组(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,各组4种致聚剂诱导的MAR与MA值均无相关性(P>0.05)。结论联合多种致聚剂检测MAR可更好地反映伴血小板功能障碍的先天性出血性疾病患儿血小板聚集功能,MAR对GT和BSS的诊断和鉴别更有意义,MA值不适合作为BSS的诊断依据。

流式细胞术诊断巨大血小板综合征

目的对1例初步诊断为巨大血小板综合征(BSS)患者进行确诊。方法用流式细胞术(FCM)检测了患者血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb、Ⅲa和Ⅸ的含量,并与10名正常人的检测结果作了比较。结果 BSS 患者血小板膜 GP Ⅰ b 和Ⅸ的含量,仅相当于正常人的3.12%和0.55%,而 GP Ⅲ a 的水平却为正常人含量的167.71%。患者血液中平均血小板体积为23.2f1,巨大血小板(>24f1)占12%。血涂片中巨大血小板占9%。结论患者符合 BSS 的诊断。FCM 是一种简便、快速、准确的 BSS诊断方法,尤其有助于不典型 BSS 患者的诊断。

巨血小板综合征糖蛋白Ⅸ基因异常的分子生物学研究

目的 探讨糖蛋白 (GP)Ⅸ基因点突变G2 113→A在导致巨血小板综合征 (BSS)中的意义。方法 用限制性内切酶分析患者和其直系亲属以及 4 0名正常人等位基因 ;采用定点诱变技术构建含有GPⅨ点突变G2 113→A的质粒PD ⅨG2 113A ;用含有GPⅠbα ,GPⅠbβ和GPⅨ或GPⅨ突变型全长编码序列的质粒对中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞共转染 ;流式细胞仪检测转染后的CHO细胞表面GP的表达 ;免疫染色和免疫印迹分析转染后的CHO细胞胞浆中GPⅠbα和GPⅨ的表达。结果 先证者为纯合子 ,母亲和兄长均为杂合子 ;突变型CHO细胞膜上GPⅨ和GPⅠbα的表达显著减少 ,但大量存在于细胞胞浆中。结论 本例BSS患者的发病机制为GPⅨAla139(GCC)→Thr(ACC)突变。该突变不影响GPⅠb Ⅸ在细胞内的合成与组装 ,但影响其在细胞膜表面的锚定与表达。

巨大血小板综合征1例报告并文献复习

巨大血小板综合征(Bernard-Soulier syndrome,BSS)是一种罕见的遗传性出血性疾病,通常呈常染色体隐性遗传,极少数呈常染色体显性遗传[1],临床表现以出血为主,如皮肤紫癜、鼻出血、牙龈出血及创伤后出血等。其分子基础为编码血管假性血友病相关因子(vWF)受体的血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰb-Ⅸ-Ⅴ复合物的合成或表达缺陷,以及该复合物的重要组成成分GPⅠbα、GPⅠbβ和GPⅨ基因缺陷,使血小板不能黏附于受损的血管壁,以及对凝血酶的反应减弱,导致出血倾向〔2〕。

遗传性血小板功能障碍的诊断和治疗现状

遗传性血小板功能障碍(IPFD)是一种罕见的遗传性疾病,临床上以不同程度的出血倾向伴或不伴血小板减少为主要表现。以往由于实验室缺乏标准化评估体系,IPFD的诊断及分类困难,导致该类疾病的发病率可能被低估。目前,结合临床表现和实验室检测及二代测序技术,有助于及时、准确地诊断这类复杂的出血性疾病,并给予及时的病情评估及治疗指导。但目前IPFD仍无有效的靶向治疗措施。现主要介绍IPFD的诊断及治疗现状。