猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达

目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。

冷冻干燥对长双歧杆菌损伤作用的研究

冷冻干燥是乳酸菌和益生菌干燥的主要方式,冷冻和干燥2个过程都会影响菌体细胞的存活率,探讨冷冻和干燥过程对长双歧杆菌的损伤作用有利于指导高存活性益生菌粉的生产。采用透射电镜观察菌体在冷冻干燥过程中的微结构,通过溢出胞外的β-半乳糖苷酶活性评价冷冻和干燥后细胞膜通透性的变化,通过测定冷冻和干燥后胞内Na^+和K^+浓度的变化研究离子效应的影响。研究结果表明,长双歧杆菌在冷冻干燥过程中的形态、细胞膜通透性和胞内离子浓度变化程度随冻结时间的延长而加剧;冷冻干燥过程使菌体出现细胞质浓缩、质壁分离、菌体皱缩以及破损现象;冷冻干燥使细胞膜通透性增大,使胞内Na^+、K^+浓度显著下降,并伴随比例失调。

痛泻要方对肝郁脾虚型IBS-D大鼠肠道菌群的干预效果

目的:探讨肠道菌群与IBS-D的关系,观察痛泻要方和双歧杆菌三联活菌的干预效果。方法:将24只雄性SD大鼠随机分为空白组6只、造模组18只。造模组采取夹尾+番泻叶灌胃法建立肝郁脾虚型的IBS-D大鼠模型。建造模型成功后第15天将造模组随机分成模型组、双歧杆菌三联活菌组与痛泻要方组各6只;双歧杆菌三联活菌组与痛泻要方组连续给药14天。用药结束后取各组大鼠的粪便,使用16SrDNA宏基因扩增法分析4组大鼠的肠道菌群。结果:空白组大鼠肠道菌群与模型组大鼠肠道菌群存在显著差异;模型组大鼠肠道菌群中有12个科属丰度显著升高,双歧杆菌三联活菌组与痛泻要方组大鼠肠道内大部分菌科及菌属丰度升高不明显,且痛泻要方组情况更好。肠道菌群中各菌种之间能够相互影响,其中与双歧杆菌相关性较强的菌属共9个,其中负相关2个,正相关7个。结论:IBS-D大鼠存在肠道菌群失调,痛泻要方能显著改善IBS-D大鼠肠道菌群紊乱,提高肠道定植抗力,且效果优于双歧杆菌三联活菌片。

双歧杆菌介导的福氏志贺菌Bb-ipaB疫苗免疫机制研究

目的探讨双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)介导的福氏志贺菌(Shigella flexneri)Bb-ipaB疫苗的免疫机制。方法雌性BALB/c小鼠随机均分为3组:疫苗组(Bb-ipaB)、Bb组和PBS组。每周灌胃免疫1次,共4次。未次免疫1周后检测小鼠血清特异性IgG、IgE、IgA及小肠黏液sIgA;取小鼠胸腺和脾脏,称重,计算胸腺和脾指数;采用MTT法检测脾细胞增殖活性,采用ELISA法检测脾细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果疫苗组小鼠血清特异性IgG、IgE、IgA,小肠黏液sIgA,胸腺脾指数,脾细胞增殖能力及脾细胞IFN-γ和IL-4水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论 Bb-ipaB疫苗免疫可刺激小鼠产生高水平的特异性抗体和细胞因子,并能促进脾细胞增殖,具有开发潜能和研究价值。

双歧杆菌三联活菌胶囊对幽门螺旋杆菌感染的消化性胃溃疡的临床疗效研究

目的分析双歧杆菌三联活菌胶囊治疗消化性胃溃疡的临床疗效。方法选取医院2014年12月-2016年12月收诊的幽门螺旋杆菌(Hp)感染消化性胃溃疡患者593例为研究对象。随机分为常规治疗组306例,联合治疗组287例,常规治疗组采用传统三联疗法,联合治疗组采用双歧杆菌三联活菌胶囊治疗。记录治疗前后两组患者的胃液pH、静脉血降钙素原、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α的变化,治疗后进行胃镜检查溃疡愈合情况并统计不良反应,再次进行13 C尿素呼气试验检测Hp根除率。结果治疗前,两组胃液pH、静脉血降钙素原、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α水平无显著差异,常规组治疗后胃液pH为(4.62±0.70),显著低于联合治疗组(6.37±0.95),静脉血降钙素原、白细胞介素8和肿瘤坏死因子α水平分别为(43.57±14.17)mg/L、(49.29±16.74)μg/L和(38.22±22.06)ng/L显著高于联合治疗组(26.76±8.21)mg/L、(24.67±9.48)μg/L和(27.35±12.60)ng/L(P均<0.05);常规治疗组治愈率为35.62%显著低于联合治疗组60.98%(P<0.05);常规治疗组患者的严重不良反应发生率为4.58%显著高于联合治疗组2.44%(P<0.05);常规治疗组的根除率为38.56%显著低于联合治疗组82.23%(P<0.05)。结论使用双歧杆菌三联活菌胶囊治疗Hp感染的消化性胃溃疡,不良反应发生率低,临床疗效和根除率明显优于传统的三联疗法。